徐敬华
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌CFP10的基因克隆及表达被引量：2
- 2007年
- 目的克隆结核分枝杆菌CFP10基因,在大肠杆菌中进行表达,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR方法对CFP10的基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α中,抽提质粒,进行双酶切鉴定,再转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,以IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达形式。结果构建了具有正确基因序列的CFP10重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达。结论目的基因克隆入宿主菌中并表达成功,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：结核分枝杆菌CFP10基因克隆
- Esat－6蛋白在诊断结核病中的用途
- 本发明公开了Esat-6(Early secretory antigenic target-6)蛋白作为一种结核病鉴别诊断用变态反应原的用途。Esat-6是结核分支杆菌生长中分泌的一种低分子量蛋白，可来自结核杆菌短期培养...
- 王国治徐苗陈保文沈小兵徐敬华苏城
- 文献传递
- 结核分枝杆菌38ku蛋白的制备及其抗原性研究
- 2007年
- 目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌38ku蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法2003年2月至2004年3月在中国药品生物制品检定所菌苗室以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过聚合酶链反应(PCR)方法对38ku蛋白基因进行扩增,以PET-30a(+)为载体构建重组质粒,在大肠埃希菌中表达38ku蛋白,通过金属离子螯合亲和层析方法纯化重组蛋白,免疫印迹和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分析该重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的38ku蛋白重组质粒,在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,经过一步金属离子螯合亲和层析后得到纯度为92.7%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感度和特异度分别为80.5%(33/41)和96.0%(25/26)。结论大肠埃希菌工程菌以包涵体的形式表达38ku蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：KU蛋白基因表达抗原性酶联免疫吸附试验
- 结核分支杆菌14KDa蛋白的基因克隆、表达、纯化及其抗原性的研究被引量：1
- 2008年
- 目的基因克隆、表达、纯化结核分枝杆菌14KDa蛋白,研究其抗原性,评价其在血清学诊断中的价值。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增14KDa蛋白基因片断,将其插入到高效表达载体PET-22b(+)上,构建重组质粒PET-22b(+)/14KDa,重组质粒在大肠杆菌中由IPTG诱导表达,表达产物经金属离子鳌合亲和层析方法纯化,免疫印迹和酶联免疫吸附(ELISA)试验分析重组蛋白的抗原性。结果构建了具有正确基因序列的14KDa蛋白重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达,重组蛋白的表达量占菌体蛋白的40.8%,经过一步金属离子鳌合亲和层析后得到纯度为94.3%的目的蛋白。免疫印迹试验结果表明该蛋白能与羊抗结核血清发生特异免疫结合反应。应用ELISA方法对结核血清参考品进行检测,敏感性和特异性分别为75.6%和96.0%。结论获得了能高效表达14KDa蛋白的大肠杆菌工程菌,目的蛋白以可溶性形式表达,该重组蛋白具有良好的免疫原性,可望成为结核血清学的诊断抗原之一。
- 周丽蓉徐敬华罗永艾王国治
- 关键词：分枝杆菌结核抗原性酶联免疫吸附测定
- 结核分枝杆菌RD1区重组11 kD蛋白的克隆表达及效力被引量：12
- 2006年
- 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌RD1区11kD蛋白,并检测表达产物的效力。方法构建11kD蛋白编码基因原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)IPTG诱导表达,离子层析柱分离纯化重组蛋白。以结核分枝杆菌致敏豚鼠进行皮肤变态反应(DTH)测定。结果结核分枝杆菌11kD蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,表达蛋白占总菌体蛋白的33%以上,纯化后纯度达95%以上,并可诱导结核分枝杆菌致敏豚鼠产生迟发型超敏反应,5μg/ml11kD蛋白的效力与50IU/ml TB-PPD相当。结论重组11kD蛋白已在大肠杆菌中成功表达,并有望成为结核病皮试鉴别诊断用新试剂。
- 陈保文徐苗徐敬华沈小兵苏城王国治
- 关键词：结核分枝杆菌效力
- Esat－6蛋白在诊断结核病中的用途
- 本发明公开了Esat－6(Early secretory antigenictarget－6)蛋白作为一种结核病鉴别诊断用变态反应原的用途。Esat－6是结核分支杆菌生长中分泌的一种低分子量蛋白，可来自结核杆菌短期培养液...
- 王国治徐苗陈保文沈小兵徐敬华苏城
- 文献传递
