肖朋朋
- 作品数：24 被引量：62H指数：5
- 供职机构：延边大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项吉林省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 2015年广西地区PRRSV流行株ORF5和Nsp2基因分子流行病学调查被引量：3
- 2017年
- 目的对广西地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和ORF5基因进行分子流行病学调查。方法采集广西地区猪病料样品45份,PCR扩增PRRSV毒株Nsp2和ORF5基因并进行遗传进化分析。结果 RT-PCR检测PRRSV 7份猪病料阳性。7株病毒与VR-2332和LV株的同源性分别为83.5%88.7%和62.1%64.8%。遗传进化分析显示,7株病毒分属于两个亚群,3株属于亚群Ⅳ,4株属于亚群Ⅵ。Nsp2序列分析显示,6株病毒有高致病性PRRSV 1+29aa氨基酸的缺失特征,其中GXBB11-2015在此基础上出现了新的20个氨基酸缺失,缺失碱基数为150个碱基。结论高致病性PRRSV已成为广西地区优势毒株,病毒Nsp2基因新的碱基缺失是PRRSV变异的又一证据。
- 孙文超张萍解长占张金勇曹亮南福龙韩继成温树波肖朋朋张赫庄忻雨靖杰崔卓栋柴丹鲁会军金宁一
- 关键词：ORF5基因
- 牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2019年
- 为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点。利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析。结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好。采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法。该方法组内及组间变异系数均小于7%,重复性较好。临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高。
- 马海彬刘云霞刘云霞韩继成孙文超解长占孙文超肖朋朋张萍尹逊哲肖朋朋金宁一
- 关键词：牛支原体原核表达蛋白纯化间接ELISA
- 云南省南部地区蚊携带乙型脑炎病毒的检测和遗传进化分析
- 2018年
- 为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%,其中思茅区和宁洱县蚊阳性率最高,均为25.00%;扩增的5条完整JEV E基因序列与2009年分离的JEV老挝株亲缘关系最近,同源性为97.3%~98.7%,均属于基因I型;5条E基因序列(YN2016-1/2/3/4/5)在1 323位核苷酸位点首次出现C碱基替换,且YN2016-1在第340位氨基酸位点首次出现丙氨酸替换。结果表明:云南省南部地区蚊JEV的携带率较高,尤其是思茅区和宁洱县;蚊携带的JEV出现了核苷酸和氨基酸变异,应注意对其加强监测。
- 肖朋朋李成辉张金勇韩继成郭晓芳郭晓芳周红宁金宁一
- 关键词：乙型脑炎病毒进化分析
- 欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗猪免疫试验效果评价被引量：2
- 2016年
- 目的评价欧洲型PRRSV重组腺病毒疫苗pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18猪体免疫效果。方法用鉴定正确的重组腺病毒进行猪免疫试验,通过淋巴细胞亚群检测、细胞因子检测和免疫组化检测分析其免疫效果。结果猪淋巴细胞亚群检测显示重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18刺激CD4+和CD8+表达量在21d、35d、49d分别为PBS组的1.53、1.84、1.90倍和1.41、1.76、1.53倍,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA检测pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18免疫猪血清IL-4和IFN-γ水平在14d时的表达量分别是PBS组的1.45和1.46倍(P<0.05),而在35d时分别是PBS组的1.81和1.79倍(P<0.05)。免疫组化检测免疫猪肺、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴组织病毒量相对于野毒组和PBS组显著减少。结论重组腺病毒pacAd-EU-ORF3-ORF5-IL18疫苗,具有良好的免疫原性,能提高猪细胞免疫和体液免疫水平。
- 解长占曹亮孙文超张萍韩继成郭海宁肖朋朋温树波崔卓栋南福龙马海彬赵冠宇张赫庄忻雨张金勇鲁会军金宁一
- 关键词：重组腺病毒疫苗
- 表达基因Ⅶ型新城疫病毒F蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选被引量：1
- 2015年
- 为了构建并筛选表达新城疫病毒(NDV)F蛋白的重组鸡痘病毒(rFPV-F),通过PCR扩增F基因,克隆至pMD18-T Simple载体,进行DNA序列分析和遗传进化关系分析。将测序正确的F基因克隆至笔者所在实验室自行构建的新型鸡痘病毒穿梭载体pTS2GFPV150中,获得重组质粒pTS2GFPV150-F。然后将其与鸡痘病毒FPV282E4株共转染鸡胚成纤维细胞进行同源重组,挑取表达增强型绿色荧光蛋白的噬斑,经多轮筛选获得重组病毒rFPV-F,应用PCR、RT-PCR、Western-blot等方法对重组鸡痘病毒进行鉴定。结果显示,成功获得NDV F基因及重组F基因的鸡痘病毒rFPV-F,并证实F基因已被整合到鸡痘病毒基因组中,且在感染细胞内被成功表达。本研究成功获得了1株表达NDV F基因的重组鸡痘病毒,为下一步开展动物体内免疫研究奠定了基础。
- 辛舒田明尧曹佳媛薛斐杜寿文谭鹏肖朋朋陈兴郭海宁金宁一
- 关键词：新城疫病毒F蛋白同源重组
- 欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗猪体免疫实验研究被引量：5
