李璐
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA氧化性损伤分子生物学标志物研究及其在预防医学中的应用
- 柯跃斌程锦泉鲁文清庄志雄张丹袁建辉张志诚李璐张仁利
- 本项目属于环境医学和毒理学领域。 本研究将实验研究与分子流行病学方法结合起来，在国内率先建立了研究DNA氧化性损伤与修复作用的技术平台，陆续构建了细胞、动物脏器、人类外周血和尿中DNA氧化性损伤分子生物学标志物8-OH...
- 关键词：
- 关键词：DNA氧化性损伤分子生物学标志物
- 人癌症高表达蛋白1在有丝分裂期和分裂间期的定位研究
- 2010年
- 目的:分析人癌症高表达蛋白1(HEC1)在有丝分裂期和分裂间期的定位和表达调控相关蛋白基序。方法:用逆转录聚合酶链反应法从HeLa细胞中克隆HEC1基因cDNA,并构建其真核表达载体;对HEC1 cDNA测序序列进行生物信息学分析;HEC1真核表达载体转染293T细胞后,用Western blot进行表达分析;并用有丝分裂抑制剂(nocodazole)对细胞进行同步化和释放,观察有丝分裂期和分裂间期时HEC1定位。结果:电泳和酶切鉴定,得到含有HEC1的真核表达载体,Westernblot证实表达载体可在转染细胞中表达重组HEC1蛋白;HEC1测序序列分析发现多个与定位和调控相关基序,提示HEC1可能受APC/C蛋白酶体调控;HEC1在有丝分裂期定位于染色体,在分裂间期定位于细胞质靠近细胞核部位。结论:获得HEC1基因cDNA及表达载体,HEC1定位随不同细胞周期而变化。
- 王革非李璐李康生
- 关键词：细胞周期
- 弓形虫依钙蛋白激酶Calpain-like基因的克隆及表达被引量：3
- 2008年
- 目的克隆弓形虫RH株Calpain-like基因片段,构建原核表达载体,诱导表达Calpain-like基因重组蛋白。方法收集、纯化弓形虫RH株速殖子,提取总RNA,在设计合成的引物中引入SalⅠ和EcoRⅠ酶切位点。应用RT-PCR扩增弓形虫RH株Calpain-like基因片段,插入pGEM-T载体,提取重组质粒,双酶切获得目的基因,亚克隆到原核表达质粒pET32a,重组子经双酶切、PCR和DNA序列分析鉴定,转化大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达。结果从弓形虫RH株速殖子cDNA中扩增出316bp的Calpain-like基因片段;含pET32a/Calpain-like的重组质粒在宿主菌经诱导后,获得与预期分子量相符的表达产物。结论成功地克隆和表达弓形虫RH株Calpain-like基因,弓形虫Calpain-like基因的克隆表达为进一步筛选弓形虫疫苗候选分子和治疗药物的靶位提供了研究基础。
- 陈雪艳付玉才李璐耿艺介黄达娜高世同张仁利
- 关键词：弓形虫基因克隆蛋白表达
- 针对RhD血型抗原的单链寡核苷酸适配体修饰红细胞毒性的初步研究被引量：1
- 2022年
- 目的 探讨RhD血型抗原的单链寡核苷酸(ssDNA)适配体对红细胞毒性的影响。方法 通过基因合成得到的2条全长82 bp ssDNA的RhD血型抗原适配体;收集5份EDTA抗凝全血,分别制备成4×10^(7)/mL的悬浮红细胞,均分为10管,各5管(100μL/管)标记为实验组:加入2条单特异性ssDNA全长序列(100 pmol/μL)各5μL;对照组:加入等量生理盐水。2组在37℃孵育洗涤60 min后,在LISS液中重悬,于4℃贮存。根据贮存时间不同将实验组和对照组进一步分为1 h、1 d、3 d、10 d、17 d共5个组(每组重复5个血液标本);以FITC标记的Annexin V作为探针标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的磷脂酰丝氨酸(PS),以Fluo-4标记不同贮存时间LISS悬液中红细胞的Ca^(2+)。分别通过流式细胞仪检测不同保存时间LISS悬液中红细胞PS的外翻情况以及红细胞中Ca^(2+)的变化。结果 光学显微镜镜检:孵育后的实验组未发生凝集,对照组发生凝集。流式细胞仪检测:2组间相同贮存时间悬浮红细胞的Annexin V-FITC染色细胞数相近(P>0.05);实验组Annexin V细胞凋亡率(%):贮存10 d时为6.06±1.38,明显高于贮存1 h(P<0.05),贮存17 d时为7.77±1.23,明显高于贮存1 h、1 d、3 d(P<0.05)。2组间在相同贮存时间悬浮红细胞Fluo-4 AM细胞凋亡率相近(P>0.05);实验组Fluo-4 AM细胞凋亡率(%)贮存3 d、10 d、17 d分别为20.84±4.16、22.35±3.37、27.06±2.81(P<0.05)。结论 未发现ssDNA适配体对红细胞存在细胞毒性影响;RhD ssDNA适配体或有望成为检测及制备通用血的材料。
- 李璐张印则王斌王铸
- 关键词：细胞毒性
- 弓形虫依钙蛋白激酶Calpain-like的克隆及生物学特性被引量：1
- 2008年
- 目的克隆弓形虫RH株Calpain(依钙蛋白酶)-like基因,分析免疫生物学功能,筛选预防弓形虫感染的疫苗候选分子。方法利用人类、鼠类和其它寄生虫的Calpain基因同源性比较的保守区域合成混合引物,以弓形虫的RNA为模板,应用RT-PCR扩增弓形虫Calpain-like基因片段,扩增的片段通过TA克隆插入克隆载体pET32A,筛选阳性克隆进行双酶切鉴定和DNA序列分析,用克隆的基因片段制备特异性基因探针,经Northern blot技术证实弓形虫Calpain-like基因mRNA。结果RT-PCR扩增了316bp弓形虫Calpain-like基因,其DNA序列与日本血吸虫Calpain基因同一区域的同源性为70%,与计算机推测的弓形虫Calpain-like基因的同源性为100%。Northern blot显示了弓形虫Calpain-like基因mRNA的大小约6300bp。结论弓形虫RH株基因组中存在Calpain-like基因,Calpain-like基因在弓形虫RH株中高度表达。
- 陈雪艳付玉才李璐耿艺介黄达娜高世同张仁利
- 关键词：弓形虫基因克隆RT-PCR
