王志刚
- 作品数：3 被引量：19H指数：2
- 供职机构：南通医学院卫生系江苏省分子神经生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 原核表达融合蛋白的亲和层析法纯化被引量：6
- 2001年
- 目的 :以T7·TagAffinityPurificationKit纯化原核表达Tropic 180 8基因编码的融合蛋白 ,并进行免疫印迹检测。方法 :以 0 .4mmol/LIPTG诱导含pET -2 1a -180 8重组质粒的BL2 1(DE3)大肠杆菌 ,T7·TagAffinityPurifica tionKit纯化菌体上清液 ,SDS -PAGE分析 ,将SDS -PAGE蛋白区带转移至NC膜进行免疫印迹检测。结果 :外源性Tropic 180 8基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白可经T7·TagAffinityPurificationKit进一步纯化 ,纯化后的蛋白为单一条带 ,分子量约为 32 .0kDa ,其免疫印迹反应结果提示该蛋白为Tropic 180 8基因编码的融合蛋白。结论 :在大肠杆菌中表达的融合蛋白可以免疫亲和法进行纯化和鉴定。
- 姚登兵崔学芝王志刚刘炎顾晓松
- 关键词：原核表达融合蛋白免疫印迹亲和层析法基因编码
- 生长相关蛋白在损伤坐骨神经中的表达被引量：2
- 2003年
- 目的 :研究大鼠周围神经损伤与再生过程中生长相关蛋白的表达。方法 :取正常SD大鼠坐骨神经和离断损伤后不同时间近侧端和远侧端神经组织 ,采用Anti GAP 43抗体以WesternBlot方法检测GAP 43的表达变化。结果 :NC膜上 43kDa位置出现阳性反应条带 ,在正常坐骨神经中反应微弱 ,损伤后明显加强 ,随损伤时间延长 ,神经近侧端的反应无明显改变 ,神经远侧端的反应逐渐加强 ,以第 3周为最强 ,之后逐渐减弱。结论 :GAP 43在正常坐骨神经中低表达 ,损伤后近侧端与远侧端表达均增加 ,远侧端的表达增加以第 3周为高峰。
- 崔学芝王志刚顾晓松
- 关键词：生长相关蛋白坐骨神经损伤
- Tropic1808基因的原核表达及其表达产物的生物活性被引量：11
- 2001年
- Tropic180 8基因是新近获得的一个鼠源性的cDNA .Tropic180 8基因开放阅读框架片段通过PCR方法从质粒中扩增后 ,重组入表达载体pET 2 1a中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) .用IPTG诱导目的蛋白的表达 ,SDS PAGE并凝胶图象分析确定目的蛋白表达水平占细菌总蛋白的 14%以上 .表达蛋白在N端融合有 16个氨基酸 ,将表达蛋白电转移至PVDF膜 .氨基酸序列分析表明 ,其N端第 17～ 2 5位氨基酸序列与Tropic180 8基因编码序列一致 .利用融合部分含T7·Tag ,通过亲和层析纯化表达蛋白 ,经Westernblot检测为目的蛋白 ,加入到无血清培养的新生SD大鼠背根神经节 (DRG)中 ,观察到表达蛋白对DRG具有促进存活和促进突起生长的作用 .
- 崔学芝顾晓松张沛云王志刚姚登兵
- 关键词：原核表达氨基酸序列分析背根神经节生物活性神经再生
