孔永
- 作品数：18 被引量：35H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 致敏原剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响
- 2014年
- 目的研究致敏原的剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响。方法以卵蛋白为致敏原,采用腹腔注射[高剂量组1 mg/(只·次),低剂量组0.1 mg/(只·次)]联合雾化吸入建立小鼠哮喘模型。ELISA分析血液中过敏相关免疫球蛋白IgE及细胞因子IL-4与IFN-γ的水平,免疫荧光及流式细胞术分析脾脏免疫细胞(包括T、B和DC细胞)的活化程度,HE染色分析肺组织的损伤情况。结果模型组小鼠血液中IgE及IL-4的水平明显高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。但IFN-γ的水平模型组均低于对照组(P<0.05),高、低剂量组间无差异(P>0.05)。模型组小鼠脾脏细胞膜型CD28、CD86、CD80、CD40和MHC-Ⅱ的表达均高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。显微镜下观察模型组小鼠肺组织出现炎性细胞浸润及支气管壁增厚等病理改变,高剂量组更为严重。结论哮喘引发的免疫细胞活化和肺组织病理损伤与致敏原的剂量呈正相关。
- 朱莹蔡磊孔永王婧朱华亭夏永洁彭丽邱玉华
- 关键词：卵蛋白免疫细胞共刺激分子
- B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应被引量：4
- 2015年
- 目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定期检测小鼠的尿蛋白、ANA及肾脏病理学改变。取尿蛋白含量达到++,ANA荧光强度达到++的小鼠随机分为3组,每组5只。抗体干预组用B7-1人-鼠嵌合抗体经眼眶静脉序贯给药,阳性对照组注射免疫抑制剂CTX,阴性对照组注射人同型Ig G。每月定期检测尿蛋白及ANA,干预至3个月时,处死小鼠,取肾脏进行H&E染色分析,免疫复合物(IC)检测及透射电镜观察。结果:Pristane诱导至4个月时,80%的小鼠尿蛋白含量达到+^+++,血清ANA荧光强度为++^+++,出现尿蛋白及ANA的小鼠,其肾小球炎性细胞侵润,肾小管上皮样细胞可见水肿样变性、血管充血明显,纤维组织增生。抗体干预后,尿蛋白逐渐由++^+++降为±^++,ANA由++^+++降为+^++。与阴性对照组比较具有统计学差异(P<0.01)。肾脏HE染色分析的结果显示,抗体干预组肾小球炎性细胞侵润及肾小管充血等表现均得到明显改善。免疫荧光染色可见抗体干预组抗原抗体复合物(IC)的荧光强度明显减弱。经透射电镜观察,抗体干预组与阴性对照组相比,肾小球的电子致密物沉积减少,基底膜厚度趋于均匀。结论:B7-1抗体通过抑制B7-1/CD28信号通路下调机体的免疫应答,减少自身抗体的产生,对自身免疫造成的病理损伤具有逆转作用。
- 沈辉朱玉强孔永王婧朱华亭於葛华蔡磊朱莹王志瑶邱玉华
- 关键词：B7-1人-鼠嵌合抗体降植烷狼疮样肾炎抗核抗体
- 人体微生态系统与人类宏基因组计划被引量：3
- 2008年
- 介绍了微生态系统的基本概念和人体基本的微生态系统,阐述了其对人类的意义;介绍了人类宏基因组计划基本知识和研究方法。
- 秦秀云孔永
- 关键词：微生态正常菌群
- 腺病毒介导CTLA4Ig和CD40Ig基因转染对人皮肤成纤维细胞免疫性能影响的体外研究
- 异基因(异体、异种)皮肤移植后的排斥反应主要是由活化T细胞主导的急性细胞性排斥反应，此过程中T细胞共刺激信号的参与对于T细胞活化和免疫排斥的发生是必需的，阻断共刺激信号，可导致T细胞无反应、细胞凋亡或克隆丢失，从而诱导免...
