刘彦平
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 丙戊酸钠协同5-氮-2＇-脱氧胞苷对U266细胞RASSF1A基因表达调控的影响被引量：6
- 2010年
- 目的 探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-Azs-CdR）联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）对人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞中Ras相关区域家族1基因（RASSF1）的表达调控以及对细胞生物学活性的影响.方法 5-Aza-CdR、VPA单独或联合干预U266细胞,甲基化特异性PCR（MS-PCR）法和实时荧光定量-PCR（RQ-PCR）法检测药物干预前后RASSF1A基因甲基化状态和RASSF1A mRNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的改变.结果 未经药物处理的U266细胞检测到RASSF1A基因启动子区域的高甲基化,RASSF1A基因微弱表达,5-Aza-CdR可逆转RASSF1A基因CpG岛高甲基化.诱导U266细胞RASSF1A基因呈剂量依赖性表达（P〈0.05）,VPA不能诱导U266细胞RASSFlA基因表达,联合用药组U266细胞RASSF1A mRNA的表达明显增强（P〈0.05）;与5-Aza-CdR、VPA单药组相比,联合用药组对细胞增殖的抑制作用更强,细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）;与对照组相比,5-Aza-CdR或VPA作用于U266细胞72 h后,细胞阻滞于G0/G1期,联合用药组比单独用药组G0/G1期细胞阻滞作用更明显（P〈0.05）.结论 VPA联合5-Aza-CdR能有效逆转U266细胞RASSF1A基因的异常甲基化,可显著诱导因高甲基化而沉默的RASSF1A基因再表达,并明显增强5-Aza-CdR对U266细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.
- 卢菲刘传方马道新刘彦平孔海丽张晶晶
- 关键词：丙戊酸U266细胞基因表达调控
- 5-氮-2′-脱氧胞苷对RPMI8226细胞增殖、凋亡及SOCS-1基因表达的影响
- 2010年
- 目的研究DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226生物学活性以及SOCS-1基因表达的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L)对RPMI8226细胞干预后,采用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的改变;Real-timePCR法检测各组细胞SOCS-1mRNA的表达。结果5-Aza-CdR对RPMI8226细胞的生长抑制有明显的时间和剂量依赖性(P<0.05);流式检测结果显示,0.1、0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L5-Aza-CdR作用于RPMI8226细胞72h后,细胞凋亡率分别为(29.62±2.87)%、(39.98±2.53)%、(49.07±3.51)%、(60.15±4.54)%和(69.88±3.49)%,且呈剂量依赖性(P<0.05);与对照组相比,5-Aza-CdR处理RPMI8226细胞72h后,细胞阻滞于G0/G1期;Real-timePCR结果显示,SOCS-1基因在RPMI8226细胞中微弱表达,5-Aza-CdR作用后,SOCS-1mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(P<0.05)。结论5-Aza-CdR显著抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,可能与诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1再表达有关。
- 卢菲刘传方马道新刘彦平孔海丽张晶晶
- 关键词：DNA甲基化多发性骨髓瘤
- CD44基因沉默对K562/A02细胞逆转耐药及生物学活性的研究被引量：5
- 2010年
- 本研究旨在探讨CD44基因表达抑制对白血病多药耐药细胞株K562/A02耐药性及生物学活性的影响。根据CD44基因表达序列设计有效的RNA干扰片段,将其插入质粒表达载体中,获得针对CD44mRNA的特异性siRNA真核质粒(pGCsiRNA-CD44),转染K562/A02细胞。用实时荧光定量RT-PCR检测K562/A02细胞CD44、mdr-1和bcl-2mRNA的表达;用MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术(FACS)检测细胞周期;Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果表明:针对CD44基因的siRNA真核质粒可有效沉默K562/A02细胞的CD44基因:与对照组相比,转染了4条pGCsiRNA-CD44质粒的K562/A02细胞CD44表达均明显受抑,以转染了siCD44-1的细胞中抑制最强。转染pGCsiRNA-CD44质粒48小时后,K562/A02细胞CD44mRNA表达水平下降64.1%(p<0.05),同时mdr-1与bcl-2mRNA的表达量较对照组分别下降了25.6%与50.8%;K562/A02细胞IC50为(17.97±1.61)μg/ml,无义序列质粒转染后阿霉素对K562/A02细胞的IC50为(16.95±1.72)μg/ml,pGCsiRNA-CD44转染后IC50明显降低为(8.77±1.63)μg/ml(p<0.01)。转染48小时后,G0/G1期细胞比例提高了10.7%;细胞出现核固缩、核边集、凋亡小体等改变。结论:特异性CD44siRNA可显著抑制K562/A02细胞CD44基因的表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,并有效逆转K562/A02细胞的多药耐药性。
- 刘彦平刘传方马道新卢菲张晶晶孔海丽
- 关键词：CD44基因基因沉默K562/A02细胞
