韦宇拓
- 作品数：236 被引量：551H指数：11
- 供职机构：广西大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 一种编码木糖异构酶的基因及其应用
- 一种编码木糖异构酶的基因Pgi，属于基因工程技术领域。该基因含有SEQ ID NO.1的核苷酸序列，该基因编码的蛋白质含有SEQ ID NO.2的氨基酸序列，该蛋白质用于以木糖为原料生产木酮糖或以葡萄糖为原料生产果糖。本...
- 杜丽琴黄日波黄金群韦宇拓闭海王子龙
- 绿色糖单孢菌麦芽糖α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达被引量：2
- 2016年
- 【目的】构建高产麦芽糖α-淀粉酶的工程菌株并实现高效分泌表达。【方法】PCR扩增麦芽糖α-淀粉酶基因sva,再与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型穿梭载体pHCMCO4-Pglv连接,构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并转入枯草芽孢杆菌进行表达,对重组酶进行SDS-PAGE分析,然后对重组菌株的生长及发酵条件进行优化。【结果】成功构建重组质粒pHCMCO4-Pglv-sva并在枯草芽孢杆菌中实现分泌表达,SDS-PAGE分析发现,在55kDa处得到特异性蛋白条带。单因素试验结果显示,重组菌的最适诱导温度为35℃,最适接种量为4%(V/V),最适装液量为30mL。正交实验结果显示,重组菌的最佳发酵条件组合是诱导温度37℃、接种量5%(V/V)、装液量25mL,在此条件下发酵液粗酶活力达到257.3698U/mL。装液量对重组菌的产酶量影响显著。【结论】成功构建能高效分泌表达麦芽糖α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌株,经发酵条件优化后,重组酶产量显著提高10倍左右。
- 柳梅梅谢敏杨燕芳刘滔滔杜丽琴梁智群韦宇拓
- 关键词：枯草芽孢杆菌
- 一种蔗糖磷酸化酶的突变体T155S及其应用
- 本发明属于酶学技术领域，具体涉及一种蔗糖磷酸化酶的突变体T155S及其应用。一种蔗糖磷酸化酶的突变体T155S，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的蔗糖磷酸化酶突变体T155S是通过将Bspase的155位...
- 杜丽琴林厚民赵英丽闭德武黄日波韦宇拓
- 纤维微菌海藻糖合成酶基因克隆表达及酶学特性鉴定
- 2016年
- 【目的】开发适用于海藻糖生产的新型海藻糖合成酶。【方法】通过反向PCR技术,从一株纤维微菌的基因组DNA中获知海藻糖合成酶基因完整ORF序列,进而克隆得到纤维微菌海藻糖合成酶基因(CCTreS),将其与表达载体pSE380构建重组质粒后转入大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,通过镍柱亲和层析纯化得到纯酶并进行酶学性质测定。【结果】从纤维微菌中克隆并在大肠杆菌中成功表达海藻糖合成酶基因(CCTreS)。经纯化获得的重组酶(CCTreS)在以麦芽糖为底物生成海藻糖时,最适反应pH值为7.0,最适反应温度为45℃,40℃保温1h仍具有80%以上的相对酶活力,在pH值5.5~8.5保存24h,相对酶活力仍保留80%以上。Cu^(2+)对其有明显抑制作用。【结论】该重组酶具有很好的热稳定性和pH稳定性,具有一定的研究价值和潜在的工业应用价值。
- 曹磊刘滔滔张宏涛谢敏杜丽琴梁智群韦宇拓
- 关键词：海藻糖合成酶
- 大肠杆菌嗜盐α-淀粉酶基因的分子改造及其酶学特性被引量：1
- 2016年
- 【目的】对大肠杆菌Escherichia coli嗜盐α-淀粉酶基因进行改造,并探索嗜盐α-淀粉酶的嗜盐特性。【方法】从非嗜盐的大肠杆菌JM109中克隆到一个嗜盐α-淀粉酶基因k6并进行重组表达。通过同源建模,确定Na+结合位点上的氨基酸残基,并对相应位点进行定点突变。最后对突变酶的酶学性质进行研究。【结果】相对于野生酶,突变酶更加嗜盐,其最适NaCl浓度由2mol/L增加到3mol/L,最适pH值为7,最适温度为50℃,酶活力为4 831U/mg,提高近4倍。经HPLC检测,突变酶与2%(W/V)可溶性淀粉反应后的产物为葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖的混合物。【结论】嗜盐α-淀粉酶基因k6的嗜盐特性与Na+结合位点具有直接联系。
- 李剑龙杨媛吴昊汤宏赤韦宇拓
- 关键词：同源建模
- 一个属于糖基水解酶家族3的β-木糖苷酶在水解玉米芯木聚糖中的应用
- 本发明属于酶学工程技术领域，具体涉及的是一个属于糖基水解酶家族3的β‑木糖苷酶在水解玉米芯木聚糖中的应用。本发明从鞘氨醇单胞菌ATCC31461中克隆到一个β‑木糖苷酶基因spbgl4，将其与克隆表达载体pSE380连接...
