李丹妮
- 作品数：30 被引量：50H指数：3
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金辽宁省高校创新团队支持计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达
- 2010年
- 目的构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验。方法提取人乳腺癌细胞MCF-7mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验。结果hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1800bp。Westernblot检测到融合蛋白GST-hPAK4的表达,分子量约为94kDa,融合蛋白能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。结论成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose4B沉淀。
- 张红艳李彦姝王春玉苏楠李丹妮李丰
- 关键词：蛋白质印迹融合蛋白
- PAK4活化与胃癌患者预后的相关性研究
- 目的：胃癌是全球排名第四位的常见癌症之一，死亡率位居第二.尽管胃癌的治疗手段，包括手术术式和化疗方案，均有了新的改进，但由于淋巴结或者远处器官的转移，胃癌的预后仍然没有改善.P-21活化激酶4(Pak4)作为一种丝/苏氨...
- 李丹妮张晔曲秀娟
- 关键词：胃癌预后
- 小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制
- 2014年
- 目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。
- 张健刘彤李瑞娟刘奇李丹妮李丰
- 关键词：人胃癌COFILIN
- hRNF6基因重组质粒的构建及蛋白表达和定位
- 2010年
- 目的构建环指蛋白6(RNF6)真核表达载体,并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞HEK-293的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hRNF6全长编码基因,并将其克隆至pCDNA3.1-myc-his A及pEGFP-C1表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到工具细胞HEK-293中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-RNF6在工具细胞CV-1和胃癌SGC-7901细胞内的定位。结果 hRNF6全长基因序列克隆到了真核表达载体pCDNA3.1-myc-his A和pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为2058bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为78kDa。pEGFP-RNF6在CV-1细胞和胃癌SGC-7901细胞内定位以细胞核为主,在细胞质内少量表达。结论成功的构建了hRNF6全长基因真核表达载体,pEGFP-RNF6蛋白主要定位于胃癌细胞核内。
- 李洋刘彤李丹妮李丰
- 关键词：基因克隆融合蛋白转染
- GST-LMO1融合蛋白表达载体的构建及其在原核细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的构建GST-LMO1融合蛋白表达载体,并在原核细胞大肠埃希菌(E.coli)中诱导表达。方法以人胎脑文库为模板,用PCR方法法扩增出LMO1基因全长及各个截短突变体,通过BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点分别将其定向插入pGEX-5X-2载体中,构建原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,通过酶切电泳鉴定和DNA序列测定正确后,转入E.coli BL21中,经异丙基硫代β-D半乳糖苷诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果酶切电泳及测序结果证明,成功构建了原核表达质粒pGEX-5X-2-LMO1及其截短突变体,并用Western blot方法证实了GST-LMO1全长及各个截短突变体融合蛋白的表达。结论成功构建了LMO1全长及其截短突变体原核表达载体,并证实了其在原核细胞大肠埃希菌中的表达,为LMO1结构与功能的研究提供了前提基础。
- 顾卉佟宇鑫刘彤李慧李丹妮袁正伟
- 关键词：质粒原核表达
- 野生型和失活型PAK1基因自我抑制域的GST标签真核表达载体的构建及表达
- 2014年
- 目的:构建不同活性的人p21活化激酶1(hPAK1)自我抑制域(AID)谷胱甘肽(GST)标签真核表达载体并鉴定其融合蛋白表达,以探讨PAK1AID的功能及肿瘤治疗的靶向意义。方法:以pcDNA3.1HisC-PAK1全长质粒为模板,利用PCR扩增野生型(WT)PAK1AID片段,再以此片段为模板采用大引物法扩增其突变体L107F片段,双酶切克隆至GST融合的真核表达载体pEBG。将质粒转染至工具细胞HEK293中,并经免疫印迹鉴定GST融合蛋白的表达。结果:PCR扩增出约200bp大小的野生型和失活型PAK1AID片段,双酶切得到与预期大小相符的载体与PAK1AID片段,野生型与失活型pEBG-PAK1在工具细胞HEK293中表达,蛋白的相对分子质量均为33 000。结论:成功构建野生型和失活型PAK1基因AID的GST标签真核表达载体,并表达出不同活性的GST-PAK1AID的融合蛋白。
