王雅明
- 作品数：35 被引量：186H指数：8
- 供职机构：北京大学肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人uPA鼠源单克隆抗体的制备及其在肿瘤中表达的检测
- 目的:尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase -type plasminogen activator,uPA)是一种丝氨酸蛋白水解酶,存在于正常细胞和肿瘤细胞,它可降解细胞外基质及基底膜,在肿瘤的的发生、发展中起重要...
- 张青云赵桂梅王雅明徐建军
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂单克隆抗体免疫细胞化学肿瘤侵袭
- 文献传递
- 识别9E10单抗的噬菌体短肽的免疫学特性分析被引量：8
- 1997年
- 为分析从单价表达短肽库中筛选到的两种克隆的免疫学特性，将单价噬菌体短肽表达载体中的ｇⅢ片段切除，在大肠杆菌中表达可溶性短肽分子，ＥＬＩＳＡ竞争抑制实验证实，可溶性短肽分子可竞争抑制９Ｅ１０单抗与Ｃ－ｍｙｃ＋肽结合。进一步将噬菌体短肽的单价表达载体改建为多价表达载体，分别免疫兔和小鼠，制备免疫抗血清，ＥＬＩＳＡ实验和竞争抑制实验结果证实，两种克隆的免疫抗血清均可与９Ｅ１０单抗所识别的抗原表位结合，表明这两个克隆尽管在序列上与原自然抗原不同，但其在结构上真正模拟了ｃ－ｍｙｃ＋肽的抗原表位，在体内可诱发相似的免疫反应。
- 李全喜王琰李竟王雅明王雅明王力民徐建军董志伟
- 关键词：噬菌体分子识别
- LAPTM4B新基因在肿瘤细胞中的表达及其免疫学检测技术的建立被引量：2
- 2005年
- 目的利用制备的鼠抗人肝癌相关LAPTM4B蛋白的单克隆抗体,检测LAPTM4B蛋白在不同肿瘤细胞中的表达。方法重组质粒pGEX-KG-LAPTM4B-N1-99经酶切及测序鉴定正确后,1 mmol/L IPTG 37℃诱导获得融合蛋白。利用亲和层析方法纯化抗人LAPTM4B单抗,免疫印迹法进行单抗鉴定,免疫细胞化学染色法检测5种肿瘤细胞中LAPTM4B的表达。结果经western b lot分析抗LAPTM4B单抗可与LAPTM4B-N1-99编码的融合蛋白以及肿瘤细胞中的天然蛋白特异性结合。免疫细胞化学染色(IHC)检测到肝癌、肺癌等5种肿瘤细胞均表达LAPTM4B蛋白。IHC和免疫印迹分析证明了LAPTM4B蛋白在肿瘤细胞中的表达。结论该单抗能特异识别原核及真核细胞表达的LAPTM4B蛋白,为进一步探讨LAPTM4B蛋白的生物学效应提供了条件。
- 彭方毅张青云周柔丽涂植光王雅明徐建军
- 关键词：肝癌单克隆抗体
- 小细胞肺癌标志物-人神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因的分子克隆、抗体制备及其在肿瘤中的表达检测
- 神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specific enolase,NSE)广泛分布于人类及各种动物的成熟神经元、周围神经的神经内分泌细胞和一些感觉细胞中,其对低氧层的神经元有神经营养和保护作用.它在正常人脑组织中含量...
