王传玺
- 作品数：19 被引量：16H指数：3
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 抗乙型肝炎病毒HDV核酶的研究新进展
- 2005年
- 乙型肝炎病毒 (HBV)是严重威胁人类健康的一种病毒 ,特别是在我国约有 1 2亿人为HBV携带者 ,占世界的 1 3。对已感染HBV者 ,常用的化学及免疫疗法通常无效。今年来 ,研究者试图利用反义技术 ,通过在基因表达水平上抑制HBV的复制 ,来达到治疗HBV感染的目的。核酶是具有RNA裂解活性的RNA分子 ,能特异地结合并切割靶RNA分子。HDV核酶是唯一在人体细胞天然具有裂解活性的核酶类型 ,研究将HDV核酶作为HBV的反义抑制剂可能有着其独特的优势。本文就HDV核酶靶位点的筛选、病毒载体导入系统、靶向性分子的构建等热点问题的研究新进展予以综述。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹
- 关键词：HDV核酶HBV携带者抗乙型肝炎病毒RNA分子靶位点基因表达水平
- 质粒DNA抗原芯片检测抗双链DNA抗体的初步研究
- 2006年
- 目的:建立以质粒DNA作为抗原的检测血清中抗双链DNA(dsDNA)抗体的芯片方法,并与酶联免疫吸附实验比较,初步探讨用芯片法检测抗dsDNA抗体的临床价值。方法:将原核表达载体质粒pcDNAⅡ用质粒DNA快速抽提试剂盒提取纯化DNA后按1∶2稀释,用点样仪点在经3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)修饰的玻片上,温孵后用含有1%小牛血清白蛋白和2.5%蔗糖的PBST封闭,以Cy3标记的人IgG为二抗,建立检测dsDNA抗体的芯片方法,并与德国欧蒙公司生产的抗双链DNA检测ELISA试剂盒做比较,对包括58例系统性红斑狼疮(SLE)、25例干燥综合征(SS)、10例皮肌炎(DM)和7例类风湿关节炎(RA)在内的病人和60例健康人对照进行了抗dsDNA的对比检测。结果:对阳性标本的检测,与现用常规检测方法ELISA相比,芯片检测抗dsDNA的灵敏度为91.3%,特异度为90.7%,阳性预测值为89.3%,阴性预测值为92.5%;对健康对照的检测,2种方法均为阴性,符合率为100%。结论:与ELISA相比,用质粒DNA作为抗原建立的芯片方法的灵敏度和特异度较高,为今后建立同时检测多个自身抗体的芯片奠定了基础。
- 徐华韩金祥高雪芹黄海燕潘继红王传玺
- 关键词：生物芯片质粒DNA抗双链DNA抗体
- 逆转录病毒靶向介导HDV核酶体外抑制HBV表达被引量：4
- 2007年
- 目的包装携带HDV核酶的肝细胞靶向性逆转录病毒载体,并检测体外HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的影响。方法采用脂质体法,分别包装出携带针对HBV不同基因组区域的HDV核酶的肝细胞靶向性重组逆转录病毒,感染HepG2215细胞,ELISA及荧光定量PCR检测HDV核酶对乙型肝炎病毒表达的抑制作用。结果pMSCV-U6-PreS2-Rz和pM-SCV-U6-C-Rz对乙型肝炎病毒表面抗原抑制率明显高于其他HDV核酶和对照组,分别达80%和85%,且高于脂质体转染介导的同种核酶对乙型肝炎病毒表面抗原表达的抑制率。结论靶向性重组逆转录病毒能够携带HDV核酶进入HepG2215细胞,并且对乙型肝炎病毒的表达有较高的抑制作用,为抗病毒治疗的研究奠定了基础。
- 戚鹏韩金祥鲁艳芹王传玺
- 关键词：HDV核酶乙型肝炎病毒
- 靶向肝细胞重组逆转录病毒载体的构建
- 2007年
- 目的:包装5种携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组逆转录病毒,筛选肝细胞靶向性好的病毒载体。方法:在前期构建的融合表达质粒基础上,构建4种新的表达质粒,采用脂质体法将这5种质粒分别与质粒pL-EGFP共转染已稳定表达Gag-Pol蛋白的NIH3T3包装细胞系中,48 h后收获病毒上清,分别感染肝源性HepG2215细胞及非肝源性293T细胞,48 h后提取细胞总RNA,荧光定量PCR比较重组病毒的靶向性。结果:酶切鉴定结果表明4种新的表达质粒构建成功,包装的病毒滴度约为105cfu/ml,以pcDNA3.1(-)-envm-preS1-S2质粒包装的病毒有较好的肝细胞靶向性。结论:包装的肝细胞靶向性好的重组逆转录病毒载体,为包装携带HDV核酶的病毒载体以及HDV核酶抑制乙型肝炎病毒复制表达的研究奠定了基础。
- 戚鹏韩金祥鲁艳芹王传玺
- 关键词：肝细胞逆转录病毒科DNA突变分析聚合酶链反应
- 逆转录病毒包装细胞系和肝细胞靶向性导入方法
- 本发明涉及一种逆转录病毒包装细胞系和肝细胞靶向性导入方法。该方法是组建新的逆转录病毒包装细胞系，该细胞系能表达病毒包装所必备的GAG-POL，以及ENV-PHSA-R融合蛋白，同时，env上对病毒感染起关键作用的基因被定...
