李瑾
- 作品数：101 被引量：271H指数：8
- 供职机构：山东省寄生虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省医药卫生科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学核科学技术自动化与计算机技术更多>>
- pEGFP-N1-HBsAg-ROP2多基因重组表达质粒的构建及表达鉴定
- 2018年
- 目的构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。方法根据HBs Ag基因序列和pc DNA3-p30-ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBs Ag基因,经酶切、连接、转化,利用HBs Ag基因替换p30基因,构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBs Ag-ROP2片段与p EGFP-N1真核表达载体相连,构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBs Ag片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pc DNA3-HBs Ag-ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与Gen Bank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论成功构建p EGFP-N1-HBs Ag-ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。
- 马荣肖婷李瑾孙慧徐超徐超尹昆尹昆赵桂华崔勇朱嵩刘功振魏庆宽
- 关键词：乙型肝炎PEGFP-N1质粒构建
- 弓形虫ROP2基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的体外扩增弓形虫棒状体分泌抗原2(ROP2)靶基因,构建真核表达载体pc-DNA3-ROP2。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据基因库ROP2基因序列设计合成1对引物,应用PCR扩增ROP2基因片段,回收纯化后克隆入TA载体质粒pUCm-T;用限制性内切酶EcoRⅠ、HindⅢ双酶切该重组子,将切下的ROP2基因在T4DNA连接酶作用下插入真核细胞表达载体质粒pc-DNA3,并进一步作双酶切、PCR及测序鉴定。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7kbROP2基因片段,克隆于pUCm-T载体中,再将ROP2基因亚克隆于真核表达载体质粒pc-DNA3,经筛选鉴定,构建pc-DNA3-ROP2重组质粒;测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。结论弓形虫ROP2基因片段,经TA克隆及亚克隆,构建弓形虫pc-DNA3-ROP2重组质粒。
- 魏庆宽张佃波李瑾李桂萍王洪法崔勇柏雪莲付斌刘玉冰宰德富黄炳成刘克义韩广东
- 关键词：弓形虫克隆基因重组
- 弓形虫棒状体蛋白ROP16的研究进展
- 棒状体蛋白16(ROP16)是弓形虫棒状体蛋白家族成员,这类蛋白结构存在丝氨酸、苏氨酸激酶区,是弓形虫入侵过程中重要毒力因子.ROP16可分泌到宿主细胞核,能磷酸化宿主细胞的转录活化因子STAT,干扰宿主细胞信号通路传导...
- 刘功振崔勇李瑾魏庆宽黄炳成尹昆赵桂华徐超王洪法
- 关键词：弓形虫磷酸化
- 刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA7基因的重组、表达及鉴定被引量：7
- 2014年
- 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据GRA7基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性。结果 GRA7基因PCR产物大小约为714bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA7融合蛋白分子质量单位约为53ku,该蛋白可被His标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA7基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。
- 张成芳李瑾张海国魏庆宽王卫艳肖婷徐超贾凤菊黄炳成
- 关键词：弓形虫融合蛋白蛋白纯化
- 分子生物学技术在疟疾诊断中的应用与展望被引量：2
- 2018年
- 疟疾与艾滋病、结核是世界公认的危害人类生命健康的三大公共问题之一。世界卫生组织报告,2016年全球还有44.5万人死于疟疾,疟疾的早期快速诊断对于及时治疗感染病例,降低死亡率,显得尤为重要。疟原虫诊断主要分为病原学诊断、免疫学诊断和分子生物学诊断。传统病原学诊断是疟疾诊断公认的"金标准",但是在实际的临床应用中,病原体检测较为费时费力,且受专业镜检人员匮乏,临床经验等因素限制,容易造成漏诊和误诊,已远不能满足疟疾防治工作的需要。免疫学诊断主要采用检测抗原、抗体的血清学方法,由于可用于检测的特异性抗原较少、抗原抗体反应的干扰因素较多,血清抗体产生的时间较长等因素,使疟疾诊断的准确性和及时性上还有待提高。进入21世纪,随着核酸探针、聚合酶链反应、环介导等温扩增技术、下一代测序技术等的应用,为疟原虫的实验室检测提供了新的途径,表现出了越来越高的敏感度和特异度。本文就分子生物学技术在疟疾诊断领域中的应用与展望作一综述。
- 宋观波徐超李瑾孙慧魏庆宽黄炳成
- 关键词：疟原虫疟疾诊断分子生物学
- 弓形虫免疫作图蛋白1在大肠埃希菌中的重组表达及纯化
- 目的:克隆刚地弓形虫强毒RH株的免疫作图蛋白1(IMP1),并在大肠埃希菌内进行重组表达、纯化和鉴定.
方法:以刚地弓形虫RH株的cDNA为模板,PCR(聚合酶链反应)扩增IMP1基因的完整开放阅读框(ORF序...