- 张青云朱爱萍王雅明徐建军王力民邓丽娟任颖佳
- 关键词：小细胞肺癌烯醇化酶分子克隆抗体制备杂交瘤技术
- 文献传递
- 人纤溶酶原激活物抑制物1基因克隆表达和单克隆抗体的制备及其初步应用被引量：4
- 2007年
- 目的克隆人纤溶酶原激活物抑制物1(PAI1)基因,制备和鉴定针对人 PAI1的单克隆抗体,以检测 PAI1在乳腺癌中的表达。方法利用逆转录(RT)-PCR 方法从人乳腺癌细胞株MDA231总 RNA 中扩增克隆 PAI1基因,构建其原核表达质粒,并表达 MS2-PAI1融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫 BALB/C 小鼠,常规细胞融合和选择性培养,亚克隆筛选出单克隆细胞株,纯化单克隆抗体。利用蛋白印迹(Wb)、免疫组织化学法检测分析 PAI1在乳腺癌中的表达水平。结果克隆了1209 bp 的 PAI1基因全长片段。经 ELISA 双筛,获得2株能稳定分泌抗 PAI1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类均为 IgG1,且均能特异识别 PAI1,并与其他蛋白无交叉反应。Wb 结果显示,该抗 PAI1单抗与 MS2-PAI1融合蛋白以及细胞中的天然蛋白均能结合。免疫组织化学染色结果显示,该单抗与人乳腺癌细胞株 MDA231和乳腺癌组织结合后,呈阳性反应。结论克隆了人 PAI1基因,通过原核表达产物制备并纯化了针对 PAI1的单克隆抗体。初步检测 PAI1能在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中表达,这为深入研究 PAI1基因功能和检测临床肿瘤组织及体液中的 PAI1奠定了可靠基础。
- 任芳张青云王雅明徐建军
- 关键词：肿瘤
- 多聚腺苷酸信号缺陷病毒捕获宿主序列导致细胞转化
- 2001年
- 目的 :通过人工改变逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,检测病毒转录能否产生病毒 宿主融合转录产物及其是否具有转化细胞的能力 ,探讨病毒致癌的机制。方法 :用分子生物学技术人工定点突变鼠逆转录病毒多聚腺苷酸化信号 ,使之产生多聚腺苷酸缺陷性病毒 ;用该病毒转染大鼠REF 1细胞 ,并用G418筛选抗性细胞。通过Northernblot方法检查通读RNA的表达 ;通过细胞形态和软琼脂集落形成实验检测细胞的转化。结果 :多聚腺苷酸化信号缺陷病毒PS可在CRIP包装细胞形成病毒 ;用该病毒感染大鼠REF 1细胞 ,可捕获下游宿主细胞序列 ;多聚腺苷酸化信号缺陷病毒感染的REF 1混合细胞中的部分细胞可使REF 1细胞集聚能力增强 ,在软琼脂中以集落式生长。结论 :多聚腺苷酸信号缺陷病毒感染REF 1细胞后可通过表达病毒 宿主通读RNA激活下游宿主序列使细胞发生转化 。
- 张青云李振甫王利民王雅明徐建军
- 关键词：逆转录病毒细胞转化病毒
- 胶体金免疫层析技术检测食管癌患者血清中生存素的表达被引量：1
- 2009年
- 目的探讨生存素（survivin）胶体金免疫层析试纸条作为食管癌血清筛选方法的可行性。方法用survivin胶体金免疫层析试纸条检测158例食管癌和146名健康对照者血清标本，并评价其检测性能。结果制备直径20nm的胶体金溶液后，用不同浓度的survivin多抗标记胶体金溶液，确定最佳标记浓度12μg／ml。组装后survivin胶体金免疫层析试纸条检测临床血清标本结果显示，survivin在食管癌患者组中阳性率为51．9％（82／158），在健康对照组阳性率为15．1％（22／146），两组差异有统计学意义（χ^2=45．7，P〈0．05）。survivin阳性率在患者不同年龄组（42～54岁组47．1％，55～68岁组40．9％，69～81岁组63．9％）、不同性别组（男性患者组50．4％，女性患者组58．1％）、不同原发部位组（食管上段组56．3％，中段组46．1％，下段组32．1％）、不同分化程度组（高分化组56．3％，中分化组43．2％，低分化组32．7％）和淋巴结有无转移组（淋巴结转移组43．3％，淋巴结未转移组43．4％）的各组内差异均无统计学意义（χ^2分别为1．11、0．59、2．64、1．63和0．00，P均〉0．05）。survivin胶体金免疫层析试纸条敏感度51．9％（82／158），特异度84．9％（124／146），准确性67．8％（206／304）。结论survivin胶体金免疫层析试纸条操作简单，结果容易判定，可作为食管癌高发人群的筛选方法之一。
- 宋燕张青云王雅明徐建军
