黎万顺
- 作品数：6 被引量：30H指数：4
- 供职机构：重庆师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库构建被引量：5
- 2010年
- 葱蝇具有夏滞育的特性且与果蝇近缘.为构建葱蝇夏滞育蛹的全长cDNA文库,并为进一步的夏滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础,利用RNAiso试剂盒提取葱蝇夏滞育蛹的总RNA,采用SMART技术合成全长cDNA,限制性酶切消化后将cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB.经鉴定原始文库的滴度为2.4×107cfu/mL.随机挑取克隆,经PCR快速鉴定,插入片段大小在0.35～2.2kb之间,平均大小约为0.9kb,重组率达100%,获得了高质量的葱蝇夏滞育蛹cDNA文库.
- 冯国忠黎万顺陈斌李莹
- 关键词：葱蝇全长CDNA文库SMART技术
- 葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库构建被引量：8
- 2010年
- 葱蝇具有兼性滞育的特性且与果蝇近缘，是昆虫滞育分子机理和冬滞育和夏滞育专化基因比较研究的理想模式种，本研究目的在于构建葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库，为进一步的滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础。利用RNAiso试剂提取葱蝇非滞育蛹的总RNA，采用SMART技术合成全长cDNA，将限制性内切酶Sfi I消化后的cDNA克隆到质粒载体pDNR－LIB，转化入大肠杆菌（DH10B），获得原始文库。经过涂平板测定表明，原始文库的库容量为2．3×10^7个单克隆；随机挑取15个单克隆，通过PCR快速鉴定，插入片段大小在0．4～1．2kb之间，平均大小在0．9kb，重组率达100％。这些结果表明本研究所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的基因的分离筛抗和克隆表达的建库要求。
- 黎万顺陈斌冯国忠李廷景
- 关键词：葱蝇全长CDNA文库SMART技术
- 葱蝇非滞育、冬滞育和夏滞育蛹发育和形态特征比较被引量：6
- 2012年
- 昆虫非滞育、冬滞育和夏滞育蛹具有不同的生理和发育过程。本研究以葱蝇Delia antiqua作为模式种,以黑腹果蝇Drosophila melanogaster蛹的发育形态特征和命名为参照,用解剖、拍照、长度测量和图像处理等方法系统地比较研究了非滞育、冬滞育和夏滞育蛹的发育历期和形态变化,重点在头外翻和滞育相关发育和形态特征,目的在于弄清非滞育、冬滞育和夏滞育蛹发育和形态特征差异,为滞育发育阶段的识别、滞育分子机理研究奠定形态学基础。冬滞育蛹的滞育前期、滞育期和滞育后期分别为4,85和27d,夏滞育蛹的滞育前期、滞育期和滞育后期分别为2,8和22d。从化蛹至头外翻完成为滞育前期,头外翻完成约10h内复眼中央游离脂肪体可见。头外翻的完成是滞育发生的前提,非滞育、夏滞育和冬滞育蛹头外翻发生在化蛹后的48,36和83h,在头外翻过程中发育形态没有差异。头外翻的过程为:首先,头囊和胸部附肢从胸腔外翻,头部形态出现;然后,腹部肌肉继续收缩,将血淋巴和脂肪体推进头部及胸部附肢。葱蝇蛹在完成蛹期有效积温约15%时进入冬滞育或夏滞育。在滞育期,蛹的形态一直停留在复眼中央游离脂肪体可见这一形态时期,且冬滞育和夏滞育的蛹在形态上没有区别。在体长、体宽和体重上,冬滞育蛹最大,夏滞育蛹次之,非滞育蛹最小。在滞育后期,在黄色体出现期间,非滞育蛹的马氏管清楚可见,呈绿色,而滞育蛹的马氏管几乎不可见。本研究为认知昆虫滞育生理、从发育历期和形态上推断滞育发育进程提供了依据。
- 黎万顺陈斌何正波
- 关键词：葱蝇滞育比较形态学发育历期有效积温
- 葱蝇冬滞育和夏滞育专化基因的比较研究
- 葱蝇是世界性地下害虫,对百合科蔬菜的产量和质量影响极大。它是冬滞育(winter diapause)和夏滞育(summer diapause)专化基因比较研究的理想模式种。目前国际上对这两种滞育专化基因的比较研究仍非常薄...
- 黎万顺
- 关键词：葱蝇抑制消减杂交
- 葱蝇的实验室饲养、生物学特性及滞育诱导被引量：18
- 2010年
- 葱蝇是昆虫滞育分子机理、滞育期抗逆基因、冬滞育和夏滞育专化基因比较等研究的理想模式种,为开展昆虫滞育分子机理及抗逆基因研究,从日本引进葱蝇并设计了葱蝇的培养笼,首次在国内建立了稳定的实验室种群。基于早前的研究工作基础,对葱蝇最佳食物、人工饲养技术和条件、冬滞育和夏滞育诱导和终止条件作了进一步研究;并对各虫期、冬滞育和夏滞育期的生理和生物学特性作了进一步观察;成功地获得了供分子生物学研究需要的非滞育、冬滞育和夏滞育葱蝇各发育阶段的样品。特别重要的是,在本研究通过适度提高光照强度可以使所有实验蛹进入夏滞育。因此,本实验室能够获得100%的冬滞育和夏滞育蛹。本文报道和总结葱蝇的实验室饲养技术、各虫态主要生物学习性,以及冬滞育和夏滞育的诱导和终止策略。
- 陈斌黎万顺冯国忠何正波李廷景
- 关键词：葱蝇人工饲料生物学特性滞育诱导
- 葱蝇非滞育蛹期的发育形态学研究被引量：3
- 2012年
- 葱蝇是昆虫蛹滞育研究的理想模式种,其发育形态学特征对推断滞育发育过程至关重要,目前还没有花蝇科蛹期发育形态学的相关报道.本研究通过解剖和拍照观察,系统地研究了葱蝇老熟幼虫期到羽化的发育形态学特征,特别注重头外翻前后的形态变化.研究结果将老熟幼虫期划分为5个发育阶段;将预蛹期分为白色围蛹期和棕色围蛹期2个亚时期,13个发育阶段;将蛹期分为隐头蛹期和显头蛹期2个亚时期,30个发育阶段.其中,显头蛹期又可细分为显头蛹初期、发育形态停滞期、半透明眼期、浅黄色到琥珀色眼期、红褐色眼期、鬃毛蛹期和预成熟期.本研究还详细地描述了各时期及发育阶段的发育过程、历期和形态特征,并详细地观察和描述了头外翻的发育过程,把蛹壳外可见幼虫口钩确定为头外翻发生的外部标志特征.同时,还描述了蛹主要发育阶段的长宽比例,成熟雌、雄蛹间的形态差异,结果表明雌虫体型(体长和体宽)比雄虫略大,雄虫的复眼比雌虫大,雌虫两复眼间的距离超过雄虫的2倍.本文是花蝇科昆虫蛹期发育形态学的首次报道,对认知蝇类昆虫蛹期发育形态,了解葱蝇滞育与非滞育蛹发育过程、历期和形态变化有重要的意义,为葱蝇滞育的分子机理研究奠定了形态学基础.
- 陈斌黎万顺何正波
- 关键词：葱蝇发育形态学发育历期
