申光茂
- 作品数：28 被引量：23H指数：3
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学环境科学与工程更多>>
- 朱砂叶螨TcGSTM7的体外表达及其功能被引量：2
- 2018年
- 【目的】朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是一种重要的农业害螨,长期化学防治导致其对多种药剂产生了抗性,因此明确该螨对化学药剂的解毒代谢机制对开展有效的抗性治理具有重要意义。谷胱甘肽S-转移酶(GST)是节肢动物主要的解毒代谢酶之一,笔者前期研究中筛选出了朱砂叶螨体内高表达的一条GST基因TcGSTM7,该基因的表达在药剂处理下具有明显的可诱导性。因此,本研究以TcGSTM7为研究对象,进一步利用异源表达技术分析TcGSTM7重组蛋白和甲氰菊酯、丁氟螨酯的互作效应,以及利用RNAi沉默该基因的表达后,检测朱砂叶螨对这两种药剂的敏感性变化,为明确TcGSTM7在药剂代谢中的功能打下基础。【方法】利用NCBI数据库对TcGSTM7编码蛋白的序列特征进行注释,并在SWISS MODEL构建的蛋白三维结构中对相关结构域、结合位点以及活性中心等进行展示。利用异源表达系统在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达TcGSTM7重组蛋白,对重组蛋白进行分离纯化后使用特异性底物检测其GST催化活性,并通过检测杀螨剂对该蛋白活性的抑制效果分析其与甲氰菊酯和丁氟螨酯的互作效应。在此基础上,为明确TcGSTM7基因表达水平对朱砂叶螨药剂敏感性的影响,参照该基因的序列设计并合成特异dsRNA,利用叶碟饲喂法将其导入朱砂叶螨体内,经qPCR检测TcGSTM7表达水平显著下调后,进行生物测定分析基因沉默后朱砂叶螨对不同剂量甲氰菊酯和丁氟螨酯药剂敏感性的变化。【结果】TcGSTM7的氨基酸序列分析结果表明,其N端具有一个Mu家族GST特有的"thioredoxin-like"结构域,以及一个GSH的结合位点(G-site),在C端则具有催化底物结合域(H-site)。该蛋白具有9个α螺旋和4个β折叠结构,呈经典的"βαβαββα"排列方式。在三维结构预测的基础上,通过原核表达技术获得了TcGSTM7重组蛋白,该重组蛋白分子量为26 kD,与预测结�
- 申光茂李恒梁金辉何林
- 关键词：朱砂叶螨谷胱甘肽S-转移酶RNAI
- 朱砂叶螨TcGSTM7基因介导的甲氰菊酯抗性研究
- 朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是棉花、蔬菜等经济作物上最重要的害螨之一.该螨的防治多年来一直以施用化学农药为主，导致其抗药性发展十分迅速.抗性监测数据表明，我国多个地区的朱砂叶螨已对甲氰菊酯...
- 申光茂李恒梁金辉何林
- 关键词：朱砂叶螨GSTRNAI
- 朱砂叶螨取食适应棉花关键基因的筛选
- 棉花是最重要的天然纤维作物,我国是世界上最大的原棉生产和消费国.棉花生产和纺织加工在我国的国民经济中占有举足轻重的地位.朱砂叶螨(Tetranychus cinabarinus)作为一种世界性的害螨,在我国分布广泛,主要...
- 宋长贵徐志峰申光茂何林
- 关键词：朱砂叶螨棉花表达谱
- 朱砂叶螨β-COP和Sro基因鉴定及其沉默致死效果被引量：4
- 2017年
- 【目的】明确朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)β-COP和Sro两条基因分子生物学信息,并基于优化的RNAi体系评价它们的致死效应,为筛选适用于RNAi防控的靶基因打下基础。【方法】首先克隆目的基因的全长,并通过序列的同源比对、保守区域及蛋白结构预测以及系统进化树的构建明确其分子生物学信息;其次通过减少ds RNA降解因素、并适时补充ds RNA等方法改进朱砂叶螨的RNAi体系,从而延长干扰时间。利用定量PCR技术检测特定时间点的沉默效率,评价优化RNAi体系后的沉默效果;最后在沉默目的基因β-COP和Sro后,检测朱砂叶螨在各特定时间点的死亡率,评价目的基因在RNAi下的致死效果,并观察相应的致死表型。【结果】β-COP开放阅读框长度为2 688 bp,编码895 aa,属于"WD40 superfamily"及"Coatomer_WDAD superfamily",包含了"WD 40"和"Coatomar_WDAD"的保守区域。Sro的开放阅读框长度为1 119 bp,编码372 aa,具有典型的短链脱氢酶所特有的两个特征,即与NADP+biding结合位点基序"TGxxx Gx"和"Yxxx K"及其上游的天冬氨酸(Asn)、丝氨酸(Ser)活性位点。优化后的RNAi体系可在96 h内能稳定保持50%左右的沉默效率,使用该方法干扰朱砂叶螨β-COP和Sro两条致死基因48 h后试验组与对照组的死亡率均有显著性差异,用β-COP的ds RNA片段干扰雌成螨108 h后,死亡率达57.4%;用Sro的ds RNA片段干扰若螨96 h后,死亡率达28.8%。死亡个体均具有明显的表型,β-COP试验组死亡表型为4对足蜷缩在体侧;Sro试验组则在静伏期死亡或在蜕皮过程中无法蜕皮而死亡。【结论】优化的朱砂叶螨RNAi技术有稳定持续的沉默效果。β-COP和Sro与RNAi技术相结合,验证了这两条目的基因的沉默可对朱砂叶螨产生一定的致死效应,表明此类基因与技术加成的模式极具开发和利用的潜力,为今后基因功能验证和筛选以及开发以RNAi技术为基础的朱砂叶螨防控方法提�
- 敖已倩云申光茂王梦瑶刘家路潘宇何林
- 关键词：朱砂叶螨RNA干扰技术致死效应
- 朱砂叶螨对丁氟螨酯抗药性筛选及抗性机制研究
- 朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是一种重要的世界性害螨，能够危害多种作物。由于杀螨(虫)剂大量、持续、不科学地使用以及该螨繁殖力强、世代周期短、近亲交配率高、活动范围小、受药机会多的生物学特性...
