刘立宏
- 作品数：7 被引量：15H指数：2
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- 松材线虫乙酰胆碱酯酶1基因沉默及蛋白抑制剂被引量：8
- 2015年
- 【目的】为提高苦参碱的杀虫效果,对松材线虫的药剂防治靶标乙酰胆碱酯酶1基因(Bx ACE1)进行研究。【方法】松材线虫采集自广东省内马尾松,贝曼漏斗法分离,灰葡萄孢菌苔上25℃避光培养扩繁线虫。克隆Bx ACE1基因全长并进行序列分析,通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断该基因功能,研究苦参碱的杀虫效果,并应用Q-PCR技术鉴定RNAi效果。【结果】5'和3'序列拼接得到基因全长2 145 bp,命名为Bx ACE1。同源序列多序列比对表明线虫ACE的进化速度与线虫进化速度一致。蛋白质三维结构分析表明,Bx ACE1由14个α螺旋包围着13个β折叠,鉴于氢键数量越多结合越稳定,利用docking技术筛选出石杉碱甲是松材线虫乙酰胆碱酯酶1蛋白的较佳抑制剂。RNAi明显增加了苦参碱的杀虫效果,石杉碱甲本身对线虫毒性较小,共同施用RNAi和石杉碱甲对线虫毒性仍然较小,但RNAi处理组线虫与Inhibitor(0.03%苦参碱+1μmol·L-1石杉碱甲处理线虫)处理组线虫在24,48及72 h存活率差异不显著,表明石杉碱甲处理线虫和Bx ACE1基因RNAi处理效果相近。【结论与其他】通过基因沉默和蛋白抑制2种技术阻断Bx ACE1功能均可以提高苦参碱的杀虫效果,RNAi技术能够简单易行地证明若阻断Bx ACE1功能可以提苦参碱的杀虫效果,但dsRNA容易降解等因素限制了该技术在生产实践中的广泛应用。石杉碱甲可以与Bx ACE1稳定结合,鉴定表明石杉碱甲可以提高苦参碱的杀虫效果,具有生防药剂辅剂的开发潜力,可替代基因沉默技术实现抑制Bx ACE1的目的。因此,通过乙酰胆碱酯酶抑制剂石杉碱甲可阻断Bx ACE1的功能,进而达到提高苦参碱等植物源药剂杀虫效果的目的。ACEIs通过抑制线虫体内的乙酰胆碱酯酶的活性,使线虫体内的胆碱水平短时间内大量提高,从而导致其中毒死亡。该类具有代表性的杀虫剂是有机磷类化合物和氨基甲酸�
- 刘立宏王峰马玲王步勇陈俏丽刘晓晗董婉莹薛羿
- 关键词：松材线虫乙酰胆碱酯酶石杉碱甲抑制剂苦参碱
- 太湖湿地半翅目昆虫多样性被引量：2
- 2012年
- 在对太湖湿地半翅目昆虫多样性的研究中发现:太湖湿地主要半翅目昆虫有16科56属60种,其中以蝽科和缘蝽科为优势类群。在各调查点中太湖国家湿地恢复示范区的多样性指数最高,三洋村最低。各调查点的多样性指数和均匀度指数呈现正相关性,半翅目昆虫群落比较稳定。群落相似性分析表明,太湖湿地中灵湖村和示范区、渔阳山和三山岛半翅目昆虫群落相似性较高。
- 韩争伟马玲王步勇刘立宏
- 关键词：太湖湿地半翅目昆虫生物多样性
- 贝西滑刃线虫乙酰胆碱酯酶2基因克隆与功能研究
- 贝西滑刃线虫不仅危害印度榕、木槿和非洲紫罗兰等木本植物，还侵染水稻、草莓和玉米等草本植物，防治非常困难，对农林植物危害严重。乙酰胆碱酯酶能够降解乙酰胆碱，终止神经传递对突触后膜兴奋的刺激作用，确保神经信号正常传递。在生物...
