秦小江 作品数:54 被引量:95 H指数:6 供职机构: 山西医科大学公共卫生学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 博士科研启动基金 山西省青年科技研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 化学工程 更多>>
槲皮素舒张大鼠离体肾动脉及其与L-型电压依赖性钙通道和蛋白激酶C的关系 2017年 为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)L-型电压依赖性钙通道(L-type voltage-gated Ca^(2+) channels,LVGC)电流。实验结果显示,槲皮素能够舒张60 mmol/L KCl或1×10^(-5) mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的大鼠肾动脉,其最大舒张百分比分别为(84.53±7.35)%和(76.42±4.63)%;血管内皮完整组和去内皮组肾动脉相比,槲皮素对预收缩肾动脉的最大舒张百分比没有显著性差异;预孵育PKC特异性抑制剂C6303可使槲皮素对肾动脉的最大舒张幅度降低,与未孵育C6303组相比具有统计学差异(P<0.05);离体大鼠肾动脉VSMC的正常LVGC尖峰电流密度为(23.17±1.33)pA/pF,10μmol/L槲皮素可以降低其电流密度到(10.46±1.35)pA/pF,其抑制百分比为54.86%,1μmol/L C6303可部分逆转槲皮素对LVGC电流的降低幅度,其抑制百分比为62.08%(P<0.05)。上述实验结果提示,槲皮素可舒张大鼠离体肾动脉,该作用具有浓度依赖性且不受内皮影响,可能与抑制LVGC和激活PKC有关。 侯晓敏 张明升 秦小江关键词:槲皮素 肾动脉 舒张 蛋白激酶C VSMC-Cx43^(-/-)条件性基因敲除小鼠模型的构建及基因型鉴定 2022年 目的应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统构建血管平滑肌缝隙连接蛋白Cx43条件性基因敲除小鼠(VSMC-Cx43^(-/-))模型。方法采用受精卵同源重组的方式,对Gja1基因进行flox修饰。通过体外转录的方式,获得Cas9 mRNA和gRNA;通过In-Fusion cloning的方法构建同源重组载体,该载体包含3.0 kb 5’同源臂、1.9 kb的flox区域和3.0 kb 3’同源臂。将Cas9 mRNA、gRNA和donor vector显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中,获得F0代小鼠。PCR扩增及测序鉴定阳性的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得3只阳性F1代小鼠(Cx43^(flox/+))。将获得的flox杂合子Cx43^(flox/+)小鼠自交,获得flox纯合子Cx43^(flox/flox)小鼠。然后用Cx43^(flox/flox)小鼠和Myh11-CreERT2小鼠交配,最终获得flox纯合且Cre阳性的实验组小鼠(该小鼠简写为:VSMC-Cx43^(-/-))和flox纯合且Cre阴性的对照组小鼠(Cx43^(flox/flox))。用PCR进行基因型鉴定,用Western blot技术检测Cx43在大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功。结果基因型鉴定、免疫荧光和Western blot检测结果表明VSMC-Cx43^(-/-)基因敲除小鼠模型构建成功,小鼠一般性状无改变,小鼠大脑中动脉、冠脉、肺动脉和肾动脉组织中Cx43蛋白表达均下降。因此,可作为长期稳定模型研究血管平滑肌Cx43的功能。结论应用CRISPR-Cas9技术和LoxP-Cre系统成功构建了VSMC-Cx43^(-/-)基因敲除小鼠模型,为深入研究Cx43在血管疾病中的作用提供工具。 秦小江 侯晓敏 许欣荣 柴丽娜 杨晓宇 赵良渊 杜旭峰 施熠炜关键词:基因敲除小鼠 基因型鉴定 蛋白激酶C对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及蛋白表达的影响 2022年 目的探讨经典型蛋白激酶C(PKC)对低氧诱导的小鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)表达的影响。方法利用Dynal MPC-1磁分离器分离含铁粉的远端肺小动脉,原代培养并鉴定肺动脉平滑肌细胞。应用PKC激动剂(PMA)、PKCα抑制剂(safingol)、PKCβⅠ抑制剂(Go6976)、PKCβⅡ抑制剂(LY333531)分别干预细胞。