覃吉超
- 作品数：23 被引量：88H指数：5
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肿瘤相关成纤维细胞诱导乳腺癌分化细胞去分化为癌干细胞的研究被引量：3
- 2014年
- 目的观察乳腺癌相关成纤维细胞（TAFs）在乳腺癌分化细胞去分化为肿瘤干细胞（CSCs）中的作用。方法用流式细胞仪从8例原代乳腺癌组织中分离TAFs并用免疫荧光鉴定；采用成球实验研究TAFs对乳腺癌腺上皮细胞自我更新能力的影响，并检测TAFs处理前后干细胞表型CD44^＋CD24^-1/low的比例变化，观察TAFs对去分化的影响。结果从新鲜乳腺癌组织中分离出TAFs，间质细胞标志物波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色呈阳性。TAFs与乳腺癌腺上皮细胞（BCCs）共接种能增强其自我更新能力，共接种组和对照组的成球数分别为（71．67±3．51）和（24．67±1．53）个（P〈0．01）。TAFs的条件培养基（CM）能增强乳腺癌腺上皮细胞自我更新能力，CM处理组和对照组的成球数分别为（74．67±3．06）和（30．33±3．21）个（P〈0．01）。TAFs能增强乳腺癌分化细胞的自我更新能力，分化细胞（non—CD44^＋CD24-／low）经CM处理后的成球数为（86．00±3．00）个，而对照组为（15．33±1．53）个（P〈0．01）；TAFs能促进乳腺癌分化细胞的去分化，13013-CD44^＋CD24^-1/low细胞经CM处理后，CD44^＋CD24^-1/low比例明显上升达（52．13±0．70）％，对照组为（17．07±0．65）％（P〈0．01）。结论TAFs能通过旁分泌的方式增强乳腺癌腺上皮细胞的自我更新能力，并促进分化细胞去分化为肿瘤干细胞。
- 罗智勇胡艺冰张哲覃吉超吴亚群
- 关键词：肿瘤相关成纤维细胞乳腺癌肿瘤干细胞去分化
- Ki-67阴性结直肠癌细胞的增殖和自我更新能力的研究被引量：2
- 2015年
- 目的观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用。方法通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/lowEpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力。结果从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)%的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)%的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)%和(4.57±1.05)%PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞主要是G0/G1期细胞,在体内处于慢增殖状态;荧光定量PCR证明Ki-67-/low细胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平为Ki-67+细胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差异有统计学意义(P<0.05),体外成球实验,Ki-67-/low及Ki-67+细胞的成球数量分别为(83.00±9.54)和(8.00±2.66)(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞高表达CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关标记物,并具有显著的自我更新能力,富集肿瘤干细胞。结论 Ki-67阴性的结直肠癌细胞具有慢增殖的特点,较Ki-67阳性结直肠癌细胞具有更强的成球能力,在结直肠癌的自我更新中起重要作用,并有可能作为肿瘤干细胞的标记物。
- 颜畅胡艺冰穆磊黄开禹覃吉超
- 关键词：KI-67结直肠癌自我更新肿瘤干细胞
- 膜联蛋白V与碘化丙啶用于细胞周期特异性凋亡的检测被引量：15
- 2002年
- 目的 建立一种新的细胞周期特异性凋亡检测方法。方法 将急性早幼粒细胞白血病细胞株 (HL 60 )分别经喜树碱 (CAM)、紫外线诱导 ,及喜树碱和N 甲苯磺酰基 L 苯基丙氨酸氯甲基酮(TPCK)共同诱导后 ,用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(AnnexinV)进行标记 ,经 1 %不含甲醇的甲醛溶液冰浴固定 ,再用含洋地黄皂苷的碘化丙啶染色液染色后 ,流式细胞术分析凋亡细胞的周期特异性和细胞凋亡率 ,并与DNA链缺口标记法 (TdT)和常规AnnexinV法检测结果进行比较。结果 细胞凋亡的周期特异性分析 :膜联蛋白V/碘化丙啶法 (PA法 )和TdT法结果一致 ,CAM和紫外线诱导的细胞凋亡分别发生在S期和G1期 ;CAM和TPCK共同诱导试验显示 ,PA法对早期凋亡具有较高的检测灵敏度 ,TdT法则不能有效检测 ;而常规AnnexinV法无法进行凋亡细胞的周期特异性分析。细胞凋亡率的检测 :HL 60经CAM、紫外线、CAM与TPCK三种方法诱导后 ,PA法检测凋亡率的结果 (1 7 3 %、34 .7%、35 .9% )与常规AnnexinV法的检测结果 (1 8.1 %、35 .6 %、37.0 % )一致 (P >0 .0 5) ,而TdT法(1 0 .7%、1 9.5 %、- )则明显偏低 (P <0 .0 1 )。结论 PA法可以用于凋亡细胞周期特异性检测 ,其稳定、可靠。
- 陶德定冷彦覃吉超周晖申漫里余源龚建平
- 关键词：流式细胞术细胞周期膜联蛋白V碘化丙啶细胞凋亡
- 细胞周期分析方法的实验研究
- 采用DNA含量流式细胞术细胞周期分析方法,可分辨出G<,0>/G<,1>期、S期及G<,2>/M期三个细胞周期群体,但无法区分G<,0>/G<,1>期,G<,2>/M期细胞.该研究结合Cyclin E/DNA以及Cycl...
