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Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响被引量：1: 2006年; 目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞，挑选8个单细胞克隆并扩增培养，加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量，并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549／Ptet-on／TK-Hyg／PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100～200ng／ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高，诱导1h即可有espl基因的表达，至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用，对肿瘤治疗有潜在的应用价值。; 刘丽莎刘昕程英; 关键词：A549细胞强力霉素染色体

A549细胞转染esp1基因后生物学行为的变化被引量：1: 2006年; 目的:观察A549细胞转染esp1基因后细胞生物学行为的改变。方法:将IRE-EGFP-esp1质粒用Fu-GENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系(esp1-A549)。采用DNA荧光染色流式细胞仪分析转染后细胞DNA含量、倍性及细胞周期,计算S期细胞比率(SPF)和DNA指数(DI);采用细胞表面磷脂酰丝氨酸检测法和闪烁计数法分别检测细胞凋亡和增殖情况,同时检测软琼脂集落形成能力。以未转染(A549)、转染空载体(neo-A549)的细胞作对照。结果:与其他2组比较,esp1-A549细胞的DI、SPF及细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高。esp1-A549细胞软琼脂集落形成数为3.5±0.6,克隆形成率为12.5%,低于A549细胞的23.3±0.2(t=4.93,P=0.004)和46%。结论:esp1基因的上调表达对A549细胞部分恶性生物学表型具有一定的抑制作用。; 刘丽莎刘昕刘永康; 关键词：A549细胞凋亡克隆形成细胞周期 DNA倍性

带有不同亚型HPVL_1基因片段的哺乳动物细胞克隆的建立被引量：1: 2006年; 目的构建携带HPV亚型L1基因片段的标准细胞株。方法根据HPV通用引物GP5+/GP6+,用重叠延伸PCR方法合成HPV亚型L1基因中约150bp片段;插入真核细胞表达载体EGFPN1,用脂质体转染SPC细胞,筛选以获得带有不同HPVL1基因片段细胞克隆,并用定量PCR方法确认。结果重叠延伸PCR后得到约150bp的基因片段,测序结果经BLAST比对,分别与相应HPV亚型公开报告序列一致;将所获片段与EGFPN1载体连接后酶切及测序鉴定正确;经筛选获得了携带HPV6、11、16、18、31、35亚型L1基因片段的细胞株;并用定量PCR方法进行了确认。结论成功构建了带有不同HPV亚型L1基因片段的30个亚克隆和6个细胞株,为进一步的HPV分型检测研究提供了保证。; 卓勤强刘昕钱春荣刘丽莎高玉梅; 关键词：HPV 定量PCR

转染分离酶cDNA对A<,549>细胞部分生物学效应的影响: 染色体是细胞内维持遗传物质稳定和保证其完整、准确传递的基本结构。在细胞有丝分裂中期，由两条姐妹染色单体组成的染色体仅在着丝粒处相连;在有丝分裂期后期，着丝粒的主要结构蛋白.粘合素(cohesin)被降解，两条姐妹染色单体...; 刘丽莎; 关键词：染色体肿瘤细胞; 文献传递

esp1基因过表达可诱导肿瘤细胞凋亡: 2006年; 目的研究esp1基因转染进入A549细胞后对细胞凋亡的影响。方法将含esp1基因的IRE-EGFP质粒经FUGENE 6转染试剂转染到肺腺癌细胞A549,用倒置显微镜及流式细胞仪检测转染后细胞染色体数以及转染后细胞凋亡及增殖的情况。结果esp1基因导入A549细胞后,染色体数目减少,无血清培养后细胞凋亡增加,增殖减少。结论esp1基因在A549细胞中不但可以显著地改善细胞的非整倍性而且可以有效地抑制细胞恶性增殖、促进细胞凋亡,从而为肺癌的治疗提供了一个新的靶标。; 刘丽莎刘昕; 关键词：基因表达肿瘤细胞凋亡

esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究被引量：1: 2006年; 目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。; 刘丽莎刘昕; 关键词：A549细胞转染凋亡

PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响被引量：1: 2006年; 目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。; 钱春荣刘昕刘丽莎卓勤强程英; 关键词：真核表达载体 A549细胞增殖凋亡

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刘丽莎