李文帅
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅重大科研项目更多>>
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- 人源Dickkopf-1真核表达质粒的构建
- 2009年
- 目的构建人源Dickkopf-1(DKK-1)基因的真核表达质粒,为进一步探讨DKK-1的生物学功能奠定基础。方法Trizol法从人新鲜胎盘组织中抽提总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增人源DKK-1的基因序列,将真核表达载体pcDNA3.1和DKK-1的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pcDNA3.1-DKK-l,转化至大肠杆菌后经菌落PCR、NHeⅠ和EcoRⅠ双酶切及测序鉴定。结果RT-PCR法从人胎盘中扩增出816bp大小的目的片段,重组质粒转化至大肠杆菌后菌落PCR同样扩增出816bp大小的目的片段,NHeⅠ和EcoRⅠ双酶切重组质粒能切出两条目的条带,测序后与Genbank中DKK-1的cDNA对比,证明DKK-1的基因序列完全正确。结论成功构建了pcDNA3.1-DKK-1重组质粒,为研究人源DKK-1的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础。
- 李文帅周幽心许期年
- 关键词：DICKKOPF-1重组质粒测序
- Dickopff-1的真核表达载体构建及其对SHG44的作用被引量：1
- 2010年
- 目的构建Dickopff-1（DKK-1）的真核表达质粒，研究SHG44转染DKK-1并经BCNU处理后其生物学特性的变化。方法将纯化扩增的人DKK-1与真核表达载体pcDNA3．1连接后转化人大肠杆菌DH5α感受态扩增重组，以Lipofectamine^TM2000介导将重组质粒转染SHG44细胞，经G418筛选后进行鉴定。BCNU处理转染DKK-1基因后的SHG44细胞，流式细胞仪检测细胞特性变化。结果扩增获得的816bp特异片段，重组质粒经鉴定及测序分析结果完全一致。重组载体转染SHG44细胞经G418筛选后，转染细胞在DNA、mRNA、蛋白水平均有DKK-1的表达。BCNU处理后的未转染、空质粒转染、重组质粒转染的三组SHG44细胞，平均凋亡率分别为1．0％、1．4％、8．0％。结论本实验成功构建了pcDNA3．1-DKK-1真核表达质粒，并建立稳定表达DKK-1蛋白的胶质瘤细胞株（SHG44-DKK-1）。转染DKK-1能增强SHG44对BCNU的敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡。
- 周幽心李文帅冯鸣
- Dickopff-1的真核表达载体构建及其对SHG44的作用
- ＜正＞1998年Dickopff-1（DKK-1）基因作为胚胎时期头部形成的诱导子和WNT信号传导通路的抑制因子而首次被发现,文献报道在正常人体组织中仅在人胎盘中能检测到DKK-1mRNA的表达,DKK- 1蛋白除了在胎...
- 周幽心李文帅
- 文献传递