- 孔永
- 关键词：腺病毒CTLA4IG成纤维细胞免疫性能
- 文献传递
- Pristane诱导的系统性红斑狼疮小鼠模型的研究进展被引量：7
- 2016年
- 系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus,SLE）是由于机体免疫功能紊乱而导致的自身免疫性疾病（[1]）。在SLE患者的体内,细胞异常凋亡,细胞因子分泌失衡,T、B细胞过度活化,产生大量的自身抗体以及造成免疫复合物（Immune complex,IC）沉积,最终累及全身多器官系统造成损害（[2-7]）。虽然确切病因和发病机制仍不明确（[8]）,但一般认为SLE可由多种因素综合作用而诱发,其中环境因素在SLE的发病过程中具有重要的作用。
- 沈立军孔永邱玉华
- 关键词：系统性红斑狼疮PRISTANEERYTHEMATOSUS过度活化细胞因子分泌器官系统
- 鼠抗人CD28单克隆抗体的制备及体外生物学活性的初步研究被引量：1
- 2019年
- 目的:制备纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,初步研究其体外生物学活性。方法:采用诱生腹水法制备抗体,ProteinA免疫亲和层析法进行纯化,并对纯化的抗体进行SEC-HPLC分析测定其纯度;ELISA及流式细胞术检测抗体与重组CD28抗原及Jurkat膜表达CD28的结合活性,表面等离子体共振技术检测抗体与CD28的结合动力学参数,并研究抗体对外周血T细胞增殖的影响。结果:制备获得纯化的鼠抗人CD28分子的单克隆抗体,其纯度>95%,能够结合重组及天然表达的CD28,其半数效应浓度(EC50)分别为19.8μg/ml和15.2μg/ml,该抗体与CD28结合亲和力常数(KD)为2.13×10^-9M。基于细胞的活性分析结果表明,该抗体具有明显的促进人外周血T细胞增殖的活性。结论:本研究制备获得纯化的鼠抗人CD28单克隆抗体,该抗体具有良好的识别CD28的特性以及促进外周血T细胞增殖的活性。
- 沈立军孔永颜天铭王玉玉王玉玉王婧
- 关键词：CD28单克隆抗体生物学活性
- 抗人CD86双价抗体的表达及与抗原的结合特性
- 2012年
- 目的:用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达抗人CD86双价抗体(CD86-diabody),鉴定该抗体对表达CD86分子肿瘤细胞的识别及介导的生物学效应。方法:从分泌抗人CD86小鼠源抗体的杂交瘤1D1中克隆抗体重、轻链可变区基因VH及VL。SOE-PCR构建VH-(GGGGS)-VL双价抗体基因,整合到真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染CHO细胞,FCM筛选G418加压培养的阳性克隆。IMAC纯化并定量抗体。免疫荧光法分析抗体对人B系淋巴瘤细胞株Raji及Daudi膜型CD86分子的阳性结合率,将抗体加入到Raji细胞的培养体系中,培养72 h,MTT法分析抗体对细胞体外增殖的影响。结果:获得了稳定分泌抗人CD86-diabody的CHO细胞株。培养上清中抗体纯品的得率为5.24 mg/L。抗体与Raji及Daudi细胞的阳性结合率分别为77.2%及70.6%。经抗体孵育72 h,Raji细胞体外增殖抑制率为37%。结论:成功制备了抗人CD86-diabody,可特异性结合细胞膜型CD86分子,并对表达该分子的肿瘤细胞体外增殖具有抑制效应。
- 王志强安萌朱华亭孔永王婧韩莲花夏永洁邱玉华
- 关键词：CHO细胞双价抗体抑制增殖
- 小鼠B7-1基因RNAi慢病毒载体的构建及其沉默效应研究
- 2016年
- 目的：构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体,研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法：从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列,制备转录双发夹RNA的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞,流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养,分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果：成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达（3~5）×10~8TU/ml的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T细胞增殖的能力显著下降（P〈0.05）。结论：构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达,抑制B7-1/CD28信号诱导的T细胞增殖效应。
- 孔永沈立军王婧朱莹蔡磊邱玉华黄莉
- 关键词：B7-1RNAI慢病毒共刺激信号L929
- 动物细胞培养技术研究进展被引量：8
- 2007年
- 动物细胞培养是生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法,可分为原代和传代培养,有贴壁、悬浮和固定化培养等培养方式.细胞生长具有特殊的生物学性质,需要无菌、恒温和充分的营养环境.动物细胞培养技术在拥有广阔的发展空间和光明前景的同时也面临着诸多问题和挑战.
- 孔永秦秀云
- 关键词：细胞培养微载体中空纤维微囊生物反应器
- 2种腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白对人成纤维细胞转染效率的研究被引量：4
- 2008年
- 目的比较2种不同腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的增强型绿色荧光蛋白对人皮肤成纤维细胞(human fibroblast,HFB)的转染效率。方法原代分离培养人皮肤成纤维细胞并鉴定,按照感染复数(multiple of in-fection,MOI)为104、105、106转染传2代的人成纤维细胞,流式细胞检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的转染效率,倒置荧光显微镜观察转染后的荧光强度。MTT法检测AAV2-EGFP和AAV2/1-EGFP对HFB的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对HFB的转染效率随着MOI增加而增高,MOI为104时转染效率为(7.68±1.18)%,当MOI达到105后,转染效率稳定在(22.16±5.59)%,随着MOI增加,最高至MOI 106转染效率无显著提高。而病毒AAV2/1对于HFB的转染效率在MOI为106转染效率仅为(3.47±0.93)%。2种病毒在转染过程中,细胞生长正常,MTT显示各转染组与未转染组的吸光度值无统计学差异。结论AAV2载体对体外培养的HFB转染效率高于AAV2/1,但2种病毒载体对人皮肤成纤维细胞转染效率均不高,AAV2/1-EGFP对HFB几乎无感染能力。
- 郑钧丰孔永葛良鹏魏泓
- 关键词：腺相关病毒人皮肤成纤维细胞增强型绿色荧光蛋白流式细胞