- 刘立宏
- 关键词：基因克隆原位杂交RNA干扰
- 文献传递
- 松材线虫Bx-sHSP16A基因克隆及蛋白质结构研究被引量：2
- 2013年
- 分子伴侣小热激蛋白(sHSPs)是线虫度过高温环境的关键因子。为开发直接针对松材线虫的防治技术提供理论依据,对松材线虫小热激蛋白Bx-sHSP16A基因进行了研究。采用SL法进行基因全长克隆,STRING9.0进行蛋白质互作网络分析,NAMD2.9进行分子动力学模拟。本研究克隆到松材线虫小热激蛋白基因Bx-sHSP16A。Bx-sHSP16A具α-crystallin保守结构域"F-polar-R-polar-aromatic-x-L-P"序列和"I/L-x-I"序列,初步判断具备分子伴侣功能。Bx-sHSP16A与多个蛋白发生互作,深入研究这些蛋白有助于了解Bx-sHSP16A在应激反应路径中的作用。Bx-sHSP16A二聚体中A亚基的"I/L-x-I"序列可以嵌入B亚基的去水合位点,契合后氢键稳定,说明Bx-sHSP16A可以形成多聚体。在应激反应过程中,去水合位点与多聚体聚合相关,Bx-sHSP16A以多聚体形式发挥分子伴侣功能。
- 刘立宏王峰王步勇马玲杨洋崔伟婵
- 关键词：松材线虫多聚体
- 水稻干尖线虫X-box结合蛋白基因克隆及功能被引量：5
- 2014年
- 水稻干尖线虫不仅危害水稻等草本农作物,还侵染印度榕等乔本植物,对农林植物危害严重。为开发新的生物防治技术、鉴定具有生防潜力的基因,克隆了水稻干尖线虫X-box结合蛋白基因Ab-xbp-1。通过RNAi技术验证苏云金芽孢杆菌处理过程中Ab-xbp-1基因在水稻干尖线虫先天免疫激活过程中所起的作用。结果表明:Ab-xbp-1基因沉默后水稻干尖线虫免疫力下降,这一结果说明该基因具有生物防治潜力。
- 刘立宏王峰李丹蕾王步勇刘晓晗陈俏丽
- 关键词：水稻干尖线虫基因沉默苏云金芽孢杆菌
- 松材线虫Rbx1基因克隆及蛋白质结构分析被引量：2
- 2013年
- 为鉴定潜在的松材线虫防治靶标基因,应用SL法克隆到松材线虫Rbx1,并完成Rbx1蛋白质结构分析。松材线虫Rbx1与泛素途径多个蛋白发生互作。通过Rbx1与E2的分子对接研究,共发现Rbx1与E2分子间存在3个氢键,Rbx1含有1个E2契合"口袋"。分子动力学模拟表明,Rbx1的氮末端是其功能区域。松材线虫Rbx1是潜在的防治靶标基因,以该区域为靶位点设计抑制子或可达到防治该线虫的目的。
- 王步勇王峰刘立宏马玲胡庆东梁为玉高威
- 关键词：松材线虫分子动力学模拟
- 粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因克隆及蛋白质结构分析
- 2015年
- 【目的】克隆得到粗毛纤孔菌糖苷水解酶5基因,并对该基因进行生物信息学分析、蛋白质原核表达和酶活研究,为糖苷水解酶的利用提供依据。【方法】分离纯化粗毛纤孔菌,并于PDA斜面长期保存。应用TRIzol提取粗毛纤孔菌总RNA,通过AMV反转录系统将RNA反转录成c DNA,构建c DNA文库;应用NCBI BLAST分析并检测糖苷水解酶基因家族5阳性序列,RACE法克隆基因全长命名为Ih GH5-1并提交NCBI注册;ORF-Finder分析Ih GH5-1基因开放阅读框,推导出氨基酸序列;筛选NCBI登录的糖苷水解酶家族5同源序列,Clustal W进行保守结构域区段多序列比对;应用Mega 5.05选用WAG+G模型构建最大似然树;应用PSIPRED server对Ih GH5-1进行α螺旋和β折叠的蛋白质二级结构分析,应用SWISS-MODEL对Ih GH5-1进行三维建模,应用VMD1.8.6分析Ih GH5-1三维结构;设计原核表达引物并进行PCR扩增,将扩增得到的基因片段连接至p QE-30 UA载体并转入大肠埃希菌JM109感受态细胞,诱导表达后通过SDS-PAGE电泳检测表达量;测定糖苷水解酶活性并计算酶活。【结果】TRIzol提取的粗毛纤孔菌总RNA经分光光度计检验符合标准(OD260/OD280=2.0,OD260/OD230>1.8),c DNA文库成功构建并测序;RACE法克隆得到5'序列长度为770 bp,3'序列长度为1 562 bp且含有Poly A的序列,5'和3'序列拼接得到基因全长序列长1 727 bp,NCBI注册号为KM368321;ORF分析得到Ih GH5-1氨基酸序列含有300个氨基酸,分子质量为31.226 55 k D,等电点(p I)为9.24;结构域分析表明Ih GH5-1具有保守的催化结构域;最大似然树分析表明多数子囊菌糖苷水解酶家族5聚在一起,多数担子菌糖苷水解酶家族5聚在一起,粗毛纤孔菌Ih GH5-1蛋白质与太瑞斯梭孢壳霉和球毛壳菌等子囊菌的糖苷水解酶亲缘关系更近;蛋白质三维结构分析表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1含有7个α螺旋、4个β折叠,三维比对表明粗毛纤孔菌Ih GH5-1三维结构与其他真菌糖苷�
- 刘晓晗王峰董爱荣陈俏丽刘立宏零雅茗王博文丁晓霞王世新
- 关键词：水曲柳
