韩雪飞
- 作品数：79 被引量：200H指数：8
- 供职机构：郑州大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 脐血间充质干细胞的体外培养及其表面标志变化被引量：2
- 2010年
- 背景:目前有关脐血间充质干细胞的体外培养和大规模扩增方法不一,存在一定困难。目的:观察脐血间充质样干细胞体外分离和培养的方法,并检测其表面分子的变化。方法:取新鲜采集脐带血,用1.077g/cm3的淋巴细胞分层液,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞。将脐血单个核细胞接种于37℃、含体积分数为5%CO2培养箱内培养。于不同时间观察细胞形态的变化并通过流式细胞仪检测细胞表面分子的表达情况。结果与结论:从脐血中分离出的单个核细胞,培养中先出现大量的造血细胞集落,CFU-GM与BFU-E集落形成最多,集落分别增加了(37.1±2.3)和(10.4±1.7)倍,瑞氏染色显示这些细胞大多数为粒系的集落(80.1±85.2)%,其次为红系的细胞集落(14.2±1.8)%,7d后出现贴壁的扁平状上皮样细胞和长梭形成纤维样细胞,同时有大量的破骨样细胞混杂。扩增后第14天经流式细胞仪分析CD38+细胞为1.64%,CD34+/CD38+细胞为1.71%,CD34+/CD38-细胞为0.55%,PI+细胞为0.05%,Annexin-V+细胞为0.18%。随着培养时间的延长,细胞数目不断增加,培养21d时,单个核细胞扩增了近7.8倍.,第28天增加了1.71倍。经流式细胞仪分析CD38+细胞为74.32%,CD34+/CD38+细胞为1.61%,CD34+/CD38-细胞为0.24%。提示脐血间充质干细胞可以体外培养。
- 刘素芳段东晓韩雪飞鄢文海邢莹
- 关键词：体外培养CD34CD38脐血间充质干细胞
- 脐血间充质干细胞移植后帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的变化被引量：6
- 2010年
- 背景:目前干细胞移植对帕金森病动物模型的研究多集中在骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞方面,关于脐血间充质干细胞移植对帕金森病动物模型的研究相对较少,且未见测量脐血间充质干细胞移植前后多巴胺含量变化的报道。目的:观察脐血干细胞移植对帕金森病大鼠纹状体内多巴胺含量的影响。方法:帕金森病模型大鼠随机分成实验组和对照组。将第3代脐血间充质干细胞用Hoechst33258标记后植入实验组大鼠纹状体内,对照组注射磷酸盐缓冲溶液。移植后2,4,8周用免疫荧光双标法检测间充质干细胞的存活、迁移以及胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶和突触素的表达。移植后8周利用高效液相色谱-电化学检测仪检测纹状体多巴胺含量。结果与结论:脐血间充质干细胞移植后可在大鼠脑内存活,随时间延长迁移范围扩大,分布于纹状体、胼胝体和皮质;胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶、酪氨酸羟化酶都有表达,突触素无表达。多巴胺水平与对照组相比有明显提高(P<0.05)。
- 刘芳樊志刚韩雪飞
- 关键词：脐血间充质干细胞细胞移植帕金森病多巴胺
- Wnt信号通路参与AD发病机制的初步研究
- ＜正＞阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种进行性神经退行性疾病,其主要病理变化是大脑皮质和海马区域出现老年斑（senile plaque,SP）和神经元纤维缠结（neurofibrillar...
- 王晋景莹韩雪飞鄢文海邢莹
- 文献传递
- SDF-1α对海马神经元突起延伸和增殖的影响(英文)被引量：2
- 2011年
- 目的:观察基质细胞衍生因子1α(stromal cell derived factor-1 alpha,SDF-1α)对体外培养的海马神经元突起延伸与凋亡的影响。方法:应用免疫细胞荧光方法观察SDF-1α和CXCR4在细胞的定位;以不同浓度的SDF-1α处理细胞,观察细胞形态的变化;并采用阻断剂AMD3100阻断CXCR4受体,观察其对细胞的影响;通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:免疫荧光细胞化学方法显示SDF-1α和CXCR4主要表达在体外培养的海马神经元的胞膜和胞浆;不同浓度的SDF-1α改变了细胞的形态,促进了突起延伸;AMD3100则抑制了细胞突起增长;流式细胞仪检测显示SDF-1α减少了细胞凋亡。结论:SDF-1α可影响海马神经元突起延伸和凋亡效应,该机制可能与受体CXCR4有关。
- 刘素芳邢孟韬韩雪飞鄢文海景莹邢莹
- 关键词：形态学基质细胞衍生因子细胞凋亡
- 增强型绿色荧光蛋白转染豚鼠间充质干细胞的研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为种子细胞标记物的可行性。方法构建EGFP逆转录病毒载体,转染豚鼠骨髓间充质干细胞(M SC),用阳离子脂质体介导法将病毒质粒导入HEK 293包装细胞内。经G 418筛选出阳性细胞克隆,取阳性克隆的病毒上清感染豚鼠骨M SC。筛选出稳定表达EGFP的M SC克隆,并向神经元方向诱导。检测神经元样细胞的特异性标志神经丝蛋白(NF)的表达。结果EGFP的逆转录病毒载体成功构建。病毒上清转染豚鼠M SC后,EGFP能稳定表达1个月以上,并且M SC细胞诱导后能表达NF。结论EGFP逆转录病毒载体易于构建成功并能在靶细胞中长期稳定表达,不影响细胞的分化特性,可以用作细胞标记。
- 韩雪飞刘瑞敏王永奎景莹贾敏鄢文海邢莹
- 关键词：绿色荧光蛋白间充质干细胞神经元
- 大鼠神经干细胞分化后GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达及其调节
- 已有研究证实,在脑内成熟的神经元中有GSK-3β、CDK-5和PP2A的表达,且Aβ25-35和人参皂苷Rb1对它们的表达均有调节作用,但对于由神经干细胞诱导分化而来的神经元却未见相关研究报道.为此在本实验中我们采用免疫...
