周贤用
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
- 供职机构：温州医学院药学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 采用淋巴细胞分离液进行成年猪胰岛细胞纯化的研究
- 2010年
- 目的：探讨用新的纯化试剂淋巴细胞分离液进行成年杂种猪的胰岛分离、纯化的研究，获得高纯度的胰岛细胞。方法：成年杂种猪，体重100～200kg，采用胰管逆流灌注V型胶原酶，38．5℃水浴内外消化相结合，用淋巴细胞分离液离心法对胰岛细胞进行纯化，并对获得的胰岛细胞DTZ染色计数、计算当量。结果：消化时间为约30min，胰岛数量为8548±1408个／g；纯化后胰岛收获量为：胰岛数7886±1697个／g，纯度〉95％。结论：采用淋巴细胞分离液离心，可以缩短成年猪胰岛分离纯化时间，提高胰岛纯度。方法可降低实验成本，同时可获得高质量的胰岛细胞团。
- 蔡娟娟程晨周贤用傅红兴汪大望
- 关键词：胰岛纯化
- 家兔胰岛的分离纯化研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨家兔胰岛分离、纯化的方法及其计数和活性的测定。方法选用日本大耳自家兔。予V型胶原酶于38℃内水浴外消化。采用Ficoll 400不连续密度梯度离心法对胰岛进行纯化，并对获得的胰岛进行DTZ染色计数。同时计算胰岛当量（IEQ）数。予台盼蓝染色法分析胰岛活性。结果DTZ染色纯化前每只家兔胰腺收获胰岛细胞数为15046±2733。IEQ数为：4635±554；化后胰岛数量为：5300±609，IEQ数为：1213±218；胰岛细胞活率〉90％，胰岛纯度为〉60％。结论家兔胰腺消化分离后得到胰岛的数量和IEQ均较多，且动物来源广泛、实验成本较低，预示其在胰岛移植中可作为胰岛来源。
- 姜尚超傅红兴徐艳艳汪大望薛圣留周贤用
- 关键词：家兔胰岛纯化活性
- 1例Beagle犬的糖尿病建模分析被引量：3
- 2011年
- 糖尿病模型的建立是糖尿病治疗研究的重要内容,本研究根据文献报道的方法,采用链脲佐菌素和四氧嘧啶联合给药进行Beagle犬糖尿病造模的建立。结果造模后Beagle犬血糖呈先下降后升高变化,血糖由于饮食变化而有较大波动,体重持续下降,最后造模26日后因长期不进食死亡。采用文献方法建模药物的剂量可能偏大,建议可分剂量多次注射,以降低药物对犬机体的损伤。
- 周贤用傅红兴刘云西李慧徐逸朱靓靓
- 关键词：BEAGLE犬糖尿病
- 大鼠胰岛分离纯化技术的改良及活性研究被引量：14
- 2010年
- 目的胰岛的纯度和活性对胰岛移植治疗糖尿病的疗效有很大影响。探讨一种大鼠胰岛分离纯化的新方法,以获得高纯度、高产量、活性好的胰岛。方法选取健康成年雄性SD大鼠10只,体重250～300g,逆行胆总管灌注Ⅴ型胶原酶溶液,38℃水浴消化约15min后,采用两种方法纯化胰岛细胞:A组采用Ficoll400不连续密度梯度液,B组采用Ficoll-PaqueTMPLUS溶液。行双硫腙(dithizone,DTZ)染色鉴定胰岛并计算胰岛当量(islet equivalent quantity,IEQ)、胰岛纯度,锥虫蓝染色检测胰岛活性。取B组胰岛用海藻酸钠-聚左赖氨酸-海藻酸钠(alginate/poly-L-lysine/alginate,APA)包裹制备胰岛微囊,体外静止葡萄糖刺激胰岛素释放实验检测微囊化和未微囊化胰岛的生物学活性。结果DTZ染色示胰岛呈猩红色,有圆形、椭圆形和不规则形,胰岛边缘清晰,大部分直径为50～300μm。A、B组IEQ值分别为338.04±76.61和834.80±54.00,比较差异有统计学意义(P<0.05)。A、B组胰岛纯度分别为88.31%±2.67%和95.63%±1.96%,差异无统计学意义(P>0.05)。A、B组胰岛活率分别为67.40%±5.15%和86.05%±2.52%,差异有统计学意义(P<0.05)。胰岛APA微囊囊形呈完整圆形,大小均匀,微囊直径为1.5～2.0mm,每个微囊中包裹1～3个胰岛。葡萄糖刺激释放胰岛素实验显示,未微囊化胰岛和微囊化胰岛在低糖下的胰岛素分泌浓度分别为(5.53±1.64)ng/mL和(4.76±0.26)ng/mL,高糖下分别为(11.95±2.07)ng/mL和(14.34±3.18)ng/mL,高糖刺激下胰岛素释放量为低糖刺激的2倍多,差异有统计学意义(P<0.05);两组的刺激指数分别为2.16±0.30和3.01±0.59,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ficoll-PaqueTMPLUS溶液作为纯化液分离纯化胰岛的方法具有操作简便、胰岛产量高、纯度高等优点,获得的胰岛经微囊化或未微囊化体外培养均有良好活性。
- 徐艳艳傅红兴王浙明周贤用许宇璐汪大望薛圣留李校堃
- 关键词：胰岛分离纯化微囊化
- 载红细胞海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的制备及质量评价被引量：8
- 2010年
- 目的:制备载红细胞海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微囊(APA微囊)并进行质量评价。方法:采用高压静电成囊技术制备海藻酸钙微胶珠,与聚左赖氨酸反应后再包覆海藻酸钠形成三层膜结构,柠檬酸钠液化囊心后得APA微囊;光学显微镜下检测微囊的粒径,振摇法考察微囊的机械强度,不同酸碱度溶液测定微囊的化学强度,同时紫外分光光度法检测透过微囊膜血红蛋白的吸光度来评价囊膜的通透性,小鼠腹腔移植观察微囊生物相容性。结果:在成囊电压4kV,推进速度50mL·h-1,针头直径0.7mm的条件下制得的微囊表面圆整光滑,95%以上微囊的粒径集中分布于1.5～2.1mm;72h内机械振摇破损率约为5%,在pH4.2～9.4的磷酸缓冲液中稳定;小鼠腹腔内移植于2周后回收的微囊外形圆整、光滑,无破损及明显结缔组织包绕。结论:本方法制备得到的APA微囊具有良好的机械、化学强度及生物相容性,可以作为微囊化细胞移植的载体。
- 徐艳艳傅红兴赵应征王浙明周贤用蔡娟娟李校堃
- 关键词：APA微囊红细胞药物载体粒径生物相容性
