蒋清蓉
- 作品数：15 被引量：19H指数：3
- 供职机构：四川铁骑力士实业有限公司更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省教育厅资助科研项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生天文地球更多>>
- 猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建
- 试验中先将PPV SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2；设计两对引物(分别引入HindⅢ和SacⅠ两个酶切位点)扩增PCV2 SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-...
- Zhu-ling朱玲郭万柱Guo-wanzhuJiang-qingrong蒋清蓉Xu-zhiwen徐志文Xiong-dingjie熊丁杰Zhang-bo张博王印Wang-yinZhao-ling赵玲
- 关键词：猪细小病毒病毒样颗粒
- 猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3′端对病毒样颗粒形成的影响被引量：3
- 2009年
- 以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3′端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析。结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒。通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3′端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3′端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒。
- 徐志文郭万柱蒋清蓉朱玲熊丁杰王印徐凯王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因插入位点病毒样颗粒
- PPV VP2基因的不同位点插入PCV2 ORF2基因对PPV VPLs形成的影响
- 蒋清蓉
- 关键词：猪细小病毒
- 猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建
- 试验中先将PPV SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物（分别引入HindⅢ和SacⅠ两个酶切位点）扩增PCV2 SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-...
- 朱玲郭万柱蒋清蓉徐志文熊丁杰张博王印赵玲
- 关键词：猪细小病毒病毒样颗粒
- 文献传递
- PPV VP2和PCV2 ORF2重组病毒样颗粒的获得及其免疫原性研究被引量：1
- 2010年
- 将PCV2 ORF2基因插入PPV VP2基因HindⅢ酶切位点(即PPV VLPs的N端1/3处)获得重组基因VP2.ORF2,并将其克隆到真核表达载体pEGFP-C1中得到重组质粒pEGFP-VP2.ORF2,经转染及电镜观察表明成功获得VP2.ORF2重组病毒样颗粒。重组病毒样颗粒经超速离心纯化后免疫小鼠,同时设立PPV普通疫苗、PCV2弱毒株及空白对照组,并在不同时期检测小鼠CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞动态变化情况及PPV和PCV2抗体水平。结果显示:VP2.ORF2重组病毒样颗粒免疫小鼠后能诱导较高水平的细胞免疫和高于同等条件普通疫苗和弱毒株的体液免疫水平。此研究结果为进一步探索VP2.ORF2重组病毒样颗粒的形成机制提供了依据,也为PPV-PCV2二联疫苗的研发打下了基础。
- 徐志文蒋清蓉郭万柱朱玲胡秋炅陈扬廖晓丹
- 关键词：猪细小病毒
- 荣昌猪白细胞介素-2受体γ链基因克隆、表达与鉴定
- 2009年
- 运用RT-PCR技术从由刀豆蛋白(ConA)诱导培养的荣昌猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)扩增出猪白细胞介素-2受体γ链基因的完整开放阅读框(ORF),长约1 107 bp,编码由368个氨基酸残基组成的相对分子质量为41 780的蛋白多肽。荣昌猪IL-2Rγ与人、猕猴、牛、犬、鼠在氨基酸水平上的同源性分别为81.6%,80.8%,85.1%,83.2%和68.8%。运用PCR技术从含荣昌猪IL-2Rγ开放阅读框序列质粒中扩增其成熟蛋白编码基因,共1 020 bp。将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)后在E.coliBL21中诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达的融合蛋白约为52 000,重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物约占菌体总蛋白的37.6%;Western-blotting分析表明,在相对分子质量52 000处有一条特异性的带;对γ诱导重组菌进行转录检测得到约1 020 bp的特异性片段。
- 廖晓丹郭万柱吴翼余光勇蒋清蓉
- 关键词：克隆原核表达
- 猪圆环病毒ORF2基因的插入对猪细小病毒VP2基因蛋白表达的影响被引量：4
- 2008年
- 将扩增得到的PCV2SC株ORF2基因插入PPVSC-1株VP2基因的HindⅢ(522bp处)和SacⅠ(1220bp处)2个特异限制酶切位点,并将此重组基因分别连接到含绿色荧光蛋白基因的伪狂犬病毒转移载体(pPI-2.EG-FP),脂质体转染系统转染COS-7细胞,倒置荧光显微镜观察重组基因表达情况。结合测序结果预测重组基因所编码的蛋白质的二级结构。
- 蒋清蓉徐志文郭万柱朱玲胡秋炅王印王小玉
- 关键词：猪细小病毒猪圆环病毒病毒样颗粒
- 猪细小病毒SC-1株VP2基因的定点突变及其对该基因表达的影响被引量：2
- 2008年
- 根据GenBank中的猪细小病毒(PPV)VP2基因序列设计并合成了2对突变引物,对PPV SC-1株VP2基因进行了定点突变。利用重叠延伸PCR技术分别将VP2蛋白中第402位(A)和214位(B)的半胱氨酸突变为精氨酸,并定向克隆入真核表达载体pPI-2.EGFP中,构建含报告基因EGFP的重组质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI2.EGFP.VP2(B);利用脂质体介导法将上述重组质粒转染COS-7细胞,从而研究该突变对VP2基因表达的影响。结果显示,成功构建了含突变体及EGFP的真核表达载体;在倒置荧光显微镜下,突变后的质粒转染呈现不同的荧光信号,A样品的荧光呈颗粒状分布于细胞中,而B样品与阳性对照相似,荧光信号均匀分布于细胞中。提示,突变的引入是导致表达差异的主要原因。
- 胡秋炅徐志文郭万柱朱玲蒋清蓉王印王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因定点突变真核表达
- 猪细小病毒VP2基因及其编码蛋白的研究进展
- PPV VP2基因是衣壳蛋白的主要编码基因，其编码蛋白能自主装配成类病毒粒子并能诱导免疫应答。本文主要介绍PPV VP2基因的复制、转录和翻译，以及VP2基因及其编码蛋白的功能和应用。
- 石恬蒋清蓉朱玲吴婵易悦
- 关键词：猪细小病毒VP2基因编码蛋白分子生物学
- 四川地区商品代蛋鸡REV、ALV-J感染情况调查被引量：1
- 2011年
- 禽网状内皮增生症病毒（R_EV）和J亚群禽自血病病毒（ALV-J）是引起免疫抑制疾病中最常见的两种病毒。REV可诱发慢性肿瘤，ALV-J能造成血瘤、肿瘤。但它们在感染鸡群中更多呈亚临床感染，
- 代友洪叶兆美蒋清蓉赖守勋张德胜
- 关键词：ALV-JREV商品代蛋鸡免疫抑制疾病亚临床感染J亚群
