赵吟
- 作品数：14 被引量：54H指数：5
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- 一组检测牛、羊赤羽病病毒的一步法实时荧光QRT-PCR引物、探针及其使用方法
- 本发明公开了一组检测牛、羊赤羽病病毒的一步法实时荧光QRT-PCR引物、探针及其使用方法。所述引物和探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1～3所示。本发明检测牛、羊赤羽病病毒的方法是以样品RNA为模板，利用上述引物...
- 鱼海琼林志雄陈茹翟建新罗长保赵吟贾坤田纯见朱道中王宏
- 文献传递
- 建立液相芯片方法检测鉴别结核分枝杆菌复合群、鸟分枝杆菌与副结核分枝杆菌被引量：13
- 2011年
- 运用液相芯片技术原理,以分枝杆菌菌种(群)特异基因序列IS6110、IS1081、IS1245和F57为目标基因,设计筛选4套扩增引物和杂交探针,建立同时检测鉴别结核分枝杆菌复合群、鸟分枝杆菌和副结核分枝杆菌的四重液相基因芯片检测方法。对13种共54株分枝杆菌菌株以及23种常见微生物样品的检测结果显示,四重液相芯片方法可特异检测鉴别目标菌种(群),与其它分枝杆菌菌种或微生物无非特异交叉反应;检测敏感性达2.1×101-2.5×102基因拷贝或0.06-0.74 fg DNA;组内检测变异系数和组间检测变异系数均<10%。采用四重液相芯片方法从临床结核疑似人痰样和牛组织样品中检出结核致病菌,检出率分别达75.6%(99/131)和94.9%(37/39),显著高于培养法(38.9%和53.8%)。对副结核疑似临床样品的检测试验结果显示,四重液相芯片方法与荧光PCR方法的阳性符合率为83%(24/29)。对四重混合模板的检测试验结果显示该液相芯片方法可鉴别不同菌种混合感染。四重液相芯片方法的检测周期<1 d,其中对纯化DNA模板的检测时间可在2-3 h内完成。
- 陈茹毕英佐刘志玲周仲芳刘志辉陈芳赵吟
- 关键词：液相芯片技术结核分枝杆菌复合群副结核分枝杆菌
- 光密度法RT-LAMP检测高致病性禽流感病毒
- 2013年
- 以HNB为指示剂建立光密度法RT-LAMP检测H5N1亚型高致病性禽流感病毒,2套特异引物的反应产物电泳均出现相应的特异条带,进行浊度测定出现扩增曲线的时间分别为28min和54min。用于检测5个H5N1亚型高致病性禽流感病毒样品,平均光密度值分别为0.355和0.381,对应的荧光RT-PCR Ct值为22.25。高通量光密度法RT-LAMP检测方法的建立,为高致病性禽流感诊断奠定基础。
- 田纯见王宏李红梅张树罗琼林志雄赵吟唐羿罗长保鱼海琼
- 关键词：禽流感病毒光密度
- 水泡性口炎病毒血清型特异LUX实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：8
- 2008年
- 采用LUX荧光核酸扩增技术原理,以水泡性口炎病毒(VSV)NJ、IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物,建立血清型特异的VSV荧光RT-PCR检测方法。试验表明,两种型特异的LUX荧光RT-PCR能分别特异地鉴定VSV血清型,对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织RNA样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明,LUX荧光RT-PCR的检测敏感性比常规RT-PCR提高达10倍以上,对VSV细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1 TCID50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实,该LUX荧光RT-PCR可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒,并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法,包括样品核酸提取、LUX荧光RT-PCR以及熔解曲线分析,可在3 h内完成。
- 陈茹刘中勇曾碧健曹永长陈俊伟赵吟林志雄毕英佐
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 禽波纳病毒分离鉴定及其恒温扩增检测分析被引量：3
- 2012年
- 利用腺胃扩张症(PDD)患病鹦鹉腺胃RT-PCR阳性病料,接种猪睾丸(ST)传代细胞,分离禽波纳病毒(ABV),建立实时RT-LAMP检测方法。将阳性病料接种ST细胞单层传代,出现细胞圆缩、脱落,ABV基质蛋白(M)基因扩增产物出现预计大小351bp条带,测序后进化树分析显示为ABV5基因型。针对M基因设计ID37、ID30、ID19、ID6和ID1共5组引物,后3组引物RT-LAMP呈阳性反应。利用钙黄绿素建立实时RT-LAMP,分别在36(ID30)、38(ID37)和49(ID19)min出现扩增反应曲线,60min内扩增达到峰值。对各种临床样品检测与RT-PCR结果一致,新城疫等类症病毒未见阳性反应,显示较高的特异性;对细胞培养物检测10-1～10-5为阳性,比较RT-PCR敏感性提高约100倍。RT-LAMP检测方法的建立为PDD防制提供新的检测方法,也是波纳病公共卫生研究有益的参考。
- 田纯见王宏罗琼林志雄赵吟罗长保鱼海琼刘志玲陈茹唐羿周小明常彦磊吴晓薇朱道中
- 一组快速检测牛、羊赤羽病病毒的等温扩增引物及其应用
- 本发明公开了一组快速检测牛、羊赤羽病病毒的等温扩增引物及其应用。所述引物的核苷酸序列分别如SEQ？ID？NO.1～4所示。本发明以样品RNA反转录获得的cDNA为模板，利用上述引物进行环介导等温扩增检测，反应结束后，可通...