- 关键词：生存素试纸条胶体金免疫层析食管癌
- 抗人肝癌相关基因LAPTM4β胞内肽段单克隆抗体的制备与鉴定及其表达的检测
- 2009年
- 目的制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础。方法利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-N1-99,在大肠杆菌中表达融合蛋白GST-LAPTM4β-IC-N1-99。用纯化的蛋白LAPTM4β-IC-N1-99免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体(LAPTM4β-IC-N1-99McAb)。进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测LAPTM4β-IC-N1-99在肿瘤中的表达。结果诱导并纯化了重组GST-LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子质量约为32000;纯化得到LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子量约为10000。筛选出6株能稳定分泌抗LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体的杂交瘤细胞株(D7,B12,H2,H8,A9和A10),D7、H8、A10分泌抗体亚类为IgG1,B12、A9、H2为IgG2b。Western blotting鉴定显示,抗LAPTM4β-IC-N1-99单抗可与融合蛋白及细胞内LAPTM4β蛋白特异性结合,具有高度特异性。免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中LAPTM4β基因的表达。结论以纯化的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白免疫,获得了效价高、特异性好的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白的单克隆抗体,用其可检测到LAPTM4β肿瘤细胞中的表达,这为LAPTM4β蛋白的生物学功能研究奠定了基础。
- 张瑞娟李琦张青云王雅明徐建军赵桂梅
- 关键词：单克隆抗体杂交瘤
- 人神经元特异性烯醇化酶基因克隆及单克隆抗体的制备与鉴定被引量：5
- 2005年
- 目的研究建立克隆人神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因制备鼠抗人NSE单克隆抗体方法。方法用NSE特异引物,通过逆转录多聚酶链式反应从人肺癌细胞株A549中扩增NSE基因,构建重组质粒pGEMTNSE,并测序鉴定NSE基因序列。再将NSE基因定向克隆于原核高效表达载体pMS31b,当表达MS2NSE融合蛋白后,免疫BALB/C小鼠。并用常规杂交瘤技术,制备鼠抗人NSE单克隆抗体(NSEMcAb)。最后,采用免疫细胞化学(ICC)技术检测NSE在肿瘤细胞株中的表达。结果克隆岀全长1305bp的NSE基因,其表达的MS2NSE融合蛋白为57000,表达量142mg/L。获得2株能稳定分泌抗NSE单克隆抗体的杂交瘤细胞株,经检测其分泌抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a。ICC检测证明所得NSEMcAb能检测到肿瘤细胞中NSE的表达。结论成功克隆了NSE基因,并获得鼠抗人NSEMcAb,为深入研究NSE基因的表达提供了有力的工具。
- 朱爱萍张青云王雅明徐建军
- 关键词：NSE单克隆抗体神经元特异性烯醇化酶MS定向克隆克隆人
- 从噬菌体抗体库克隆抗人RBC单链抗体基因被引量：11
- 1998年
- 目的用噬菌体抗体库技术克隆抗人红细胞（ＲＢＣ）的单链抗体（ＳｃＦｖ）基因。方法以人ＲＢＣ免疫小鼠，取脾细胞，ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＶＨ和Ｖκ基因，组装到ＳｃＦｖ－噬菌体抗体表达载体中，构建了噬菌体抗体库，以人ＲＢＣ为固相抗原，对该库进行了四轮“吸附－洗脱－扩增”筛选，获得了抗人ＲＢＣ的ＳｃＦｖ基因。结果ＤＮＡ序列分析表明其可变区基因分别属于小鼠ＶＨⅢ亚群和ＶκⅤ亚群。结论所表达的ＳｃＦｖ可与不同人ＲＢＣ结合，与ＡＢＯ血型抗原无关。
- 王琰王雅明刘群英徐建军李全喜陈宇萍王力民李竞
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体基因人红细胞
