刘小林
- 作品数：3 被引量：8H指数：3
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅重点项目吉林省科技厅国际合作项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- Flt3配体基因原核表达载体的构建、表达、纯化及生物学活性鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的:获得人Flt3配体(FL)cDNA胞外段序列,构建表达人FL蛋白的原核重组表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。方法:提取K562细胞总RNA,利用巢式PCR技术扩增出目的cDNA序列,构建重组质粒pGEM-FL,经酶切、PCR和测序鉴定后,将rhFL基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-rhFL,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析方法纯化目的蛋白,Westren blotting杂交鉴定纯化蛋白,并用造血集落形成实验检测生物学活性。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank公布的FL基因序列100%一致。构建的原核表达载体PQE30-rhFL在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量为25000的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Westren blotting,在相对分子质量为25000处可见特异性着色带。结论:构建了原核表达载体PQE30-rhFL,并成功诱导了rhFL蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的rhFL蛋白。
- 刘小林段秀梅方艳秋谭岩史宏博车媛媛刘力华
- 关键词：配体原核表达巢式聚合酶链反应
- 结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化被引量：3
- 2006年
- 目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-MtbHSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Western blotting杂交鉴定纯化蛋白。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致。构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带。结论:成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70,并成功诱导Mtb HSP70蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白。
- 史洪博段秀梅李树蕾许淑芬车媛媛刘小林刘力华姜艳芳方艳秋谭岩
- 关键词：分支杆菌结核热休克蛋白质70原核细胞
- 人Flt3配体基因的克隆及在Hela细胞中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的:克隆人Flt3配体(FL)基因,检测其在Hela细胞中转录及表达蛋白的活性。方法:Trizol法提取K562细胞总RNA,经RT-巢式PCR得到FL的cDNA,PCR产物亚克隆入pGEM-T载体测序,构建pcDNA3/hFL。经Lipofectamine2000介导转入Hela细胞,RT-PCR法检测转染细胞中hFL基因的转录,ELISA法检测培养上清中hFL的含量,增殖和促生存实验鉴定hFL的活性。结果:所得FL基因序列正确。转染后的Hela细胞能转录FL基因,上清中hFL蛋白含量为56.8ng/ml/1,hFL能促Raji细胞生存及抑制凋亡(P<0.01),促进HL-60细胞增殖(P<0.05)。结论:构建的pcDNA3/hFL质粒在Hela细胞表达系统中能够有效转录,表达的hFL蛋白具有生物学活性。
- 黄河段秀梅谭岩刘力华方艳秋许淑芬姜艳芳刘小林杨红欣（校对）
- 关键词：FLT3配体HELA细胞生物学活性