- 杜丽琴梁蒙周洁寇力丹唐婷婷黄日波莫莉韦宇拓
- 文献传递
- 耐放射异常球菌海藻糖合成酶基因的克隆及功能鉴定被引量：10
- 2004年
- 利用生物信息学手段 ,在GenBank中进行氨基酸序列的同源性比较分析 ,检索到来自于耐放射异常球菌(Deinococcusradiodurans)基因组序列中一功能未确定的开放阅读框 (ORF) ,其氨基酸序列和已报道的海藻糖合成酶的氨基酸序列有约 6 0 %的同源性 .将这段ORF克隆到大肠杆菌进行表达 ,并进行功能鉴定 .实验表明这段ORF序列所编码的是一种海藻糖合成酶 ,它能将麦芽糖分子转化成海藻糖分子 ,以 30 %的麦芽糖为底物时能将约 6 5 %的麦芽糖转化成海藻糖 .重组酶性质初步研究表明 ,在 pH 7 0 ,最佳温度 30℃转化麦芽糖效率 最高 .
- 韦宇拓朱绮霞罗兆飞陈发忠李桂媛黄鲲黄日波
- 关键词：海藻糖合成酶基因克隆
- 一株嗜热菌的分离、鉴定及海藻糖合成酶基因的克隆
- 2011年
- 从广西贺州市80℃热泉分离了一株嗜热菌TTH,生长温度范围在55℃～85℃,最适生长温度70℃左右,最高生长温度85℃,G+C物质的量分数为67.6%.对菌株TTH从形态、培养条件、16S rRNA基因序列和系统发育分析方面进行了研究,表明该菌株与3株嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的同源性达到98%,初步鉴定是嗜热栖热菌(Thermus thermophilus).克隆了该菌的海藻糖合成酶基因,它与菌株Thermus thermophilus RQ-1,Thermus caldophilus,Thermus thermophilus HB8,Thermus thermophilus的同源性达到87%.
- 王慧荣韦宇拓黄日波
- 关键词：嗜热菌RRNA系统发育分析海藻糖合成酶基因
- 一种新的DNA银染方法被引量：46
- 2000年
- 本文介绍一种有效的聚丙烯酰胺中的DNA银染方法 ,其具有背景浅、快速、灵敏度高等特点。利用该方法对MarkerX和棉花的RAPD产物进行银染 ,取得了较满意的结果。说明该方法适于聚丙烯酰胺中的DNA银染。
- 方卫国韦宇拓裴炎
- 关键词：银染聚丙烯酰胺DNA棉花
- 抗GD2单链抗体-IL-2融合蛋白基因的构建及表达被引量：7
- 2007年
- 将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125)基因,与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR法,构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。表达蛋白为包涵体,表达量占总蛋白的30%以上,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表达蛋白的分子量为43 kD,与预期的相符。包涵体粗提后,经Ni2+亲和层析柱及Sephacryl S-200HR柱分离复性,纯度可达90%以上,ELISA试验结果证明该融合蛋白保存了与相应抗原的结合活性和IL-2的生物活性。
- 倪剑锋纪剑飞吕安国黄日波韦宇拓吴文芳
- 关键词：单链抗体白细胞介素2融合蛋白
