徐增辉
- 作品数：13 被引量：21H指数：2
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生局科研基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺相关病毒2/8制备系统的建立及间充质干细胞对卵巢癌趋化作用的研究
- 腺相关病毒8(adeno-associate.viru.8，AAV8)是2002年在猿猴中分离得到的一类新型腺相关病毒载体，相对常用的AAV2具有更高的感染效率，更稳定持久的表达时间，且免疫原性更低，感染后表达迅速。20...
- 徐增辉
- 关键词：间充质干细胞卵巢癌趋化作用免疫组化肿瘤治疗
- 文献传递
- 腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子。方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统。检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性。应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子。结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P>0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P<0.05)或极显著地(P<0.01)高于CASI以及CAG的表达活性。结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU。
- 李振海吴红平徐增辉吕赛群施军霞刘品一李林芳金华君吴孟超钱其军
- 关键词：腺病毒启动子
- 应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒
- 2011年
- 目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力。结果实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×1012vg/ml,100ml摇瓶共得到1.5×1013vg rAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达。结论应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研究奠定了基础。
- 范丽徐增辉金华君徐凤青丁娜严淋钱其军
- 关键词：杆状病毒系统腺相关病毒昆虫细胞
- 腺相关病毒外壳修饰与肿瘤靶向治疗被引量：5
- 2008年
- 靶向性是肿瘤基因治疗取得成功的关键因素.在众多基因治疗病毒载体中,腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)是目前广为关注的基因治疗载体系统.AAV具有广泛的宿主范围,这也导致其缺乏组织或细胞特异性,对靶细胞的基因转染效率不高.因此,提高AAV载体在体内运输的靶向性和感染目的细胞的效率,是实现AAV基因治疗的关键.迄今为止,科学家已开发出很多策略来改造腺相关病毒的外壳,期望增强其靶向性或重靶向目的细胞.这些策略不仅包括传统的化学修饰、噬菌体展示、外壳基因组改造和嵌合载体,也包括新颖的标记营救、衣壳蛋白定向进化、AAV外壳直接肽段展示和AAVP(AAV-Phage)等.本文评述了对AAV外壳改造达到靶向肿瘤细胞的研究进展.
- 徐增辉周秀梅石文芳钱其军
- 关键词：RAAV靶向治疗基因治疗
- 晚期非小细胞肺癌患者DC-CIK治疗前的免疫状态与预后的关系被引量：9
- 2015年
- 目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(dendritic cellcytokine induced killers,DC-CIK)治疗前外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(regulatory T cells,TRegs)、CD3+CD56+细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells,CIKs)、CD4+/CD8+T细胞比值与预后的关系。方法采用流式细胞仪技术检测45例晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后外周血CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+和CD8+T细胞,并与患者临床特征进行相关分析;采用Cox回归模型分析治疗前CD4+CD25+CD127-TRegs、CD3+CD56+CIKs、CD4+/CD8+T细胞比值对患者预后的影响。结果晚期NSCLC患者DC-CIK治疗前、后比较,治疗后患者外周血CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+T细胞比值下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);原发病灶瘤体最长直径越大,患者治疗前外周血TRegs越多,CIKs越少(均P<0.05);生存分析显示,治疗前TRegs越多,患者预后越差,生存期越短,且TRegs>7×109/L影响患者的生存(P<0.05)。结论晚期NSCLC患者外周血TRegs是判断预后的独立预测指标。
- 蒋琦徐增辉王颖孙保木金华君钱其军
- 关键词：预后
- 肝细胞癌循环肿瘤细胞与肿瘤转移和预后关系的研究被引量：2
- 2015年
- 目的研究肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)与肿瘤转移和预后的关系。方法选取35例肝细胞癌患者,应用密度梯度离心法联合免疫磁珠阴性富集法富集CTC,然后利用染色体荧光原位杂交和细胞免疫荧光技术进行CTC鉴定并计数,同时记录临床相关特征,对数据进行统计学分析。结果所有患者均检出CTC,阳性率为100%,CTC个数均值为(4.1±2.5)个。对患者进行分组,Ⅰ组的CTC个数<5,Ⅱ组的CTC数量≥5。Ⅰ组、Ⅱ组的CTC数量差异有统计学意义(P=0.001),患者的性别、年龄与肿瘤转移无关(P=0.581、0.531),CTC的数量与转移及预后有关(P=0.024、0.01),Ⅰ组、Ⅱ组的转移和预后差异有统计学意义。结论 HCC患者外周血CTC的数量与肿瘤转移及预后有关,CTC的数量≥5时,可能肿瘤更具转移倾向,预后更差,患者生存期更短。
- 王真徐增辉郑罗凝王颖孙保木金华君钱其军
- 关键词：肝细胞癌循环肿瘤细胞预后
- 肿瘤抗体治疗的现状与发展趋势被引量：2
- 2011年
- 单克隆抗体在过去的30多年里经历了快速的发展,从杂交瘤技术的建立起,科学家先后研发出鼠源性、嵌合型、人源化以及全人化抗体技术。目前FDA批准上市的30个抗体中有10个用于肿瘤治疗,抗体治疗也被认为是肿瘤治疗最有效的方法之一。抗体偶联小分子、化疗药物等也成为人们的研究重点,他们展现出比单个治疗更为有效的临床反应。然而,肿瘤治疗抗体仍然存在着体内半衰期短、杀伤作用不够、难以渗透实体瘤、治疗靶点少、治疗成本高等问题。未来抗体研究的重点将是研制低免疫原性、高亲和性、多效价多克隆、更稳定和低成本的抗体。
- 徐增辉钱其军
- 关键词：抗体肿瘤
- 肝癌靶向基因治疗的载体选择及其优化
- 2011年
- 肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新增原发性肝癌患者25万例。我国是肝癌的高发区，目前患者数约占全球的55％，在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌。临床上肝癌治疗以手术为主，然而肝癌发病者大多数已处于晚期，常伴随肝内外多处转移，不适合手术。常规的化疗、放疗、介入等方法也只是辅助治疗，且会对患者造成较大身心伤害。
- 徐增辉钱其军
- 关键词：肝细胞基因疗法组织疗法
- 腺相关病毒载体的杆状病毒生产系统的构建被引量：2
- 2010年
- 由于腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的非致病性及能感染多种组织类型,重组AAV载体(rAAV)在基因治疗领域备受关注。然而,如何高效生产rAAV以适应临床上对其高产量的需求一直是限制其应用的瓶颈。借助杆状病毒携带rAAV包装所需组分,通过感染昆虫细胞来生产rAAV是一种能够解决其产量瓶颈的生产方式。将AAV2的Rep、Cap基因序列以及含AAV2 ITR及EGFP表达框的序列分别构建到三个杆状病毒中,通过共感染Sf9细胞来生产rAAV,结果显示成功包装出rAAV病毒,且病毒活力较好。这种生产方式很容易放大,将为AAV载体产业化及临床应用奠定基础。
- 雷求刚徐增辉钱其军
- 关键词：RAAV杆状病毒
- 恶性肿瘤患者DC-CTL/CIK免疫治疗后的免疫和临床响应研究
- 目的：近几年来，免疫治疗已经被应用于临床治疗多种恶性肿瘤，然而，对于患者接受DC-CIL/CIK治疗后的免疫和临床响应进行大规模的数据分析，这方面的研究仍非常少。本文从个体分析和系统分析两个水平上，分别对DC-CIL/C...
- 王颖徐增辉周福孙艳程静波李林芳金华君钱其军
- 关键词：免疫指标TREG
