目的:利用Ad Easy TMsystem构建携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,转染至人胚肾细胞系HEK293细胞,检测外源FAM3C在细胞中的表达。方法:取小鼠肾脏提取RNA,创建c DNA文库,用PCR的方法扩增FAM3C基因,将其克隆到p EASY-1载体中,T3连接酶连接。经Bgl II单酶切后,接入p Ad Tra Ck-CMV穿梭载体,T4连接酶连接,构建重组腺病毒的穿梭质粒p Ad Tra Ck-CMV-FAM3C。将经Pme I线性化的p Ad Track-CMFAM3C电穿孔共转化入BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-FAM3C,再将经Pac I线性化的Ad-FAM3C重组病毒骨架质粒转染人胚胎肾细胞系HEK293细胞,包装并扩增病毒。用Ad-FAM3C感染小鼠肾系膜细胞,Western blot法检测FAM3C在小鼠肾系膜细胞中的表达。结果:DNA序列分析和琼脂糖凝胶电泳结果表明,已构建表达FAM3C基因的重组腺病毒,该腺病毒在体外能有效感染小鼠肾系膜细胞,且高表达FAM3C蛋白。结论:成功地构建了携带小鼠FAM3C基因的重组腺病毒,为进一步阐明FAM3C的功能及作用机制奠定实验基础。
目的:比较益智不同极性提取部位对糖尿病肾病(DN)的保护作用,筛选其有效部位,为DN的治疗提供实验依据。方法:采用链脲佐菌素建立DN小鼠模型,DN小鼠分为正常组(按10 m L·kg-1灌胃水)、模型组(按10 m L·kg-1灌胃水)、厄贝沙坦组(按10 m L·kg-1灌胃给药)和益智提取物组(石油醚部位、三氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位,按20 g·kg-1·d-1灌胃给药),定期观察小鼠的血糖及血生化,定时测定尿量及尿蛋白排泄量,确定益智抗DN的有效部位。结果:与正常组比较,其余各组小鼠血糖显著升高,且这6组间无显著性差异;随着给药时间的延长,各药物组血糖并无明显降低,与模型组无差异。与正常组相比,模型组的24 h尿蛋白明显升高;与模型组相比,各给药组则明显降低。与正常组比较,各组小鼠体重显著减轻,相对肾重显著增加;药物干预后,与模型组比较,各药物组小鼠体重显著增加,相对肾重明显降低。与正常组相比,给药后各组小鼠的血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)升高明显;与模型组相比,各药物组小鼠的SCr和BUN降低明显。益智的石油醚部位优于其他部位,能显著减少DN小鼠尿蛋白的排出并降低SCr和BUN;24 h尿蛋白,SCr,BUN分别为(1.99±0.21)mg,(121.16±9.66)μmol·L-1,(7.70±0.41)mmol·L-1,对DN肾功能具有良好的保护作用。结论:益智石油醚部位为抗DN的有效部位。
