李静雯
- 作品数：13 被引量：68H指数：4
- 供职机构：第四军医大学基础医学部神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗅鞘细胞培养液对海仁藻酸损伤脊髓神经元一氧化氮产生的影响被引量：3
- 2005年
- 目的研究嗅鞘细胞培养液(OECCM)对海仁藻酸(KA)损伤后原代培养脊髓神经元的作用,进一步探讨其保护的作用机理。方法采用原代细胞培养法,分别培养了胚胎小鼠脊髓神经元和成年大鼠的嗅神经鞘细胞(OECs),收集OECCM。通过给予KA建立体外的损伤模型,KA分别作用6,8,12h后,加入OECCM继续培养24￣36h。然后进行抗神经元型一氧化氮合酶(ncNOS)免疫细胞化学染色,观察细胞ncNOS表达情况,并对各组ncNOS阳性神经元数目进行统计,同时运用四唑盐(MTT)比色法检测神经细胞活性;最后对不同组的一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞染色情况、阳性细胞数目和细胞活性进行比较。结果KA作用后,一氧化氮(NO)都出现异常表达,但与实验组(OECCM干预组)相比,OECCM处理组NO表达水平明显低于单纯KA损伤组。OECCM处理组NOS阳性细胞数目(6h组,34.3±5.25;8h组,40.6±3.68),明显低于对照组(6h组,42.3±3.48;8h组,54.5±6.30)(P<0.01),在KA损伤12h时,两组NOS阳性细胞数(52.3±5.23vs61.32±6.45)(P<0.05);而细胞活性(6h,0.372±0.034;8h,0.312±0.026)明显高于对照组(6h,0.283±0.041;8h,0.219±0.033)(P<0.01),12h时两组细胞活性没有明显差异(0.199±0.012vs0.202±0.032)(P>0.05)。结论OECCM中可能含有一些保护脊髓神经元免遭KA损伤的因子,这些因子可能在参与抑制NOS异常表达起了重要作用。
- 杨浩李静雯罗娜游思维鞠躬
- 关键词：嗅鞘细胞细胞培养脊髓一氧化氮
- EGCG对羟自由基损伤小鼠胚胎海马神经元的保护作用被引量：2
- 2005年
- 为了探讨表没食子儿茶素没食子酸酚(tea polyphenol(-)-epigallocatechin gal-late,EGCG)对羟自由基损伤小鼠海马神经元的保护作用,采用原代细胞培养技术,分离培养18 d小鼠胚胎海马神经元,培养4 d后,加入FeSO4和H2O2进行处理,随后加入不同浓度的EGCG培养24 h,通过观察细胞的形态学变化,四甲基偶氮唑盐(methylthiazolydi-phenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法分析细胞活性,检测神经元中丙二醛(malondi-aldehyde,MDA)以及培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量的变化,以探讨EGCG对羟自由基损伤神经元的保护作用。结果显示,EGCG能够抑制神经元MDA的产生,降低神经元细胞外液中LDH的含量,增加细胞的活性,从而进一步证明EGCG能够清除羟自由基产生,减轻羟自由基对神经元损伤,对神经元的存活有一定的保护作用,为其用于治疗中枢神经系统病理性损伤的打下实验基础。
- 杨浩李静雯罗娜程希平鞠躬
- 关键词：细胞培养海马羟自由基
- 嗅成鞘细胞条件培养基对PC12细胞促分化作用及对分化后细胞损伤的保护作用被引量：4
- 2006年
- 目的研究嗅成鞘细胞条件培养基(OECCM)对PC12细胞促分化作用及其对-OH自由基损伤分化后细胞的保护作用。方法采用原代分离培养的方法培养和纯化嗅成鞘细胞,收集其培养上清作为OECCM,然后用其培养PC12细胞,培养3 d后,进行细胞形态学观察及-βtubulin免疫细胞化学染色,同时在同一批细胞中加入100μmol/L FeSO4和50μmol/L H2O2作用20 min,再用OECCM继续培养48 h,然后进行MTT对细胞活性进行检测和存活细胞计数。结果用OECCM培养的PC12细胞长有突起,形态酷似神经元,并且-βtubulin免疫细胞化学染色呈阳性,而对照组细胞在同样培养时间里,没有明显的形态变化,-βtubulin染色呈阴性。用FeSO4和H2O2产生的-OH自由基对分化后的PC12细胞进行损伤,发现继续用OECCM培养后,反映细胞活性的A值为0.346 5±0.032,对照组0.201 8±0.034(P<0.01);同时两组细胞存活数目的百分比分别为:实验组为(56.7±5.9)%,对照组为(23.8±7.4)%(P<0.01)。结论嗅成鞘细胞可以分泌有促PC12细胞分化作用的分子和对分化后的细胞在损伤时有保护作用的分子。
- 杨浩王春婷许汉鹏李静雯游思维鞠躬
- 关键词：嗅成鞘细胞细胞分化PC12细胞
- 细胞特性状态及细胞数与OD值的关系探讨被引量：21
- 2002年
- MTT比色法是用于检测体外培养细胞生长存活及数目的方法之一。细胞特性、接种密度是否理想直接关系到实验结果的准确性和客观性 ,为了进一步提高 MTT法在不同条件下检测细胞活性的灵敏性和显著性 ,本文以神经细胞及 PC1 2细胞为实验材料 ,探讨了它们在正常及病理生长状态下 ,细胞数目与 MTT法所得细胞活性的 OD值之间的关系 ,比较了不同数目细胞活性 OD值之间的差异 ,最后得到OD值有显著性差异的最佳细胞浓度范围。
- 杨浩王春婷吴玉梅李静雯鞠躬
- 关键词：MTT试验细胞数OD值细胞培养
- Thymosin-β4对酒精致星形胶质细胞凋亡的抑制作用
- Thymosin-β4是分子量为5000的多肽,是肌动蛋白的隐蔽蛋白的结合蛋白,广泛分布于哺乳动物的组织之中。在神经系统的发育和成熟的过程以及局部脑缺血、兴奋性神经毒素作用后中,不同脑区都有Thymosin-β4的表达迅...
