闫琦
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：北京大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠谷氨酸受体2抗体制备及其与Caspase 3相互作用分析被引量：1
- 2008年
- 目的克隆大鼠谷氨酸受体2(GluR2)基因片段,构建重组表达质粒,在原核系统诱导表达,制备多克隆抗体,分析GluR2与caspase3的相互作用。方法从大鼠脑组织提取总RNA,实时聚合酶链反应(RT-PCR)扩增GluR2基因抗原性较强的一段,定向克隆入表达载体pGEX-4T1,构建GST-GluR2融合蛋白表达质粒,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达GluR2蛋白。用SDS-PAGE方法分离目的蛋白,免疫家兔,制备抗血清。用Western Blot方法鉴定抗体的特异性,用Co-IP实验分析GluR2和caspase3的相互作用。结果SDS-PAGE显示GST-GluR2融合蛋白诱导表达成功;Western Blot显示制备的多克隆抗体具有较高的特异性;Co-IP显示大鼠脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用。结论成功获得兔抗鼠GluR2特异性抗血清;脑组织中GluR2和caspase3存在相互作用,为进一步研究神经毒作用导致GluR2下调的分子机制奠定基础。
- 安国顺李淑艳闫琦周允贾弘褆倪菊华
- 关键词：受体谷氨酸半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
