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王金萍: 作品数：44 被引量：161H指数：8; 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>; 发文基金：云南省科技攻关计划云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目引进国际先进农业科技计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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禽流感病毒型及亚型特异性免疫酶染色技术的研究: 2008年; 在获得禽流感病毒型及亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立型及亚型特异性免疫酶染色技术,用于检测或鉴定禽流感病毒.优化反应条件,确定单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记二抗的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与病毒分离鉴定比较.结果表明该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床组织样品、鸡胚及细胞培养物中的禽流感病毒.; 金卫华宋建领张文东赵毅王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强; 关键词：禽流感病毒免疫酶染色

蓝舌病病毒人工感染绵羊抗体的监测及分型血清的制备: 2001年; 用由南非蓝舌病国际研究中心引进的8个不同血清型蓝舌病标准病毒,经vero细胞复壮三代,离心纯化,测定毒价后作为免疫原。取16只健康绵羊,分成8组,每组2只,采用这8种不同血清型的细胞毒分别按静脉3ml/只、肘后皮下2ml/只多点注射,5天后按3ml/只自血移植的免疫程序人工感染。采用竞争性酶联免疫吸附试验(C-ELISA)监测感染绵羊的抗体产生水平,制备标准分型血清。监测结果表明,初免后28天,除BTV-19呈弱阳性外,其余7型均呈强阳性,且抗体产生总体呈上升趋势。在此基础上制备出抗BTV的分型血清。; 信爱国向文彬张富强王金萍邹福中; 关键词：蓝舌病 C-ELISA 抗体监测

细胞凋亡的研究近况被引量：3: 2003年; 细胞凋亡是受到包括基因在内的多种因素调节的细胞主动死亡的过程,随着对细胞凋亡研究的深入,人们逐渐认识到细胞凋亡与细胞增殖在致病作用中具有重要的意义。文章简述了细胞凋亡的概念,细胞凋亡的形态改变,细胞凋亡的基因调控,细胞凋亡的生理意义及细胞凋亡与疫病的关系。通过对细胞凋亡的研究,为预防、治疗、诊断某些疾病提供新的理论依据及相应对策。; 宋建领王金萍杨斌; 关键词：细胞凋亡基因调控动物

2013~2016年中国流行性出血病病毒血清型5型的分离与遗传特征分析被引量：11: 2020年; 流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)是一种严重危害反刍动物的虫媒病毒,全世界已发现9种血清型EHDV,长久以来我国EHDV血清型分布、病毒活动规律和病毒遗传特征不明确,对我国的畜牧业进出口和牛羊养殖业构成了潜在威胁。本文首次报道了2013~2016年在云南省与广西壮族自治区设立的哨兵动物中,9株EHDV-5型毒株的分离以及病毒基因节段2、3与6(Seg-2、Seg-3、Seg-6)的序列特征。中国分离的9株EHDV-5型毒株Seg-2,Seg-3与Seg-6及其编码蛋白之间高度保守,核酸与氨基酸序列相似度均大于99%,在系统发生树上聚为紧密的一簇,表明我国云南与广西流行的EHDV-5有着最近的共有祖先。中国与澳大利亚EHDV-5毒株不同基因节段之间也有着较高的序列相似度(>91%),表明两地流行EHDV-5型毒株有着共同的起源。中国毒株的Seg-2与Seg-6在系统发生树上虽与澳大利亚毒株(CSIRO 157)聚为一簇,但最终形成了独立的进化分支,表明中国流行的EHDV-5发生了独立的进化。本研究首先丰富了世界范围内EHDV-5型毒株资源,其次为我国开展EHDV-5病毒的更深入研究提供了宝贵材料和理论数据。; 杨振兴李占鸿吴健敏王金萍肖雷寇美玲朱建波廖德芳李华春杨恒; 关键词：血清型

禽流感病毒M1蛋白表(拟)位定位及免疫检测分析被引量：1: 2012年; 为对禽流感病毒(AIV)M1蛋白表(拟)位进行分析,本研究采用针对AIV M1蛋白的型特异性单克隆抗体(MAb),淘选M13噬菌体展示的7肽随机肽库,进行M1蛋白表(拟)位分析。筛选获得共有序列MDRxL或HPR,定位于M1蛋白93～99位(93MDRAVKL99)和222～230位(222HPNSSAGLR230)氨基酸区域。采用ELISA、竞争性ELISA分析不同噬菌体拟位与抗M1的MAb免疫反应性,表明含有MDRxL或HPR基序的噬菌体拟位能够与MAb发生特异性结合,并且其结合能够被天然病毒抗原抑制或阻断,表明拟位多肽真实模拟病毒蛋白上与MAb结合的抗原决定簇或表位,提示M1蛋白93～99位(93MDRAVKL99)和222～230位(222HPNSSAGLR230)氨基酸区域构成AIV型特异性表位。; 宋建领张富强李华春杨仕标王金萍; 关键词：禽流感单克隆抗体表位