- 尹昆刘功振李瑾徐超朱嵩李琛琛赵桂华
- 关键词：弓形虫大肠埃希菌可溶性表达蛋白纯化
- 文献传递
- 蓝氏贾第鞭毛虫保护性抗原的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的筛选蓝氏贾第鞭毛虫的保护性抗原,为免疫疫苗的研制奠定基础。方法利用已建立的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体体外培养系统,获取滋养体抗原,并进一步分离、纯化、活性鉴定;然后分组免疫小鼠,检测相关免疫指标;再行攻击感染试验,视其抗感染能力,筛选出保护性强的抗原组分。结果成功获取5个组分的抗原蛋白(P76/66、P54/50、P34/32、P30/29和P21/19),P76/66抗原活性最强,其诱发BALB/C小鼠产生的抗体含量最高。各组分抗原免疫小鼠,产生的白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)及CD4+、CD8+T淋巴细胞的数量均随免疫次数的增多而逐渐增加。攻击试验结果显示,P76/66抗原的免疫保护率最高为100%,其次是P21/19为65%。结论P76/66抗原具有良好的免疫保护力,为蓝氏贾第鞭毛虫免疫疫苗的研制提供了物质基础。
- 陈锡欣傅婷霞赵长磊魏庆宽李瑾
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫保护性抗原免疫
- 抗弓形虫单克隆抗体的制备与鉴定
- 目的:制备抗弓形虫全抗原、天然P30、重组P30的单克隆抗体(mAb),为抗原提纯、弓形虫病诊断及亚单位疫苗的研制奠定基础。方法:用弓形虫全抗原、天然P30、重组P30分别免疫BALB／c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,...
- 魏庆宽李瑾付婷霞张佃波崔勇柏雪莲付斌刘玉冰王洪法宰德福黄炳成韩广东刘克义
- 关键词：弓形虫
- 文献传递
- 细胞周期相关激酶在大肠癌组织中的表达及其意义被引量：5
- 2015年
- 目的探讨细胞周期相关激酶(CCRK)在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌临床病理特征之间的关系。方法选取50例经病理学确诊的原发性大肠癌患者的癌组织,以配对的癌旁组织作为对照,采用RT-PCR和Western blot检测CCRK mRNA和CCRK蛋白表达的差异性。结果 CCRK蛋白在大肠癌组织中的阳性率为60.00%(30/50),癌旁结肠组织阳性率为40.00%(20/50)差异有统计学意义(χ2=5.769,P<0.05);CCRK蛋白在大肠癌组织中的相对表达量为2.69±0.87,癌旁组织为1.00±0.28,差异有统计学意义(t=5.81,P<0.05)。CCRK mRNA在大肠癌组织中的阳性率为64.00%,癌旁组织为42.00%,差异有统计学意义(χ2=4.857,P<0.05);CCRK mRNA在大肠癌组织中的相对表达量为2.45±0.92,癌旁组织为1.00±0.21,差异有统计学意义(t=4.83,P<0.05)。PT3-4期大肠癌组织CCRK mRNA阳性率为85.70%(12/14),PT1-2期大肠癌组织阳性率55.56%(20/36),差异有统计学意义(χ2=3.979,P<0.05);PN1-2期大肠癌组织CCRK mRNA阳性率为87.50%(14/16),PN0期为52.94%(18/34),差异有统计学意义(χ2=5.640,P<0.05)。结论 CCRK的高表达与大肠癌发生、发展及其TNM分期有关,检测CCRK蛋白和CCRK mRNA表达可以作为大肠癌早期诊断和预后的一项重要参考指标。
- 王茜杨景玉曲锦黄炳成魏庆宽李瑾王一波尹立新孔令斌
- 关键词：大肠癌RT-PCRWESTERNBLOT临床病理
- 弓形虫微线蛋白16抗原表位区的预测及酵母表面展示被引量：1
- 2017年
- 目的应用生物信息学软件预测弓形虫微线蛋白16(TgMIC16)B/T细胞抗原表位并对抗原表位区进行酿酒酵母菌的表面展示。方法利用DNAStar和IEDB对TgMIC16进行B细胞抗原表位预测,利用SYFPEITHI和BIMAS预测其T细胞抗原表位。参照预测结果,采用pCTCON2/EBY100展示系统对抗原表位区进行酵母表面展示,利用间接免疫荧光(IFA)和流式细胞仪检测表达情况。结果 TgMIC16存在潜在的B/T细胞抗原表位且集中在aa343-625区域;该抗原表位区成功展示到酵母细胞表面,最佳诱导时间为24~36h。结论为下一步酵母载体疫苗的研制及疗效评价奠定基础。
- 孙慧李瑾肖婷徐超尹昆黄炳成雷战魏庆宽
- 关键词：抗原表位
