孙建华
- 作品数：12 被引量：45H指数：4
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒对糖尿病大鼠阴茎勃起的作用被引量：8
- 2005年
- 目的:探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导人降钙素基因相关肽(hCGRP)基因转移在糖尿病大鼠阴茎海绵体平滑肌分泌表达及其对阴茎勃起的作用。方法:建立链佐脲菌素(STZ)糖尿病大鼠模型,随机分为3组,分别将VssHGCMV-hCGRP、VssCMV-GFP和rAAV空病毒液注射于阴茎海绵体。在注射后5 d,采用SMUP-PC型生物信号处理系统检测阴茎背神经电刺激诱发的阴茎勃起反应及海绵体内压(ICP)变化。切取海绵体组织,通过免疫组化技术和激光共聚焦显微镜分别检测hCGRP和绿色荧光蛋白(GFP)表达,以放射免疫法检测组织中环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)变化。结果:在VssCMV-GFP转染后5 d,显示阴茎海绵体内几乎所有组织均有广泛的GFP表达,而rAAV空病毒转染的海绵体则无GFP表达。VssHGCMV-hCGRP转染STZ诱导的糖尿病大鼠后5d,电刺激阴茎背神经可诱发明显的阴茎勃起,监测ICP明显增高[(60.5±4.5)mm Hg,1 mm Hg=0.133kPa],而对rAAV空病毒转染的对照组STZ糖尿病大鼠以同样的参数电刺激阴茎背神经则无勃起反应,ICP无明显增加[(22.3±1.3)mm Hg],两组差异有显著性(P<0.01)。免疫组化观察显示在VssHGCMV-hCGRP转染的STZ糖尿病大鼠阴茎海绵体组织中hCGRP表达增强,同时当电刺激阴茎背神经诱发勃起反应时,海绵体内cAMP和cGMP水平均升高,分别为(48.4±6.5)nmol/L和(21.2±13.6)nmol/L,较rAAV空病毒组[(16.7±2.5)nmol/L和(0.42±0.12)nmol/L]明显增高(P<0.01)。结论:经阴茎海绵体内注射重组腺相关病毒VssHGCMV-hCGRP在糖尿病大鼠阴茎海绵体内获得了hCGRP转基因高效表达,其可增加阴茎背神经电刺激诱发的阴茎ICP和勃起反应。
- 邢俊平崔险峰孙建华邱曙东刘健
- 关键词：勃起功能障碍糖尿病基因治疗
- 附睾结核68例诊断与治疗
- 目的:近年来结核病的发病有回升的趋势,附睾结核作为一种常见的男性生殖系统结核病也随之增加。由于其多无临床症状,发展缓慢,尤其在无合并肺、肾结核或急性期时容易忽视、误诊,给患者身心健康带来影响,因此及时正确的诊断,采取相应...
- 仵春云孙建华张越邢俊平
- 文献传递
- 人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒在原代培养大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞中的表达及其作用被引量：1
- 2005年
- 目的:观察腺相关病毒载体介导的人降钙素基因相关肽(hCGRP)基因在原代培养的大鼠阴茎海绵体平滑肌(CCSM)细胞的表达及其作用,探讨其应用于勃起功能障碍(ED)基因治疗的可行性。方法:原代培养的SD大鼠CCSM细胞随机分为4组:实验组、空病毒组、示踪剂组和对照组,分别以可分泌表达hCGRP重组腺相关病毒VssH-GCMV-hCGRP、空病毒VssHGCMV和表达绿色荧光蛋白(GFP)重组腺相关病毒VssCMV-GFP进行体外转染或不予任何处理。采用斑点印迹试验检测培养液中的hCGRP和放射免疫法检测转染细胞中的环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)水平,观察hCGRP和示踪剂GFP的表达及其对CCSM细胞的影响。结果:重组腺相关病毒载体能有效地将外源基因hCGRP导入大鼠CCSM细胞并稳定表达,与空病毒组和对照组相比,该病毒明显刺激大鼠CCSM细胞中cAMP水平升高[(48.7±1.1)nmol/L对(12.3±1.2)nmol/L和(7.8±1.4)nmol/L,P均<0.01],培养液中可检测到免疫反应性hCGRP。结论:可分泌表达生物活性肽重组腺相关病毒基因转移系统可有效进行多肽类在CCSM细胞过表达,并影响该细胞的cAMP水平,可被应用于ED的基因治疗。
- 邢俊平孙建华崔险峰邱曙东
- 关键词：重组腺相关病毒降钙素基因相关肽转染
- 可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠阴茎勃起的作用
- 目的:通过阴茎海绵体内注射可分泌表达人降钙素基因相关肽(hCGRP)的重组腺相关病毒,观察阴茎海绵体平滑肌中hCGRP基因的表达及生物活性肽hCGRP产生,确定这一基因转移系统体内转染海绵体平滑肌细胞的可行性。阐明CGR...
