郝淮杰
- 作品数：25 被引量：26H指数：3
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项首都特色临床医学技术发展研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控。结果构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90%以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达。结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用。
- 王涛郑玉玲袁媛江华郝淮杰李雪琴姜永强
- 关键词：猪链球菌
- 猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分VirD4与毒力相关性分析被引量：4
- 2015年
- 【目的】构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33毒力岛89 K上的Ⅳ型分泌系统组分Vir D4敲除突变株,初步分析其活性和毒力,为进一步研究猪链球菌2型在逃避宿主天然免疫杀伤中的作用提供基础。【方法】以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增Vir D4基因上下游同源臂,以穿梭质粒p SET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR技术搭建上述3个片段并连接至温敏载体p SET4s,构建基因敲除载体p SET4s∷Vir D4;通过同源重组构建基因敲除突变株ΔVir D4;通过体外全血杀伤实验、CD1小鼠竞争感染及攻毒实验对突变株和野生株的毒力进行比较分析。【结果】获得了基因敲除突变株ΔVir D4,通过对比发现其毒力与野生株相比有所降低。【结论】猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分Vir D4与其毒力相关,并在早期抵抗天然免疫细胞杀伤中发挥一定作用。
- 王俊平郑玉玲骈亚亚郭洁郝淮杰姜永强
- 关键词：猪链球菌2型毒力
- 猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272的表达、纯化及生物活性分析
- 2012年
- 目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行纯化。实时定量PCR方法检测纯化后的SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后其细胞因子的转录水平变化。结果制备的SSU05_0272蛋白具有较高的纯度,RT-PCR结果显示,SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后能上调IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β的表达,下调IL-12P40的表达。结论 SSU05_0272蛋白能够调控促炎症细胞因子和趋化因子转录水平变化,提示其在猪链球菌致炎症反应中起重要作用。
- 陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇任志强王涛姜永强吕淑霞
- 关键词：猪链球菌细胞因子
- 钌红染色观察猪链球菌荚膜超微结构研究
- 荚膜是某些细菌的特殊结构,具有黏附、抗吞噬作用,与细菌的致病性有关,在细菌的鉴定中有重要意义.猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是猪的重要致病菌,可以引起脑膜炎、败血症、心内膜炎、关节炎、肺炎等疾病,...
- 吴小红郝淮杰李豫川严格田光姜永强
- 关键词：猪链球菌荚膜超微结构
- 文献传递
- 一种猪链球菌2型核酸酶表面蛋白、其制备方法及用途
- 本发明公开了一种猪链球菌2型核酸酶表面蛋白，还公开了该蛋白质的制备方法及用途。本发明的猪链球菌2型核酸酶表面蛋白在genebank中的编号为gi|146321396，其制备方法包括克隆该核酸酶表面蛋白基因；将基因与大肠杆...
- 姜永强郝淮杰郑玉玲耿红冉张炜李文君袁媛江华
- 文献传递
- 猪链球菌与人脑微血管内皮细胞相互作用研究
- 猪链球菌病是重要的新发传染病,1998年和2005年先后两次在我国江苏和四川爆发流行,造成200多人感染,50多人死亡,具有较高的病死率和病残率。脑膜炎为猪链球菌感染的主要临床症状。目前,猪链球菌致脑膜炎的致病机制还不完...
- 郝淮杰
- 关键词：猪链球菌脑微血管内皮细胞基因表达谱荚膜
- 文献传递
- 单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。
- 郝淮杰郑玉玲余多慰马茹姜永强
- 关键词：超抗原
- 钌红染色观察猪链球菌荚膜超微结构研究
- 本研究探讨钌红染色方法是否能用于观察猪链球菌荚膜的超微结构，结果显示，电镜下猪链球菌呈圆形或卵圆形，单个或呈链状排列。细胞内核质呈丝状，核糖体散在分布。细胞壁完整，与细胞质膜结合紧密。细胞表面包被一层荚膜，荚膜厚而肥大，...
- 吴小红郝淮杰李豫川严格田光姜永强
- 关键词：超微结构致病机制
- 文献传递
- 单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA（D227A）分子的构建与活性研究
- 肝细胞肝癌/(HCC/),简称肝癌,是恶性程度极高的恶性肿瘤,素有“癌王”之称,目前临床对肝癌的诊治仍然十分困难,仍以手术治疗和放化疗为主。近年来,以抗体为基础的导向治疗方法的研究为肿瘤的诊治带来了生机,先后出现了以单链...
- 郝淮杰
- 关键词：超抗原
- 文献传递
- 蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的原核表达纯化及ELISA方法鉴定被引量：6
- 2011年
- 目的:构建蜱传脑炎病毒TBE-E-D3抗原的融合蛋白原核表达质粒GSTpET-30a(+)/TBE-E-D3,在大肠杆菌中诱导表达并用亲和层析法纯化,以获得特异性诊断抗原。方法:根据目的基因序列设计PCR引物,利用基因克隆技术构建重组质粒,转入大肠杆菌DH5α后经酶切鉴定,将测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达后进行亲和层析法纯化,SDS-PAGE分析其表达情况和纯度,间接ELISA法鉴定重组蛋白的特异性和灵敏度。结果:TBE-E-D3基因目的片段以正确的读框插入载体GSTpET-30a(+),通过IPTG诱导在大肠杆菌中正确表达,亲和纯化得到较高纯度的蛋白质;间接ELISA法证明抗原特异性和灵敏度良好,送检的15份阳性患者血清样本中检出10份阳性结果,40份健康人血清样本中检出1份假阳性结果。结论:获得的His-TBE-E-D3融合蛋白具有良好的抗原性,可作为森林脑炎病毒特异性血清学诊断的备选抗原之一。
- 王丹康晓平郝淮杰郑玉玲姜永强杨银辉陈福生
- 关键词：蜱传脑炎病毒原核表达纯化特异性