H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与表达被引量：5: 2007年; 根据已知H5N1亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因序列设计、合成克隆引物.自灭活的云南地方H5N1亚型病毒阳性临床组织样品中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestTMDNA Poly-merase)扩增HA基因,采用Invitrogen定向表达系统(ChampionTMpET directional TOPO expression system)进行克隆表达,纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的重组HA,分子质量约78 ku.采用阳性血清经免疫印迹及ELISA分析重组HA的免疫反应性,结果表明重组HA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,具有良好的免疫反应性.; 王金萍宋建领张文东李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强; 关键词：禽流感病毒 H5N1亚型血凝素

禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究被引量：1: 2007年; 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.; 张文东宋建领王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强; 关键词：禽流感病毒

2013—2019年我国流行性出血病病毒血清1型毒株的分离与遗传特征分析被引量：3: 2021年; 【目的】掌握流行性出血病病毒(Epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)血清1型毒株(EHDV-1)在我国南方地区的流行情况及其遗传特征,为开展EHDV-1血清型特异性诊断、流行病学调查和致病性研究提供科学依据。【方法】2013—2019年通过在我国云南、广东和广西设立牛羊虫媒病毒监控点和哨兵牛,定期采集哨兵牛血液样本进行虫媒病毒分离;通过微量中和试验确定EHDV分离株的血清型,然后对EHDV分离株的部分基因节段(Seg-2、Seg-3和Seg-6)进行RT-PCR扩增、双向测序及序列分析,并利用BioEdit计算EHDV基因组各节段核苷酸序列及其推导氨基酸序列的相似性。【结果】2013—2019年从云南、广东及广西的虫媒病毒监控点共分离获得33株EHDV,其中7株为EHDV-1型毒株。分离获得的7株EHDV-1型毒株Seg-2、Seg-3和Seg-6核苷酸序列高度同源,其平均相似性分别为(97.65±1.51)%、(94.87±4.72)%和(97.61±1.41)%,对应的推导氨基酸序列相似性平均为(97.69±1.36)%、(99.49±0.32)%和(97.51±2.47)%。基于Seg-2、Seg-3和Seg-6核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树均显示,不同EHDV-1型毒株可划分为东方(Eastern)和西方(Western)2种地域型,东方地域型毒株分离自中国、日本及澳大利亚,西方地域型毒株主要来源于美洲和非洲。在基于Seg-2核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中,分离获得的7株EHDV-1型毒株归属于西方地域型,且聚类形成一个相对独立的进化分支;在基于Seg-3核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中,分离获得的7株EHDV-1型毒株分属2种地域亚型(Eastern-1和Eastern-2),分别与日本EHDV-1型和EHDV-6型毒株具有最近的亲缘关系;在基于Seg-6核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树中,分离获得的7株EHDV-1型毒株属于东方地域型,与日本EHDV-1型毒株具有较近的亲缘关系。【结论】EHDV-1型毒株已在我国南方地区广泛流行,其Seg-2和Seg-6序; 李卓然吴健敏朱建波王金萍吕敏娜肖雷杨振兴廖德芳李华春杨恒; 关键词：病毒分离

禽流感病毒型及亚型特异性免疫荧光技术的研究被引量：1: 2007年; 在获得禽流感病毒型及亚型特异性单克隆抗体的基础上,建立型及亚型特异性免疫荧光技术,用于检测或鉴定禽流感病毒.优化反应条件,确定单克隆抗体及异硫氰酸荧光黄标记二抗的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与病毒分离鉴定比较.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床组织样品、鸡胚及细胞培养物中的禽流感病毒.; 宋建领张文东王金萍李作生冯子良胡媛媛郭松辉张应国范泉水宋学林邱薇张富强; 关键词：禽流感病毒免疫荧光

鹦鹉源Ⅰ型禽副粘病毒F和HN基因序列测定与分析被引量：3: 2003年; Virion RNA was abstracted from purified type I Avian paramyxovirus strain YN-PA01(isolated from parrot)and used as a template. The fragment containing the fusion gene(F) and hemagglutinin-neuraminidase gene(HN) of the isolate was amplified by RT-PCR and cloned to the pMD18-T Vector. Using primer walking method the complete sequence of F-HN genes was obtained finally.And the respective amino acid sequence was deduced. Through relative software the phylogenetic trees on F gene and HN gene were constructed between strain YN-PA01 and reference strains. The results showed that strain YN-PA01 comparing with reference strains displays 98.7%-83.2% nucleotide homology and 98.1%-86.2% amino acid homology on F gene; 97.4%-79.1% nucleotide homology and 97.2%-83.2% amino acid homology on HN gene. Additional 6 amino acids are encoded by the HN gene ORF of strain YN-PA01 comparing with national reference strains.The studied strain YN-PA01 exhibits highest identities with strain JS/5[O1/Go either analyzed on F gene or HN gene.; 赵文华宋建领朱建波信爱国王金萍李志华张念祖; 关键词：RT-PCR

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