- 邢俊平崔险峰孙建华邱曙东
- 文献传递
- 电刺激阴茎背神经和海绵体内注射药物诱导的大鼠海绵体内压反应
- 目的:评价阴茎海绵体内压(ICP)间存在电刺激阴茎背神经(DN)和海绵体内注射罂粟碱诱导大鼠阴茎勃起反应中的应用,建立一种客观的方法。方法:选取性成熟雄性大鼠8只,20%氨基甲酸乙酯(100 mg/kg)腹腔注射麻醉下,...
- 邢俊平崔险峰孙建华李强刘健邱曙东
- 文献传递
- 可分泌表达人降钙素基因相关肽重组腺相关病毒体外转染培养的血管内皮细胞及其表达
- 2006年
- 目的观察可分泌表达人降钙素基因相关肽(humancalcitoningene-relatedpeptide,hCGRP)重组腺相关病毒(rAAV)体外转染培养的血管内皮细胞(endothelialcellsofvessel,ECV)及其作用,探讨其应用于血管性勃起功能障碍基因治疗的可行性。方法分别以可分泌表达hCGRP的重组腺相关病毒VssHGCMV-hCGRP、表达报告基因GFP中的重组腺相关病毒VssCMV-GFP和空病毒pssHGCMV体外转染培养的ECV细胞,采用斑点印迹试验检测培养基中的hCGRP,以放射免疫法检测转染细胞中的cAMP和cGMP水平,观察GFP和hCGRP的表达及其对ECV细胞的影响。结果腺相关病毒载体能有效地将外源基因hCGRP导入血管内皮细胞并稳定表达,VssHGCMV-hCGRP病毒组细胞中cAMP水平(45.74±3.45)nmol/L较pssHGCMV空病毒组(14.84±0.65)nmol/L和对照组(12.74±0.65)nmol/L明显高(P<0.01),并可在实验组24h细胞培养液中检测到免疫反应性hCGRP。结论可分泌表达生物活性肽重组腺相关病毒基因转移系统可有效进行多肽类在血管内皮细胞过表达,并可选择性刺激该细胞中cAMP水平升高,提示hCGRP可作为血管性勃起功能障碍基因治疗的有效候选基因。
- 邢俊平孙建华崔险峰邱曙东
- 关键词：重组腺相关病毒降钙素基因相关肽转染血管内皮细胞
- 陕西地区不明原因无精子症和少精子症患者Y染色体长臂微缺失分析被引量：3
- 2005年
- 目的: 评估陕西地区不明原因无精子症和少精子症不育男性患者Y染色体长臂微缺失的频率,探讨精子密度与Y染色体微缺失发生率的相关性. 方法: 以Y染色体特异性无精子症因子区STS- AZFa、AZFb、AZFc和SRY 4个基因5个片段设计引物,采用PCR方法对64例无精子症和少精子症患者以及20例正常生育男性进行微缺失检测,并比较不同精子密度患者Y染色体微缺失的发生率. 结果: 20例精子密度正常的生育男性未检出Y染色体微缺失,而64例特发性无精子症/少精子症患者AZFc区的缺失率为17.2%(11/64),AZFc和AZFb联合缺失1例,未发现AZFa区缺失,SRY基因均为阳性.其中无精子症组缺失率为21.43%(3/14);精子密度＜1×106/ml组,缺失率为20.0%(2/10);精子密度(1～5)×106/ml组缺失率为17.9%(5/28);精子密度(5～10)×106/ml组缺失率为8.3%(1/12).各组缺失率经卡方检验差异有显著性(χ2=70.144,P＜0.005). 结论: 无精子症和少精子症不育患者Y染色体AZFc缺失率明显较高,PCR扩增AZF基因是诊断Y染色体微缺失的简单方法.