- 王英赵舒石力徐志峰申光茂何林
- 关键词：朱砂叶螨抗药性解毒酶
- 橘小实蝇羧酸酯酶基因BdCAREB1的克隆及其表达模式解析被引量：5
- 2014年
- 【目的】在克隆获得橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)1条羧酸酯酶基因全长序列的基础上,解析该基因在橘小实蝇不同发育阶段和组织以及经高效氯氰菊酯饲喂后的表达模式。同时结合之前完成的有关橘小实蝇羧酸酯酶生化特性以及增效剂处理研究结果,综合分析橘小实蝇羧酸酯酶对高效氯氰菊酯作用的应激反应,为明确羧酸酯酶对菊酯类杀虫剂的解毒代谢机制奠定基础。【方法】通过同源序列比对的方法,从橘小实蝇转录组数据中筛选出1条羧酸酯酶基因序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增得到该基因的全长cDNA序列;应用生物信息学分析软件对该基因的开放阅读框、编码的氨基酸序列、分子量等信息进行预测,并基于最大似然法构建该基因与其他昆虫相关基因序列的系统发育树,阐明其分子生物学特征。此外,分别提取橘小实蝇不同发育阶段以及3龄幼虫的中肠、脂肪体、马氏管和气管等组织的RNA,在内参基因稳定性评估筛选的基础上,运用qPCR的方法解析该基因在不同发育阶段和组织间以及药剂处理后的表达模式。【结果】从橘小实蝇转录组数据库中筛选出1条长度为1 028 bp的羧酸酯酶基因片段,通过对5′端和3′端进行RACE扩增分别得到长度为1 073和625 bp的目的片段,经序列拼接和验证后,确定该基因全长为1 872 bp,完整开放阅读框1 710 bp,编码569个氨基酸,推测其蛋白质分子量为63.3 kD,理论等电点6.38。该基因经序列比对命名为BdCAREB1,GenBank登录号为KF539980。基于最大似然法构建的系统发育树显示,该基因编码的蛋白质与双翅目昆虫的羧酸酯酶具有高度的同源性。分析其在不同发育阶段的表达模式发现,BdCAREB1在3龄幼虫期的表达量最高,其次为成虫期,而在卵期的表达量最低。在橘小实蝇3龄幼虫不同组织间的定量分析结果表明,BdCAREB1在脂肪体中表达水平最高,
- 申光茂豆威王进军
- 关键词：橘小实蝇羧酸酯酶基因表达脂肪体
- 桔小实蝇酚氧化酶学性质及其与生长发育的关系研究
- 酚氧化酶(Phenoloxidase,PO)是结构复杂的多亚基的含铜氧化还原酶.它广泛存在于动物、植物和微生物等生物体内,与人体的衰老、伤口愈合、果蔬的褐变等有密切关系.作为昆虫体内的一种重要酶类,酚氧化酶在昆虫的变态发...
- 白平平陈二虎申光茂魏丹丹王进军
- 关键词：桔小实蝇酚氧化酶曲酸生长发育
- 桔小实蝇消化和解毒代谢相关基因鉴定及其对药剂胁迫的应激反应
- 昆虫通过消化代谢从食物中吸收营养物质,为自身的生长、发育和生殖提供必要的能量,同时通过解毒代谢抵御在取食和活动中接触到的外源毒素对自身的不利影响,这是昆虫体内两条非常重要的代谢通路。而由于此前相关分子生物学信息的不足,关...
- 申光茂
- 关键词：桔小实蝇中肠转录组
- 文献传递
- 朱砂叶螨γ-氨基丁酸和抑制性谷氨酸氯离子通道基因克隆及表达模式研究
- γ-氨基丁酸氯离子通道(GABACls)和抑制性谷氨酸氯离子通道(IGluCls)是目前许多全球畅销的杀虫剂和驱虫药物的作用靶标,如环戊二烯、苯基吡唑及阿维菌素类药剂.其中阿维菌素有着良好的杀螨活性,近年来被广泛用于农业...
- 徐志峰程功石力申光茂何林
- 关键词：朱砂叶螨定量PCR
- 朱砂叶螨对丁氟螨酯抗药性筛选及抗性机制研究
- 朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus)是一种重要的世界性害螨,能够危害多种作物.由于杀螨(虫)剂大量、持续、不科学地使用以及该螨繁殖力强、世代周期短、近亲交配率高、活动范围小、受药机会多的生物学特性...
- 王英赵舒石力徐志峰申光茂何林
- 关键词：朱砂叶螨抗药性解毒酶