- 鱼海琼贾坤罗长保赵吟田纯见吴晓薇陈芳罗琼刘志玲张敏
- 文献传递
- 牛传染性鼻气管炎病毒LUX^(TM)新型荧光PCR检测方法的建立被引量：8
- 2007年
- 本研究针对牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)高度保守的gC基因设计单标记并具有自身荧光淬灭功能的LUX^(TM)引物,建立LUX^(TM)新型实时荧光PCR方法用于快速检测IBRV。该方法对四株IBRV细胞培养物的检测均呈典型阳性反应,而对其它动物疱疹病毒以及健康牛组织DNA和细胞对照的检测结果为阴性,检测时间包括核酸提取仅需1h～2h。试验表明,LUX^(TM)荧光PCR法对IBRV细胞增殖病毒液的检测敏感性可达0.04 TCID_(50),比病毒分离敏感性至少提高10倍;对10倍系列稀释的纯化IBRV核酸样品,LUX^(TM)荧光PCR的检测敏感性比常规PCR可提高10~3倍。将病毒液添加到健康牛精液和血液样品中,该荧光PCR可检测到牛冻存精液中40 TCID_(50)、牛抗凝全血、血清和临床精液中0.04 TCID_(50)的病毒,说明对临床样品的检测有效。本研究所建立的LUX^(TM)荧光PCR方法快速敏感,适合应用于活牛及其遗传物质的进出口检疫、养牛业疾病防控等领域对IBRV的快速检测。
- 陈茹毕英佐曹永长林志雄赵吟罗琼朱道中
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光PCR
- 牛羊赤羽病病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：5
- 2011年
- 为建立一种能够快速、简便地检测牛、羊赤羽病病毒的分子生物学方法,根据赤羽病病毒特异性S基因的6个特异区域设计了2对引物,首次建立了赤羽病病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法,对LAMP反应条件进行了优化,并将其与普通PCR方法进行比较。结果显示,LAMP检测方法的特异性好,只对赤羽病病毒进行扩增,且操作简便。本研究确定的最佳反应温度为63℃,核酸检测的最低检出限为1.08ng/μL,比普通PCR的灵敏度高2个数量级。该方法为赤羽病病毒的一种最新的快速、简便的检测方法,可用于出入境牛、羊赤羽病的快速检测。
- 鱼海琼贾坤罗长保赵吟林志雄陈茹田纯见罗琼曾碧健吴晓薇
- 关键词：赤羽病环介导等温扩增聚合酶链反应敏感性
- 牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光PCR检测方法的建立被引量：10
- 2005年
- [目的]针对牛传染性鼻气管炎病毒建立快速、准确而敏感的分子生物学检测方法,为进出口牛及其遗传物质的IBR检疫把关提供新的技术手段。[方法]采用新型实时荧光PCR技术原理,自行设计荧光标记引物建立检测方法,对不同牛传染性鼻气管炎病毒样品进行敏感性、特异性等检测试验,并与常规PCR检测方法进行比较。[结果]该方法能特异检测IBR病毒,检测时间包括核酸样品制备仅需2h,敏感性比常规PCR检测方法提高达103-104。[结论]本方法适用于在牛及其遗传物质的进出口检疫中进行牛传染性鼻气管炎快速病原鉴定。
- 陈茹赵吟林志雄罗琼
- 关键词：牛传染性鼻气管炎荧光PCR
- 一组快速检测牛、羊赤羽病病毒的等温扩增引物及其应用
- 本发明公开了一组快速检测牛、羊赤羽病病毒的等温扩增引物及其应用。所述引物的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1～4所示。本发明以样品RNA反转录获得的cDNA为模板，利用上述引物进行环介导等温扩增检测，反应结束后，可通过两...
- 鱼海琼贾坤罗长保赵吟田纯见吴晓薇陈芳罗琼刘志玲张敏
- 文献传递