- 崔险峰邢俊平孙建华张洲王新阳
- 关键词：Y染色体微缺失少精子症无精子症聚合酶链反应
- 电刺激阴茎背神经和海绵体内注射药物诱导大鼠阴茎海绵体内压反应被引量：8
- 2005年
- 目的:评价阴茎海绵体内压(ICP)监测在电刺激阴茎背神经和海绵体内注射罂粟碱诱导大鼠阴茎勃起反应中的应用。方法:选取性成熟雄性SD大鼠8只,20%氨基甲酸己酯(1000mg/kg)腹腔注射麻醉下,暴露阴茎并解剖阴茎背神经(DN),将充满肝素盐水并连接于压力传感器的25G针头插入一侧海绵体,取另一30G头皮针插入对侧海绵体,分别用于测定ICP和注射血管活性药物。分别以电刺激海绵体神经(刺激参数:电压4V,波幅0.5ms,频率16Hz,持续20s)和海绵体内注射罂粟碱(0.4mg)诱发阴茎勃起,采用SMUPPC型生物信号处理系统记录ICP变化。结果:麻醉大鼠的ICP基线水平为(12.3±3.1)mmHg(1mmHg=0.133kPa),DN电刺激后约30～60sICP明显升高[(36.4±2.3)mmHg,P<0.05],电刺激结束后缓慢下降至基线水平。海绵体内注射罂粟碱后5～8min可诱发ICP明显升高[(28.4±6.1)mmHg,P<0.05]。结论:监测电刺激大鼠DN及海绵体内药物注射诱发的ICP,为阴茎勃起这一复杂神经血管活动的动物模型在体实验研究提供了一种客观准确的科学工具,对于进一步研究阴茎勃起生理和勃起功能障碍的发病机制,评价治疗勃起功能障碍新疗法的疗效等具有重要意义。
- 邢俊平崔险峰孙建华李强刘健邱曙东
- 关键词：阴茎背神经电刺激
- 精索静脉曲张不育患者谷胱甘肽S-转移酶T1基因的遗传多态性分析
- 目的：探讨谷胱甘肽 S-转移酶 T1基因多态性(GSTT1)在精索静脉曲张不育中的作用。方法：按欧洲男性不育诊疗指南标准根据临床检查和彩色多普勒检查结果将研究对象分成精索静脉曲张不育组(n=63)和正常对照组(n=54)...
- 邢俊平吴齐飞孙建华薛炜王新阳金晓娟
- 文献传递
- 人精子体外氧化损伤对线粒体tRNA^(LeuUUR)基因的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨活性氧(ROS)对人类精子线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。方法:采用Percoll梯度离心法筛选具有正常生理功能的精子,作为正常精子模型,并分为损伤组20例和对照组20例,分别加入次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系或不予处理,37℃有氧环境中孵育60min。分别提取精子DNA,以Fpg酶切损伤碱基并采用接头介导PCR(LM-PCR)检测线粒体tRNALeuUUR基因的氧化损伤。采用Rhodamine(Rh123)荧光探针标记精子,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位,观察精子的功能。结果:与对照组相比,损伤组精子孵育后线粒体膜电位明显降低[(116.27±11.72)%vs(64.00±4.88)%,P<0.05]。Fpg酶切和LM-PCR显示精子线粒体tRNALeuUUR基因损伤。结论:ROS可能通过对精子线粒体tRNALeuUUR基因氧化损伤而影响精子功能(线粒体膜电位明显降低),从而引起不育。
- 孙建华邢俊平吴齐飞薛炜王新阳
- 关键词：活性氧线粒体膜电位
