刘雯
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
- 供职机构：徐州医学院更多>>
- 发文基金：江苏省“青蓝工程”基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PSA启动子荧光素酶报告载体的建立及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:建立高活性的PSA启动子荧光素酶报告载体。方法:提取前列腺癌细胞PC-3总DNA,PCR扩增出PSA启动子片段,建立PSA启动子荧光素酶重组载体PGL3-psap,通过脂质体介导将重组载体转染到前列腺癌细胞PC-3中,使用荧光素酶检测系统检测其活性。结果:DNA测序结果表明成功构建荧光素酶重组载体PGL3-psap,荧光素酶检测显示重组载体在前列腺癌细胞PC-3中有较强活性。结论:本研究成功构建了具有高度活性的PSA启动子荧光素酶报告载体,为进一步研究前列腺癌的诊断和治疗提供了实验基础。
- 尤红娟郝林梁清贺厚光刘雯刘转转汤仁仙韩从辉
- 关键词：克隆
- 乙型肝炎病毒X基因促TRAIL诱导Huh7细胞凋亡的机制被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因(HBX)促肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白诱导人肝癌细胞Huh7凋亡的机制。方法应用脂质体转染法将pcDNA3.1-HBX、pcDNA3.1分别转染Huh7细胞,建立稳定表达HBX的细胞模型Huh7-HBX和空载体对照细胞模型Huh7-3.1;运用TRAIL蛋白分别作用Huh7-HBX细胞、Huh7-3.1及Huh7细胞后,采用CCK8、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测死亡受体4(deathreceptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)的表达情况;分光光度法检测细胞caspase8和caspase3活性。结果 RT-PCR及Western blot证实成功构建细胞株Huh7-HBX;CCK8和流式细胞术检测结果均显示Huh7-HBX细胞的凋亡率明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05);Western blot显示Huh7-HBX细胞的DR4、DR5的表达量明显高于Huh7-3.1及Huh7细胞(P<0.05);caspase活性检测结果显示,Huh7-HBX细胞caspase8及caspase3的活性明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05)。结论 HBX能够通过上调Huh-7细胞表面死亡受体DR4、DR5的表达,进而促进TRAIL蛋白诱导的细胞凋亡,为进一步研究HBX的促凋亡机制提供实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉李向阳刘转转汤仁仙郑葵阳
- 关键词：乙型肝炎病毒X基因肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体凋亡
- 初步探讨乙型肝炎病毒X蛋白激活PI3K／Akt信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白（HBx）激活磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13K／Akt）信号通路对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法利用稳定表达HBx基因的肝癌细胞模型HepG2-HBX、Huh-7-HBX，运用阻断剂LY294002阻断P13K／Akt信号通路后，采用Westernblot方法分析HepG2-HBX和Huh-7-HBX细胞中P～Akt蛋白的表达水平的情况；采用CCK～8增殖实验和划痕愈合实验观测HepG2-HBX和Huh-7～HBX细胞的增殖和迁移能力。结果与阴性对照肝癌细胞相比，稳定转染HBx基因的肝癌细胞中的P—Akt蛋白的表达增多（P〈0．05），运用阻断剂LY294002阻断P13K信号通路后，稳定转染HBx基因的肝癌细胞内的P～Akt蛋白表达降低（P〈0．05）。CCK-8增殖实验和划痕愈合实验结果均显示，与阴性对照肝癌细胞相比，稳定转染HBx基因的肝癌细胞的增殖能力和迁移能力增加（P〈0．05）。经阻断剂LY294002阻断P13K／Akt信号通路后，稳定转染HBX的肝癌细胞的增殖和迁移能力减弱（P〈0．05）。结论HBx可通过激活19／3K／Akt信号通路促进肝癌细胞增殖和迁移。
- 胡丽娜孔凡运尤红娟李向阳党景东刘雯汤仁仙郑葵阳陈明
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白PI3K/AKT肝癌细胞增殖迁移
- 半乳糖-羧化壳聚糖-十四酸纳米粒的制备及其肝靶向性
- 2012年
- 目的:制备半乳糖-羧化壳聚糖-十四酸纳米粒(galactose carboxyl chitosan myristic acid nanoparticles,GCCMA),观察GCCMA纳米粒在肝癌细胞中的靶向性.方法:本实验组采用自组装法制备GCCMA纳米粒,优化制备条件,并经过本实验组鉴定稳定性及生物相容性,纳米粒经荧光标记后分别取不同浓度转染肝癌细胞及HT22海马神经细胞,对照组、HT22海马神经细胞组和肝癌细胞组,以及对照组、肝癌细胞-low组、肝癌细胞-mid组和肝癌细胞-high组(置入的GCCMA纳米粒浓度由低到高),分别于1、2和4h时间点测定在细胞摄取纳米粒情况.结果:相同浓度的GCCMA纳米粒,Huh7肝癌细胞摄取量显著高于HT22海马神经细胞,肝癌细胞摄取量在特定区间有剂量依赖性,较高浓度时摄取量较大,在1、2和4h时间点所测定的结果显示,4h时肝癌细胞的摄取量最大.结论:GCCMA纳米粒有肝靶向性,为肝脏肿瘤的靶向性基因治疗或化疗药物提供很好的药物载体及给药途径.
- 寇昌华钱海鑫韩锡林汤仁仙温相如赵子明宋远见戚大石刘红芝刘雯马向东
- 关键词：肝靶向性肝肿瘤
- 人可溶性TRAIL原核表达载体的构建和蛋白表达、纯化及活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的建立高效表达可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白的原核表达载体,获得高生物学活性的TRAIL蛋白。方法取健康人外周血提取总RNA,RT-PCR扩增TRAIL基因的胞外区片段,克隆入原核表达载体pET30a中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆。重组载体转化感受态细胞BL21,优化蛋白表达条件;亲和层析法纯化重组蛋白;SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot鉴定。重组蛋白与TRAIL蛋白标准品分别作用Huh-7细胞,CCK8、流式细胞术检测蛋白生物学作用。结果 DNA测序结果证实成功构建重组质粒pET30a/TRAIL,SDS-PAGE蛋白电泳、Western blot显示pET30a/TRAIL诱导的为可溶性的His-rTRAIL。CCK8、流式细胞术检测结果显示,与TRAIL蛋白标准品相比,His-rTRAIL对Huh-7细胞具有良好的促凋亡作用。结论成功构建高效表达可溶性TRAIL蛋白的原核表达载体pET30a/TRAIL,表达的可溶性蛋白His-rTRAIL具有高度的生物学作用,为肿瘤的生物学治疗提供新的实验依据。
- 尤红娟刘雯赵金金徐志辉党景东刘转转郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体克隆原核表达凋亡
- TRAIL联合白藜芦醇协同诱导人肝癌Huh7细胞凋亡的机制初探被引量：4
- 2013年
- 目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related to apoptosis inducing ligand,TRAIL)联合白藜芦醇(resveratrol,Res)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测细胞凋亡;CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测细胞内caspase3、caspase8的相对活性。结果 TRAIL联合Res作用Huh7细胞,联合用药组与对照组及单独用药组相比:肝癌细胞Huh7的凋亡率明显增加;促凋亡蛋白Bax表达明显增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显减少;caspase3、caspase8的相对活性明显升高。结论 TRAIL联合Res对诱导人肝癌Huh7细胞凋亡具有明显的协同效果,其机制可能与Bax表达增加、Bcl-2表达减少及caspase活性升高有关。
- 刘雯尤红娟徐志辉赵金金李向阳刘晓梅周峰张鹏郑葵阳汤仁仙
- 关键词：TRAIL白藜芦醇肝癌凋亡