- 覃吉超
- 关键词：细胞周期细胞增殖流式细胞术细胞周期蛋白
- 文献传递
- 人类非肿瘤性增殖中细胞周期蛋白的表达研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究具再生能力的非肿瘤组织中细胞周期蛋白 (cyclins)的表达 ,了解cyclins在两种不同性质的细胞增殖过程中的不同表现。方法 应用流式细胞术分别检测Molt 4细胞和分离自非肿瘤组织和肿瘤组织的混悬单细胞中cyclinD、E、A、B1的表达 ,并以Westernblotting证实检测结果。 结果 可再生的非肿瘤组织中无法检测到cy clins的表达 ,而在同种组织来源的肿瘤中 ,一种或多种cyclins呈阳性表达。 结论 在细胞由良性增生转变为恶性增生的过程中 。
- 申漫里何小军覃吉超龚建平
- 关键词：细胞周期蛋白细胞增殖流式细胞术
- Cyclins非时相性表达和MDR1与胃肠道恶性肿瘤分期的研究被引量：1
- 2007年
- 目的：研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins的表达规律，以此为依据对恶性肿瘤进行分型，并结合肿瘤标本中MDR1（多药耐药基因）的表达情况，与肿瘤TNM分期进行相关性研究。方法：使用流式细胞术分析新鲜手术获取的肿瘤标本的CyclinD1，E，A，B1及与MDR1表达情况，再记录术后病理报告进行TNM分期。结果：根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ～Ⅳ型cyclin非时相性表达类型，此Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期有一致性（Kappa值为0．599，P〈0．01），Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高（Spearman相关系数0．495，P〈0．01）。结论：根据4种主要Cyclins（Cyclin D1，E，A，B1）的表达情况对胃肠肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义，可以说是对“分子分期”的一种探索。在消化道肿瘤中，MDR1与肿瘤细胞周期破坏类型有关，对治疗具有指导意义。
- 郭勇覃吉超周毅何小军李伟华谢大兴龚建平
- 关键词：胃肠肿瘤细胞周期蛋白类MDR肿瘤分期
- 人类非同步化细胞周期分析的理论与方法
- 龚建平陶德定覃吉超吴剑宏冯永东
- 该项目的主要内容与特点体现在理论与技术的同步发展：1、在培养的同步化细胞，发现了细胞“不平衡生长”事实，证明了应用非同步化细胞体系进行细胞同期研究的必要性；2、在人类非同步化培养细胞，建立了Cyclins／DNA双参数流...
- 关键词：
- 双光源流式细胞术三参数细胞周期分析(英文)
- 2005年
- 目的建立双光源流式细胞仪三参数细胞周期分析方法,同时检测两种细胞周期素和细胞DNA含量,分析非时相性的细胞周期素的表达。方法运用免疫荧光标记技术对两种cyclin标记,一种用直接法(FITC标记),另一种用间接法(RPE-Cy5标记的二抗),同时进行细胞核染色(荧光素DAPI),双光源二点激发,三波段定量检测,数据运用cellquest软件分析。mAMSA和mimosine诱导非时相性的细胞周期素表达。结果两种cyclin可同时检测,互不干扰,而且不需要荧光补偿,与单标相比无明显差别,cyclin及:DNA均可半定量分析。Cyclin A/ cyclin E/DNA分析可将对数生长期的MOLT-4细胞分为六个亚细胞群(G10、1le、G1l、S、G2、M),mimosine处理的细胞可见G1期cyclin B1表达,mAMSA处理的细胞有G2期cyclin E的异位表达。结论运用免疫荧光技术在流式细胞仪上三参数细胞周期分析可以快速定量检测两种cyclin和DNA含量,更精确地对细胞增殖进行分析。
- 冯永东陶德定覃吉超高纯申漫里冷艳余源龚建平
- 关键词：细胞周期血细胞计数
- 新鲜肿瘤标本活细胞与固定细胞的DNA含量分析比较被引量：11
- 2001年
- 目的:建立一种以新鲜细胞进行临床肿瘤DNA含量分析的方法。方法:血液肿瘤取肝素抗凝外固血或骨髓样本,用淋巴细胞分层液分离纯化单个核细胞;实体瘤组织则用机械法制成单细胞悬液。将细胞分成两份,一份酒精固定过夜,流式细胞术常规方法测定DNA含量,另一份直接用PIPESpiperazineNNbis2ethanesulfonicaciddisodiumsalt缓冲液配制的碘化丙锭(propidiumiodidePI)染色,以流式细胞术进行DNA含量测定,并与同期固定细胞的DNA含量检测结果进行比较。结果:同类型的肿瘤细胞,其固定前后G0/G1期细胞峰的变异系数(coefficientofvariationCV)没有明显差异(t检验,P>0.05)。重复实验结果显示,新鲜细胞DNA含量分析结果稳定。结论:用PIPES缓冲液配制的PI染液染色新鲜细胞,可以对临床肿瘤的细胞增殖状况和DNA倍性进行分析。
- 陶德定冷彦覃吉超余源龚建平
- 关键词：流式细胞术肿瘤DNA含量
- 一种新的细胞周期分析方法被引量：17
- 2001年
- 目的采用DNA含量流式细胞术细胞周期分析方法,可分辨出G0/G1期、S期及G2/M期3个细胞周期群体,但无法区分G0/G1期、G2/M期细胞。方法本研究建立的cyclinE+A/DNA多参数流式细胞术。结果可将细胞周期进行详细的分期,由传统的三分法(G0/G1期、S期以及G2/M期)为六分法(G0期、G1早期、G1晚期、S期、G2期以及M期),为细胞生物学研究,尤其是细胞增殖动力学提供新的、更为合理的分析方法。
- 覃吉超陶德定舒丹冷彦龚建平
- 关键词：细胞周期细胞增殖流式细胞术细胞周期蛋白