- 杨浩李静雯姚琴鞠躬
- 关键词：星形胶质细胞细胞凋亡
- 成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养的研究被引量：9
- 2005年
- 嗅神经鞘细胞(olfactoryensheathingcells,OECs)是目前用于神经再生研究较为理想的移植细胞,为了建立一种可以有效获得高纯度、高均一性的OECs培养方法,本实验采用2. 5月的大鼠嗅球为实验材料进行OECs培养,同时结合OECs的生物学特点在培养8d后,通过用硝酸纤维素膜吸附p75抗体,再对培养的OECs进行免疫亲和吸附和对成纤维细胞进行补体杀伤来纯化OECs, 在纯化后分别对培养2、4、6、8d的OECs进行p75免疫组化染色和纯度鉴定。实验结果发现,本研究采用的OECs纯化培养方法所获得OECs纯度在4个不同培养时间点都达到98%以上,说明此方法是一种高效率的纯化培养OECs的方法。
- 杨浩鞠冬阳李静雯程希平游思维鞠躬
- 关键词：成年大鼠嗅神经鞘细胞纯化培养细胞培养中枢神经系统损伤神经移植
- 兔背根神经节植块法的雪旺氏细胞培养被引量：1
- 2002年
- 目的:建立一种新的培养雪旺氏细胞(Schwann cell,SC)的方法,为神经移植研究获取高纯度的细胞奠定基础。方法:采用植块培养的方法,分离新生1～2天兔子的背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG),弃膜,剪碎进行植块的雪旺氏细胞的培养,然后采用阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)抑制,差速贴壁法、Forskolin的牛垂体提取液(bovine pituitary extract,BPE)刺激进行细胞纯化,最后S-100免疫组织化学染色进行纯度鉴定。结果:本实验采用背根神经节植块及纯化的方法获得雪旺氏细胞的纯度可达95％以上。结论:这种选用DRG组织块培养及纯化SC的方法效率很高而且简单方便,所获SC的纯度高数量大。
- 杨浩游思维王春婷吴玉梅李静雯鞠躬
- 关键词：雪旺氏细胞背根神经节细胞培养
- 芍药甙对体外培养大鼠星形胶质细胞活性的作用被引量：25
- 2002年
- 目的 观察中药芍药有效成分芍药甙 (paeoniflorin ,PF)对培养的大脑皮层星形胶质细胞活性的影响。方法 采用体外星形胶质细胞培养的方法 ,对新生SD大鼠 (P2 )大脑星形胶质细胞进行培养 ,7d后纯化 ,再分别进行有血清和无血清培养。以MTT法观察PF对星形胶质细胞活性的影响 ,运用免疫组织化学的方法进行形态学观察。 结果 PF对星形胶质细胞活性有明显的抑制作用 ,不同浓度PF组星形胶质细胞活性均低于对照组 (P <0 0 1) ,并呈现出一定的量效关系 ,这种对星形胶质细胞活性的抑制作用与血清的存在与否无关。 结论 本实验表明芍药甙能抑制星形胶质细胞的活性 ,从而提示PF促进神经细胞活性的作用是一种直接的作用 。
- 吴玉梅许汉鹏王春婷李静雯鞠躬
- 关键词：芍药甙细胞培养星形胶质细胞活性免疫组织化学药理学
- GDNF对缺气损伤的体外培养新生大鼠背根节神经元的作用
- 2002年
- 运用体外缺气损伤的细胞模型 ,研究GDNF对损伤的新生大鼠背根节神经元( DRG)是否有保护作用。采用原代培养的方法 ,用 N1无血清培养基分离培养 DRG神经元 2 4h后 ,加入含 2 0 μg/m L GDNF的无血清培养液 ,然后液体石蜡封闭培养液 ,继续培养 4,8,1 2 ,2 4h,分别做 MTT实验检测细胞活性 OD值 ,台盼蓝染色记数 ,细胞总蛋白测定以及形态学观察突起生长状况。结果表明 :1封闭 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞存活数同对照组相比有显著升高 ( * * P <0 .0 1 ) ,其余各时间点均无显著性差异。缺气损伤 8h和 1 2 h后 ,GDNF组的 DRG细胞总蛋白较对照组显著升高 ( * * P <0 .0 1 ,* P <0 .0 5) ,其余各时间点均无显著性差异 ;2各时间点 DRG细胞活性及突起长度的变化差异均不显著。缺气损伤一定时间后 ,GDNF对新生大鼠 DRG细胞的存活数及细胞总蛋白有明显的保护作用 ,而对细胞活性及突起的生长则没有明显的促进作用。
- 王春婷杨浩孟晋宏吴玉梅李静雯鞠躬
- 关键词：GDNF体外培养背根节神经元神经细胞培养
- CNTF基因表达对PC12细胞分化作用的研究
- ＜正＞ 应用转基因技术将自行构建的pcDNA 3-h CNTF质粒转入COS7细胞进行表达,冉将h CNTF修饰过的COS7细胞与PC12细胞进行联合培养。3天后,对CNTF修饰过的COS7作用后的PC12细胞进行形态学...
- 杨浩金卫林游思维王春婷李静雯鞠躬
- 文献传递