- 2014年
- 目的评价实验室构建的欧洲型PRRSV和PCV2二联重组痘苗病毒猪体免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF5和rVTT-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,每周采血,分离血清,采用ELISA检测病毒特异性抗体、中和抗体检测及细胞因子水平,评价免疫效果。结果 rVTT-PCV2-ORF2-EU-ORF3-ORF免疫组35d时,猪血清欧洲型PRRSV GP3和GP5及PCV2ORF2特异性抗体,显著高于野毒组(t=6.61,t=9.21,t=10.34,P<0.05);猪血清中和抗体35d时,各免疫组均可产生较高的免疫水平,差异均无统计学意义(t=0.48,P>0.05);重组痘苗病毒疫苗rVV-ORF2-EU-ORF3-ORF5免疫可诱导IL-4和IFN-γ产生,增强猪体细胞免疫应答水平。结论欧洲型PRRSV、PCV2二联重组痘苗病毒疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,为欧洲型PRRSV、PCV2的新型疫苗研究奠定了实验基础。
- 韩继成任静强孙文超靖杰肖朋朋郭海宁陈兴鲁会军金宁一
- 关键词：免疫研究
- 欧洲型PRRSV重组痘苗病毒候选疫苗猪体免疫效果研究被引量：2
- 2015年
- 目的通过猪体免疫试验,评价欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗的免疫效果。方法分别用重组痘苗病毒rVV-EU-ORF3-ORF5和灭活rVV-EU-ORF3-ORF5进行猪体免疫试验,通过检测猪血清特异性抗体中和抗体检测及T淋巴细胞增殖试验分析免疫效果。实验设E3L-VTT野毒免疫组和PBS组作对照。结果免疫后35d,欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗免疫组和rVV-EU-ORF3-ORF5免疫组GP3、GP5特异抗体水平均达峰值（A值0.51~0.56）,两组间比较差异无统计学意义（tGP3=1.805,tGP5=0.7998,P〉0.05）,但均高于E3L-VTT野毒免疫组（A值0.33~0.43）,差异显著（tGP3=5.518,tGP5=3.346,P〈0.01）;猪血清中和抗体重组痘苗病毒灭活疫苗组与重组痘苗病毒疫苗组均与免疫后35d达峰值水平（分别为16.38和18.88）,且两组间比较差异无统计学意义（t=0.7005,P〉0.05）;T淋巴细胞增殖试验的SI值两疫苗组差异无统计学意义（t=0.2536,P〉0.05）,但均高于E3L-VTT野毒免疫组（t值分比为6.414和7.222,P〈0.01）。结论欧洲型PRRSV重组痘苗病毒灭活疫苗能诱导猪体产生体液和细胞免疫应答,可为欧洲型PRRSV的新型疫苗的研制提供参考。
- 韩继成靖杰肖朋朋曹亮李一权郭海宁马海彬张萍鲁会军金宁一
- 关键词：免疫研究
- 云南蚊宏病毒组学分析及新分离乙型脑炎病毒特性研究
- 目的:通过对中国云南省部分地区蚊宏病毒组学及新分离乙型脑炎病毒特性进行研究，分析云南省潜在的病毒种类及分布，以及新分离乙型脑炎病毒的变异及流行病学，为今后该地区病毒病的防控及向其他地区传播控制提供参考。 材料与方法:(...
- 肖朋朋
- 关键词：乙型脑炎病毒宏基因组学病毒种类
- 文献传递
- 犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：11
- 2017年
- 犬圆环病毒(DogCV)是圆环病毒科新发现的圆环病毒,旨在建立犬圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法。试验用PCR方法克隆犬圆环病毒ORF2基因保守区域,构建标准阳性质粒pClon007-ORF2。以标准阳性质粒pClon007-ORF2为模板对荧光定量PCR反应体系进行优化。结果表明,所建立的方法 Ct值与标准品在4.67×10~9 copies/μL^4.67×10~3 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-3.445。该方法检测灵敏度为4.67×10~1copies/μL。该方法对狂犬病病毒、犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型等犬常见病原的检测均无交叉反应;所有稀释度标准品模板均在83.35℃出现窄的特异性熔解峰。临床样品检测表明,所建立的实时荧光定量PCR对犬圆环病毒的阳性检测率为12.50%(4/32)。
- 孙文超解长占赵冠宇曹亮郑敏曹慧慧张红云韦显凯韩继成温树波肖朋朋靖杰张萍鲁会军金宁一
- 关键词：SYBR实时荧光定量PCR
- 乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价被引量：1
- 2018年
- 目的对重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE进行动物安全性评价。方法用重组痘苗病毒rVTT-JEVE对BALB/c小鼠进行免疫接种,分别在体液免疫及细胞免疫水平上评价其免疫效果;并通过检测小鼠体内rVTT-JEVE病毒残留,分析乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE的安全性。结果 BALB/c小鼠经两次免疫接种后,重组痘苗病毒rVTT-JEVE组IgG抗体水平是商品疫苗SA-14-14-2组的1.4倍(t=3.704,P<0.05),中和抗体效价是SA-14-14-2组的1.6倍(t=4.418,P<0.05),T淋巴细胞增殖水平为SA-14-14-2组的1.7倍(t=3.092,P<0.05)。rVTT-JEVE接种小鼠后第1d各脏器均有rVTT-JEVE病毒残留,第3d颌下淋巴结已无病毒残留,第7d仅脾脏和雄性小鼠心脏有少量病毒残留,之后均无病毒残留。结论重组痘苗病毒候选疫苗rVTT-JEVE免疫小鼠可产生较好的免疫效果及免疫安全性。
- 肖朋朋刘昊靖杰刘昊韩继成曹亮李成辉张金勇曹亮解长占李一权鲁会军金宁一
- 关键词：BALB/C小鼠乙型脑炎病毒安全性评价
