黄晓燕
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 供职机构：桂林医学院生物技术学院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 间日疟原虫孢子期SSUrRNA基因扩增、鉴定及其诊断应用被引量：5
- 2007年
- 目的体外扩增、克隆间日疟原虫孢子期SSUrRNA编码基因特异性片段,分析其分子特征,评价其核酸诊断应用效果。方法根据间日疟原虫基因库相关核酸序列设计引物,采用聚合酶链反应技术从间日疟患者血样DNA提取物中扩增出间日疟原虫SSUrRNA基因片段,与pGEM-Teasy质粒连接构建重组子并转化大肠杆菌JM109;阳性克隆以双酶切鉴定后,双脱氧末端终止法测定分析其序列特征;以SSUrDNA为靶基因,建立间日疟PCR诊断方法,并以镜检法为标准评价其用于间日疟原虫感染的检测效果。结果从间日疟患者血样中扩增的SSUrDNA片段大小约为267bp;阳性克隆双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段;核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段,含有267个核苷酸,与间日疟原虫Sal1株孢子期SSUrRNA基因序列比较,同源性为99·3%,其中第220位为插入了1个碱基“T”,243位碱基由“G”取代了“T”。将纯化的含有SSUrRNA靶基因的重组质粒以正常人血液核酸提取液倍比稀释成浓度梯度作模板,PCR扩增结果显示检测灵敏度至少达102copy/μl;特异性检验显示仅间日疟原虫患者血样扩增出约267bp的特异性基因片段,而恶性疟原虫、弓形虫、血吸虫、肝吸虫感染患者血样及正常人血未见特异性扩增条带。以镜检法为参照标准,PCR敏感性为100%(102/102),特异性为100%(76/76)。结论所扩增克隆的间日疟原虫孢子期SSUrDNA片段序列具有种特异性且相对稳定,不同地理株间存在单核苷酸多态性,以其为靶基因建立的PCR检测方法敏感、特异,具有良好的推广使用价值。
- 高世同张仁利黄晓燕耿艺介黄达娜吴少庭
- 关键词：间日疟原虫
- 恶性疟原虫海南株子孢子期SSU rRNA编码基因的克隆及序列分析
- 2010年
- 目的克隆恶性疟原虫海南株子孢子期小亚基核糖体核糖核酸（SSUrRNA）编码基因片段，分析其序列特征。方法根据恶性疟原虫基因库相关核酸序列设计1对引物，采用PCR方法从海南恶性疟患者血样核酸提取物中扩增出恶性疟原虫SSUrRNA基因片段，纯化后与pGEM-Teasy质粒连接，构建重组子并转化大肠杆菌JM109；阳性克隆经双酶切鉴定后，双脱氧末端终止法测定序列，采用BLAST软件分析其特征。结果恶性疟原虫子孢子期SSUrRNA基因扩增片段大小约为347bp；阳性克隆重组质粒双酶切及PCR扩增均得到预期大小的片段；核酸序列测定显示插入的SSUrRNA基因扩增片段含有347个核苷酸，与GenBank中的恶性疟原虫3D7株相同序列进行比对，其同源性为100％，而与7G8株的同源性则为98．0％，其中第153位碱基发生了缺失，第184位碱基由C取代了T，而第188位T碱基与第189位A碱基为插入碱基，第243位碱基则由T取代了c。结论成功克隆恶性疟原虫海南株孢子期SSUrRNA编码基因序列，该序列相对保守，不同地理株间存在单核苷酸多态性。
- 高世同张仁利黄达娜黄晓燕耿艺介吴少庭
- 关键词：恶性疟原虫SSU