- 邢莹赵庆霞许燕郭思姜媛缓韩雪飞鄢文海
- 关键词：GSK-3ΒPP2AGINSENOSIDERB1AΒ25-35
- APP转基因小鼠脑组织中4.1B蛋白的表达研究
- 2012年
- 目的检测4.1B蛋白在阿尔茨海默病模型APP转基因小鼠脑组织中的表达。方法 PCR鉴定APP转基因阳性[APP(+)]小鼠和APP转基因阴性[APP(﹣)]小鼠,分别取不同脑区用免疫组织化学法和免疫印迹法检测4.1B蛋白的表达。结果免疫组织化学法显示在APP(+)鼠和APP(-)鼠的大脑皮层和海马均可见4.1B阳性细胞,APP(+)组小鼠的4.1B蛋白表达明显高于APP(-)组小鼠。免疫印迹法检测APP(+)组和APP(-)组小鼠脑组织海马、皮层和小脑中均有4.1B蛋白的表达,APP(+)组各脑区4.1B蛋白表达均明显高于APP(-)组。结论 APP高表达引起脑组织内4.1B蛋白的表达增高。
- 段萍李月美韩雪飞刘俊玲王若愚鄢文海邢莹
- 关键词：淀粉样前体蛋白转基因鼠阿尔茨海默病
- 小鼠胚胎干细胞Notch1基因沉默对糖原合酶激酶3β和周期蛋白依赖性激酶5表达的影响
- 2010年
- 背景:GSK-3β与CDK-5都属于磷酸化蛋白激酶,一并参与胚胎神经细胞分化发育具体机制尚不清楚。目的:观察胚胎干细胞Notch1基因沉默后Hes-1、PS1、Gsk-3β和Cdk5表达的变化以及Notch信号对Gsk-3β和Cdk5表达的调节作用及对早期神经细胞分化发育的潜在影响。方法:通过阳离子脂质体转染法将Notch1siRNA真核表达载体转入小鼠胚胎干细胞。倒置显微镜下观察转染前后细胞的形态变化;48h后收集细胞,RT-PCR检测包括Notch1在内的Hes-1、PS1、Gsk-3β和Cdk5基因水平表达情况,单因素方差分析各组间差异。结果与结论:①RT-PCR检测到转染pSINsi-U6-Notch1质粒组胚胎干细胞Notch1、Hes-1、GSK-3β和Cdk5的表达情况较转染空质粒组与正常对照组显著降低(P<0.05),转染空质粒组与正常对照组之间无明显差异(P>0.05,n=5)。②倒置显微镜下观察未见外源质粒的转入对胚胎干细胞克隆性生长的影响,只是转染pSINsi-U6-Notch1质粒组胚胎干细胞的增殖量较其他两组有所降低。③胚胎干细胞PS1表达情况3组间无显著差异(P>0.05)。可以看出,胚胎干细胞Notch1基因表达水平的降低导致蛋白激酶GSK-3β、Cdk5表达的下调。
- 张秋莹段萍韩雪飞许燕邢莹鄢文海
- 关键词：胚胎干细胞NOTCH信号途径GSK-3ΒCDK5
- 人参皂苷Rb1减轻Aβ_(25～35)所致新生神经细胞损伤被引量：3
- 2010年
- 目的研究β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导新生大鼠神经细胞中蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡及人参皂苷Rb1对此作用的干预效应。方法从新生大鼠海马分离神经干细胞（NSCs）体外培养,诱导分化7 d后收获新生神经细胞,分3组：Aβ25~35组的培养基中加入20μmol/L Aβ25~35处理12 h;Rb1＋Aβ25~35组先在含10μmol/L Rb1的培养基中预处理24 h后,再用20μmol/L Aβ25~35处理12 h;对照组不加任何其他处理因素。RT-PCR和免疫细胞化学法检测各组新生神经元的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和磷酸化Tau蛋白的表达。结果Aβ25~35处理组与对照组相比,糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）和细胞周期蛋白依赖性激酶5（CDK-5）的mRNA表达增加,蛋白磷酸酶2A（PP2A）的mRNA表达减少;荧光显微镜下,活化型GSK-3β（pY279,216）表达增加,PP2A表达降低;微管相关蛋白Tau（pS396）和Tau（pS262）的阳性细胞率明显增高。Rb1预处理可以显著降低Aβ25~35引起的上述蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶和Tau改变。结论Aβ25~35诱导体外分化的新生大鼠神经细胞的蛋白激酶/蛋白磷酸酯酶系统失衡和Tau蛋白过度磷酸化,人参皂苷Rb1可减轻Aβ25~35引起的上述作用。
- 段萍邢孟韬许燕韩雪飞李博赵庆霞鄢文海
- 关键词：新生神经元人参皂甙RB1淀粉样蛋白TAU
- AP一Ⅲ对小鼠肝癌的生长抑制作用及带瘤小鼠胸腺重量的影响
- 蝎毒抗癌多肽(antineoplastic polypeptide from Buthus martensii venom,APBMV)是从东亚钳蝎中分离的多肽类物质,经研究发现,其对小鼠肝癌、人低分化鼻咽癌上皮细胞CN...
- 韩雪飞王永奎董伟华陈华艳孔天翰
- 文献传递