- 刘彤李丹妮李洋李丰
- 关键词：真核表达
- GATA1不同激酶活性突变体质粒的构建及蛋白表达和亚细胞定位
- 2018年
- 目的采用大引物法构建GATA1不同激酶活性突变体GATA1 S161A S187A(死型)和GATA1 S161D S187D(激活型)真核表达载体,并证实其融合蛋白在细胞内的表达及定位,旨在进一步探讨其生物学功能和潜在肿瘤治疗靶点。方法以GFP-GATA1 WT为模板,采用大引物法扩增S161A S187A、S161D S187D突变体片段,双酶切克隆至p EGFP-C1表达载体中,将重组质粒转染至HEK293中,经免疫印迹鉴定融合蛋白的表达。结果用大引物PCR法成功构建GATA1不同激酶活性突变体的真核表达载体p EGFP-GATA1 S161A S187A和p EGFP-GATA1 S161D S187D,验证了其融合蛋白表达。共聚焦激光显微镜技术显示,融合蛋白主要定位于细胞核内。结论利用大引物法成功构建GATA1不同激酶活性突变体真核表达载体,并为进一步进行该突变体的结构和功能研究奠定了基础。
- 李丹妮刘云鹏
- 关键词：磷酸化融合蛋白转染
- 血清循环miR-103a-2在非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义被引量：1
- 2017年
- 目的探讨miR-103作为非侵袭性生物学标志物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)代谢异常的筛查意义。方法以健康人群和NAFLD患者为研究对象,采集血清样本进行生化指标检测。采用Nucleo ZOL法分离血清miRNA,SYBR Green法对miR-103a-2进行相对定量分析。Speraman法对miR-103a-2和生化指标进行相关性分析。结果血清学分析结果显示,与健康人对照组相比,NAFLD组TC(P<0.01)、TG(P<0.01)、ALT(P<0.01)和γ-GGT(P<0.01)水平均明显升高。与血脂正常NAFLD组相比,高脂血症NAFLD组中TC(P<0.01)、TG(P<0.01)和LDL-C(P<0.05)水平均明显升高,与健康人对照组相比,血脂正常NAFLD患者(P<0.05)和伴有高血脂症NAFLD患者(P<0.01)血清miR-103a-2表达水平均升高。血清miR-103a-2水平与血清TC水平呈正相关(r=0.495,P=0.001)。结论血清miR-103a-2较血脂更为敏感,可能成为NAFLD无创性筛查指标。
- 王旭李丹妮付俣萧冯辉
- 关键词：非酒精性脂肪肝高脂血症MIRNA荧光实时定量PCR
- 小分子化合物O-565抑制胃癌细胞迁移侵袭及机制研究
- 2014年
- 目的:研究小分子化合物O-565对人胃癌细胞BGC823、MKN-45增殖、迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:应用MTT检测不同浓度小分子化合物O-565对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的化合物O-565处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述两种细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP-2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果:化合物O-565对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制上述细胞的迁移和侵袭。Western blot结果显示O-565能够下调胃癌细胞BGC823中MMP-2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论:化合物O-565可能通过下调细胞中MMP-2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制BGC823、MKN-45胃癌细胞的迁移和侵袭。
- 张健刘奇李瑞娟张红艳李丹妮李丰
- 关键词：胃癌MMP-2COFILIN
- 新生小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离方法被引量：1
- 2020年
- 目的提取新生小鼠的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并进行培养和鉴定。方法应用酶消化和免疫磁珠分选方法分离并纯化C57B/L6新生小鼠AECⅡ。根据AECⅡ特异的细胞形态,利用透射电镜进行鉴定。正置荧光显微镜观察AECⅡ特异性肺泡表面活性蛋白-C前体(proSP-C)及表面活性蛋白-B(SP-B)的表达。免疫印记技术检测新生小鼠AECⅡ中特异性肺泡表面活性蛋白-A(SP-A)及proSP-C的表达。结果每只新生小鼠可获得(2±0.5)×10^5AECⅡ,纯度>90%。电镜下可见丰富的AECⅡ及其特异结构板层小体。正置免疫荧光显微镜观测AECⅡ中proSP-C和SP-B蛋白的表达,免疫印迹结果显示细胞内SP-A和proSP-C蛋白表达呈阳性。结论利用酶消化和免疫磁珠分选的方法可成功分离出高产量、高纯度的新生小鼠AECⅡ。
- 国敏郝佳琳朱庆锋李丹妮李小曼
- 关键词：新生小鼠磁珠分选
