目的:探讨燕窝在手术绝经大鼠肝细胞氧化应激中的抗氧化作用,揭示燕窝抗氧化作用的机制.方法:手术摘除大鼠双侧卵巢制备手术绝经大鼠模型,并通过观察大鼠动情周期确定模型是否成立;大鼠被随机分为5组(每组8只):卵巢切除组、假手术组、1.5%燕窝处理组、6%燕窝处理组及正常对照组.用不同浓度燕窝干预处理手术绝经大鼠12 wk后,检测大鼠肝功能[谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和谷氨酰转肽酶(gammaglutamyl transpeptidase,GGT)];ELISA试剂盒检测不同实验组的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,丙二醛(malonaldehyde,M D A)法检测肝组织脂质过氧化水平;采用实时定量PCR检测(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)方法检测抗氧化通路中关键基因SOD1/2/3和多(ADP-核糖)聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase 1,PARP1]的m RNA表达水平.结果:肝功能结果显示,绝经后ALT和GGT与绝经前无明显变化,但是ALP水平明显高于假手术组.手术对照组SOD表达量低于假手术组表达量(5.43±0.50 vs 9.96±0.39),手术对照组CAT表达量也低于假手术组表达量(3.93±0.33 vs 6.06±0.79),但是经过燕窝干预12 wk后,可以显著提高SOD和CAT表达水平,并能够显著提高SOD/CAT的比值.并且燕窝干预处理可以削弱绝经后引起的脂质过氧化损伤,6%燕窝处理组与1.5%燕窝处理组相比,MDA水平明显下降(1.37±0.03vs 1.45±0.04).q RT-PCR结果显示,与手术对照组比较,6%燕窝处理组和1.5%燕窝处理组均可上调SOD1 m RNA相对表达量(3.99±0.27 vs 3.21±0.17);SOD2 m RNA相对表达量(3.56±0.21 vs 3.23±0.16);SOD3 m RNA相对表达量(9.45±0.81 vs 8.02±0.92)和PARP1 m RNA的相对表达量(4.31±0.53 vs3.11±0.36).结论:本研究揭示手术摘除大鼠卵巢可诱导肝脏氧化应激的产生,而燕窝可通过调节肝细胞抗氧化通路中相关基因的表达发挥抗氧化作用,从�
目的:探讨白藜芦醇在酒精诱导的HepG2细胞凋亡中的调节能力,揭示白藜芦醇抗酒精性肝损伤的作用机制.方法:白藜芦醇预处理HepG2细胞24 h后,用酒精诱导凋亡的产生.MTT方法检测白藜芦醇处理组与非处理组HepG2细胞的细胞活力;用ELISA试剂盒检测不同实验组的细胞内总超氧化物浓度(total superoxide)和细胞总抗氧化能力(oxygen radical antioxidant capacity,O R A C);同时检测了含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteine-requiring aspartate protease,Caspase3)蛋白表达及应用荧光倒置显微镜观察了吖啶橙(acridine orange,AO)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色的细胞形态学改变;采用RT-PCR方法检测氧化应激调节凋亡通路中关键基因Caspase3,细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK),ERK激酶(mitogen-activated protein kinase kinase,MEK)和沉默信息调节因子1(silent mating type information regulation 1,SIRT-1)mRNA的表达.结果:MTT结果显示,与对照组比较,25-100μmol/L白藜芦醇可有效对抗300 mmol/L酒精对HepG2引起的细胞不良反应使细胞保持较高的活力;AO/PI活细胞凋亡检测显示了酒精处理组有大量的橙色凋亡细胞,而白藜芦醇预处理组橙色细胞明显减少;Caspase3结果显示不同浓度的白藜芦醇均可以降低被酒精激活的Caspase3的活性,其Caspase3的活性降为2.12、1.46、0.90和0.75倍;细胞内总超氧化物浓度结果显示预处理100、50、25μmol/L白藜芦醇组含量明显低于酒精诱导组;而未经白藜芦醇预处理的酒精诱导组ORAC(45.26±2.75)明显低于100、50、25μmol/L白藜芦醇预处理组(65.74±1.64、68.14±6.06、70.81±6.35).RT-PCR结果显示,与300 mmol/L酒精比较,不同浓度白藜芦醇均可上调SIRT1与ERK mRNA表达量;50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇均可明显上调MEK mRNA表达量;50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇均可显著下调Caspase3基因mRNA的表达量.结论:本研究提示酒精可诱导氧化应激�
