程方明
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：西南民族大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 基因C型鸭甲肝病毒竞争ELISA抗体检测方法的建立被引量：4
- 2015年
- 为建立检测基因C型鸭甲肝病毒（DHAV-C）血清抗体的方法,本研究以纯化的DHAV-C作为包被抗原,抗DHAV-C单克隆抗体（MAb）5E3-9与待检血清竞争结合抗原,采用方阵法确定包被抗原、MAb及待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化,建立了DHAV-C抗体的竞争ELISA检测方法。该方法仅对DHAV-C血清检测为阳性,与DHAV-A、鸭圆环病毒、鸭乙型肝炎病毒等相关病原的鸭阳性血清无交叉反应。敏感性试验表明,标准阳性血清1：128倍稀释时,检测结果仍为阳性,比中和试验灵敏性更高。批内批间变异系数分别为4.64%~5.21%和6.02%~8.68%,具有良好的重复性。与中和试验比较,阳性符合率为100%（15/15）,阴性符合率为77.8%（14/18）。本研究基于纯化的DHAV-C及其特异性MAb建立的MAb竞争ELISA检测方法可以用于DHAV-C流行病学调查以及抗体的检测。
- 何美琳张焕容程方明杨晓农岳华
- 关键词：单克隆抗体竞争ELISA抗体检测
- 猪圆环病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2013年
- 为了研究猪圆环病毒2型（PCV-2）在PK15细胞中的动态增殖，试验根据PCV-2ORF2基因保守区设计特异性引物，经PCR扩增和克隆目的基因制备阳性质粒，建立了基于SYBRGreenI的PCV-2荧光定量PCR方法，并利用该方法检测PCV-2在PK15细胞上的动态增殖情况。结果表明：建立的荧光定量PCR方法在2．0×10^2～2．0×10^9拷贝／IxL内有良好的线性关系，其相关系数为0．9989，扩增效率为99．50％；该方法的最低检测限为20拷贝／止，检测不出猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪细小病毒等；PCV-2感染PK15细胞后84小时病毒量达最高，为1．2×10^7拷贝／μL，该时间点为收获病毒的最佳时间。说明所建立的荧光定量PCR方法特异性好，灵敏度高，稳定可靠。
- 程方明张焕容岳华
- 关键词：PK15细胞病毒增殖
- 基因C型鸭甲肝病毒单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定被引量：1
- 2014年
- 为制备基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)单克隆抗体(MAb),本研究根据DHAV-C ORF编码氨基酸序列与基因A型DHAV(DHAV-A)相应序列比对结果,利用生物信息学软件筛选位于DHAV-C ORF编码蛋白序列上的不同抗原表位,合成5条十肽表位序列,分别与KLH载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,经细胞融合筛选获得5株稳定分泌抗DHAV-C MAb杂交瘤细胞株。Western blot显示,5株MAb均能够与DHAV-C发生特异性反应,其中5H24-9、3E18-4和5E3-9 3株MAb不与DHAV-A、鸭瘟病毒、新城疫病毒和禽流感病毒反应,为DHAV-C的特异性MAb,同时也证明与这3株MAb结合的十肽序列为DHAV-C的抗原表位。这3株MAb亚类分别为IgG2b、IgG1和IgG2b。MAb的制备为建立DHAV-C的检测方法和致病机理奠定了基础。
- 程方明张焕容洪杰王远微岳华汤承
- 关键词：抗原表位单克隆抗体ELISA
- 基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100,HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000,封闭液为含10%脱脂乳的0.01mol·L-1 PBS,37℃封闭2h,血清稀释液为含1%BSA的PBS,抗体反应时间为60min,酶标羊抗鸭IgG反应时间为30min,底物作用时间为15min,临界值为OD450nm≥0.474。该方法重复性好,批内变异系数为2.03%~2.95%,批间变异系数为3.28%~7.38%,与鸭圆环病毒(DUCV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应,而与基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)阳性血清有交叉反应,表明该方法可以作为检测DHAV-C和DHAV-A抗体的通用ELISA方法。与中和试验相比,阳性血清检测符合率为80%,阴性血清检测符合率为100%。初步临床应用表明:该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测。本研究基于DHAV-C VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于基因A型和C型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测。
- 杨发龙张焕容程方明岳华汤承
- 关键词：VP1蛋白间接ELISA抗体检测
- 成都市区犬猫狂犬病病毒和弓形虫感染的调查被引量：5
- 2012年
- 为了解四川省成都市区家养犬、猫狂犬病病毒及弓形虫的感染情况,采用商品化狂犬病病毒和弓形虫抗原快速检测试纸卡,对2010年8～10月间来自成都市区的103份家养犬以及75份家猫的唾液和血液样品进行检测;同时采用文献报道的PCR方法对家养犬血液样品中的弓形虫核酸进行检测。结果显示,103份家养犬唾液样品狂犬病病毒抗原均为阴性,而75份家猫唾液样品中,检出阳性样品5份(阳性率6.7%),可疑样品7份;103份家养犬血液样品弓形虫抗原阳性样品33份(32.0%),可疑样品22份,75份家猫血液样品中,检出阳性样品2份(阳性率2.7%),可疑样品3份。弓形虫核酸PCR检测结果显示,96份家养犬血液样品弓形虫核酸阳性样品57份(阳性率59.4%),与弓形虫抗原阳性和可疑样品总和所占比例基本一致(53.4%)。提示应重视源于家猫的狂犬病病毒和家养犬弓形虫对人的威胁。
- 张焕容程方明杨发龙杨金福
- 关键词：狂犬病弓形虫