- 鲁艳芹韩金祥王传玺戚鹏栾中华
- 文献传递
- MoMLVgag-pol基因在NIH3T3细胞中的表达和鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的:构建含MoMLVgag-pol基因的重组表达载体,实现其在NIH3T3细胞中稳定表达。方法:应用RT-PCR方法反转录并扩增gag-pol基因,克隆入真核表达载体pcDNA4/HisMaxA上,构建重组表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol,用脂质体法转染NIH3T3细胞,Zeocin筛选稳定表达细胞株,通过SDS-PAGE分析检测表明,gag-pol基因在NIH3T3细胞实现了表达,产物相对分子质量(kDa)为194.78×103。然后,将逆转录病毒载体导入此细胞系,包装逆转录病毒。用PCR与标记基因补救分析法检测野生型辅助病毒。结果:酶切鉴定的片段大小分别为5.2kb,与预期大小一致,经Zeocin筛选后获得稳定表达细胞株,SDS-PAGE实验表明产物融合蛋白相对分子质量(kDa)为194.78×103,与预期相符。脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒。结论:构建的融合表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol及其在NIH3T3细胞中的表达,构建成功具有靶向性的逆转录病毒包装细胞系,该细胞系能够包装出高滴度的逆转录病毒,为肝细胞的基因治疗提供了一种新的基因转移系统。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹宋宝刘杰
- 关键词：MOMLVNIH3T3细胞真核表达载体
- 乙型肝炎病毒前S2-ENV融合基因在NIH3T3细胞中的表达和初步鉴定
- 2007年
- HBV是严重威胁人类健康的病毒之一，在我国约有1．2亿HBV携带者，但目前对乙型肝炎的治疗仍停留在对症治疗及调节机体免疫功能等阶段，尚无直接抑制HBV复制的有效方法。反义技术是依赖反义寡核苷酸（ODN）、反义RNA和核酶（ribozyme）等手段进行基因治疗、基因调控研究的方法。它在基因水平上考虑选择性关闭或修饰靶基因，使其失活而达到对疾病的特异性治疗，或研究特定基因功能及基因调控机制等。HBV在复制过程中经历了从前基因组mRNA逆转录到DNA的过程，利用反义技术能直接抑制病毒复制。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹宋宝高雪芹
- 关键词：乙型肝炎病毒NIH3T3细胞融合基因HBV携带者基因调控机制
- HBV靶向性HDV核酶载体的筛选被引量：4
- 2005年
- 目的探讨利用核酶(ribozyme)独特的切割抑制活性,抑制乙型肝炎病毒的复制生长,可以用来治疗乙型病毒性肝炎。利用各种方法筛选出HBV靶向性HDV核酶载体。方法根据山东省医药生物技术研究中心构建的HDV核酶结构特点,筛选并合成核酶序列,构建到原核载体中,转染到细胞中,根据测定载体的抑制效果,从而筛选出效果好的核酶载体。结果通过ELISA检测和定量PCR检测筛选出了2种抑制效率高的HDV核酶,抑制率达68%。结论应用ELISA检测和定量RT-PCR检测联合的方法可以筛选出比较符合细胞内条件的核酶,以便后续实验。
- 栾中华韩金祥鲁艳芹王传玺裴晓俊
- 关键词：核酶丁型肝炎病毒基因治疗
- 肽核酸在分子生物学方面的应用研究进展被引量：2
- 2004年
- 肽核酸是一种核酸类似物 ,它是由 2 氨基乙基甘氨酸蛋白骨架取代核酸的磷酸戊糖 ,可以高度特异地与所选基因序列的靶点结合。肽核酸能高亲和性、高特异性地与DNA或RNA杂交形成稳定双螺旋或三螺旋结构 ,并且杂合分子表现极强的热稳定性。此文就肽核酸在基因治疗中作为反义药物、杂交探针等分子生物学中的应用研究进展予以综述。
- 王传玺韩金祥鲁艳芹
- 关键词：肽核酸分子生物学基因治疗反义药物
- 用于乙肝病毒的荧光定量PCR检测试剂盒
- 乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法及专用试剂盒，属于生物技术领域。本发明的方法是通过对乙型肝炎病毒表面抗原，核心抗原和E抗原区等三对不同的引物和探针的优化，筛选出了扩增效果最好的一对引物和探针。比较了用不同方法提取的血清...
- 鲁艳芹韩金祥王传玺戚鹏沈忠林
- 文献传递
