徐宁
- 作品数：13 被引量：22H指数：4
- 供职机构：浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 质粒介导的RNA干扰对人类细胞中HBcAg表达的抑制作用
- 近年来,基于质粒载体的RNAi 的方法因DNA 合成便宜且稳定,能完整地进入宿主细胞的基因组产生长期的效应等优点。逐渐被认同为是一种较理想、经济的,产生RNAi 的可替代途径。本研究设计并构建了针对HBcAg 基因的sh...
- 徐宁陈智羊正纲姚航平侯晓丽吴炜蔡为民
- 文献传递
- 肝细胞性肝癌发生发展相关基因研究进展被引量：2
- 2005年
- 肝细胞性肝癌(HCC)最根本的发病机制在于基因的异常表达导致了肿瘤的出现。对与HCC发生发展相关基因的进一步了解将阐明HCC发生发展的规律,有利于筛选出有效的早期筛查和诊断的指标,提供基因治疗和预防的靶位点。本文从抑癌基因、原癌基因和印迹基因3方面对与HCC发生发展相关基因的近期研究进展加以综述。
- 夏琦陈智徐宁陈晓红
- 关键词：肝细胞性肝癌基因印迹基因研究进展相关基因
- tRNA^(val)-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用被引量：6
- 2006年
- 目的:以tRNAval-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法:针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位,以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNAval启动子的shRNA表达框(SEC),分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒(pC-EGFP)共转染AD 293细胞,转染后48 h,流式细胞术检测融合基因荧光表达情况,半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG 2.2.15细胞,72 h后放免法检测细胞培养上清HbsA g、HbeA g水平,RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果:共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒(pC-GFP)荧光强度和HBV C mRNA表达,其中SEC-492 i抑制效率最佳,而SEC-282 i相对较差。选定的492 i表达框(SEC-492 i)及282 ishRNA表达框(SEC-282 i),均呈剂量依赖性抑制hepG 2.2.15细胞HbeA g分泌和HBV pgRNA水平,其中SEC-492 i抑制HbeA g和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282 i。结论:在选定的5个siRNA靶位中,以492 i靶位RNA i效率最高。tRNAval-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选,有进一步推广应用价值。
- 潘修成陈智倪勤羊正纲徐宁金晗英
- 关键词：乙型基因小干扰RNAHBVC基因
- 哺乳动物RNA干扰中的小干扰RNA表达载体被引量：1
- 2004年
- 载体表达小干扰RNA的方法因便宜,稳定,操作方便的优点,在哺乳动物RNA干扰研究中有非常大的潜力和优势。本文对当前哺乳动物RNA干扰研究中的小干扰RNA表达用载体作一综述。小干扰RNA载体表达方法的广泛应用,将对功能基因组研究以及抗病毒和肿瘤的基因治疗产生深远的影响。
- 徐宁陈智
- 关键词：哺乳动物RNA干扰基因表达载体病毒载体
- HBV核心抗原EGFP融合蛋白表达质粒的构建及在Hep G_2细胞中的表达被引量：1
- 2005年
- 目的 探讨采用构建的质粒pHBc -EGFP转染HepG2 细胞 ,瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白的可行性。方法 克隆HBV核心抗原基因进入真核表达载体pEGFP -N1 中 ,脂质体法转染HepG2 细胞后在荧光显微镜下观察增强型绿荧光蛋白表达 ,并行RT -PCR及细胞免疫组化分析融合蛋白的表达。结果 重组pHBc -EGFP质粒可在HepG2 细胞内瞬时表达HBV核心抗原和增强型绿荧光蛋白融合蛋白。结论 pHBc -EGFP质粒构建成功 ,增强型绿荧光蛋白的表达可报告HBV核心抗原表达。
- 徐宁陈智姚航平羊正纲
- 关键词：乙型肝炎病毒
- 质粒介导的RNA干扰对人类细胞中HBcAg表达的抑制作用
- 近年来,基于质粒载体的RNAi的方法因DNA合成便宜且稳定,能完整地进入宿主细胞的基因组产生长期的效应等优点。逐渐被认同为是一种较理想、经济的,产生RNAi的可替代途径。本研究设计并构建了针对HBcAg基因的shRNA表...
- 徐宁陈智羊正纲姚航平侯晓丽吴炜蔡为民
- 文献传递
- tRNAval-shRNA表达框在筛选HBV C基因小干扰RNA靶位中的应用
- 目的目前生成siRNA的五种方法中,小发夹RNA(small hairpin RNA shRNA)或siRNA表达框技术被认为是快速经济筛选siRNA靶位的有效方法。我们首次以重叠延伸一步PCR法分别制备了三种RNA P...
- 潘修成陈智倪勤羊正纲徐宁金晗英
- 文献传递
- 小发夹RNA体外抑制HBV表面抗原的表达
- 目的:利用载体系统表达小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),诱导RNA 干扰(RNA interference,RNAi)为抗病毒研究提供一种新的方法。方法:构建含乙肝表面抗原和绿荧光蛋白(HB...
- 羊正纲陈智倪勤徐宁邵俊斌姚航平
- 文献传递
- 质粒介导的RNA干扰对AD293细胞中HBcAg表达的抑制作用被引量：5
- 2005年
- 目的研究质粒介导的RNA干扰效应对HBcAg基因表达的抑制作用。方法设计并构建针对HBcAg基因的小发夹RNA表达载体,将构建好的shRNA表达载体和HBcAg-增强型绿荧光蛋白融合蛋白表达载体共转染人胚肾细胞株AD293,以空载体组以及针对无关序列的shRNA表达载体组为阴性对照,流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测RNAi的抑制效果。结果构建的特异性shRNA表达载体可以抑制HBcAg基因在AD293细胞中的表达,流式细胞仪检测抑制率可达76%,实时荧光定量PCR法检测HBcAg基因的mRNA,抑制率可达58.6%。结论质粒介导的RNAi可以有效抑制HBcAg基因的表达,为利用RNAi进行抗乙型肝炎病毒复制研究提供了一个可供选择的方法。
- 徐宁羊正纲朱海红姚航平侯晓丽吴炜
- 关键词：基因疗法基因表达调控RNA干扰
- 小干扰RNA体外抑制HBs-GFP融合基因的表达被引量：4
- 2005年
- 目的利用增强型绿荧光蛋白(EGFP)和小发夹RNA(shRNA)表达载体技术,建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA的方法。方法将HBVS基因融合到EGFP中,建立HBs-GFP融合基因表达载体;同时构建带U6+27RNA转录启动子的shRNA表达载体pAVU6+4sh357。二载体共转染HepG2细胞后,流式细胞仪检测HBs-GFP蛋白的荧光强度;同时RT-PCR和实时定量PCR法检测HBs-GFPmRNA水平的改变。结果小干扰RNA有效抑制目的基因的表达,共转染后第72h荧光蛋白抑制率为55.4%;HBs-GFP融合基因的RNA表达受到显著抑制,抑制率达到90%。结论载体法表达的小干扰RNA体外显著抑制HBs-GFP融合基因的表达。
- 羊正纲陈智倪勤徐宁潘修成金晗英李星仪
- 关键词：RNA干扰表面抗原