在常氧和低氧条件下,采用免疫印迹法观察cPKC亚型蛋白表达变化以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。应用PKCα、PKCβ的慢病毒载体,通过病毒转染技术特异性敲减目标基因活性,采用免疫印迹法观察低氧诱导小鼠PASMC中cPKC亚型蛋白表达变化,以及ERK1/2、Akt磷酸化水平变化。结果采用Brdu法,检测到用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ时,低氧诱导的PASMC增殖能力受到明显抑制,与低氧对照组相比,Brdu阳性细胞率分别为(7.35±0.26)%vs(11.28±0.43)%,(3.76±0.25)%vs(7.98±0.28)%和(4.12±0.46)%vs(7.78±0.53)%;且PMA在常氧条件下可显著促进PASMC的增殖能力,与常氧对照组相比,Brdu阳性细胞率分别为(9.65±0.47)%vs(6.34±0.52)%,(9.34±0.38)%vs(5.42±0.21)%和(7.78±0.53)%vs(4.12±0.46)%;此外经过PKCα、PKCβ的慢病毒载体转染细胞后,也发现低氧转染组的PASMC增殖能力较空载对照组显著下降,Brdu阳性细胞率分别为(3.58±0.54)%vs(5.97±0.63)%。用safingol、Go6976、LY333531分别抑制cPKCα、βⅠ和βⅡ表达后,低氧诱导的PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平较对照组显著降低,使用safingol之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.56±0.07 vs 1.08±0.13和0.49±0.04 vs 0.97±0.08,使用Go6976之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.41±0.09 vs 0.79±0.10和0.48±0.09 vs 0.82±0.16,使用LY333531之后,ERK1/2、Akt的磷酸化水平分别为:0.42±0.03 vs 0.87±0.06和0.34±0.07 vs 0.78±0.05;PMA可使常氧条件下PASMC中ERK1/2、Akt的磷酸化水平增高,分� 施熠炜 秦小江 曾超 张新日关键词:增殖 低氧 蛋白激酶C 某医学院校预防医学专业环境卫生学试卷分析及评价 被引量:3 2019年 本文通过对环境卫生学期末考试试卷的信度、难度、区分度及学生成绩进行分析,评价试卷质量并分析学生对知识的掌握情况。本试卷客观题信度为0.82,主观题信度为0.68,难度为0.575,区分度为0.375,试卷信度、区分度较好,但多选题、简答题偏难。学生及格率为50.63%,今后应适当降低试题难度。 梁瑞峰 原福胜 张志红 白剑英 张红梅 杨守林 秦小江 夏娜 刘海芳关键词:环境卫生学 试卷分析 教学质量 高盐饮食上调跨膜蛋白16A致C57BL/6J小鼠脑动脉重构的机制 被引量:1 2023年 目的探讨高盐上调跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)致小鼠脑动脉重构的机制。方法40只C57BL/6J小鼠随机分为4组(10只/组,模型制备8周),空白对照组(正常饮水、摄食)、低盐组(2%高盐饲料)、中盐组(4%高盐饲料)和高盐组(8%高盐饲料)。HE染色观察脑动脉形态学变化;血管渗透性实验比较脑组织颜色及吸光度值;免疫荧光检测脑动脉TMEM16A的表达;PCR和Western blot检测脑动脉TMEM16A的mRNA和蛋白表达;离体肌张力检测脑动脉舒缩反应;膜片钳记录脑动脉平滑肌细胞钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCC)电流。结果与空白对照组相比,2%、4%和8%高盐饮食可浓度依赖性引起脑动脉管壁逐渐增厚、管腔狭窄;注射埃文斯兰后,4%和8%高盐组脑组织逐渐变蓝,且吸光度值明显增加;2%、4%和8%高盐组脑动脉对60 mmol·L^(-1) KCl的收缩反应逐渐增强,对10-5 mol·L^(-1)乙酰胆碱的舒张反应逐渐减弱;TMEM16A阻断剂可抑制脑动脉对60 mmol·L^(-1)KCl的收缩反应;高盐组脑动脉TMEM16A不仅荧光表达逐渐增强,且mRNA和蛋白表达逐渐增多,脑动脉平滑肌细胞的CaCC电流逐渐增大。结论高盐可致C57BL/6J小鼠脑动脉重构,其机制与上调TMEM16A表达和/功能有关。 侯晓敏 施熠炜 孙琳 赵旭 郑志发 常铭洋 张明升 秦小江关键词:高盐饮食 脑动脉 血管重构 肌张力 防损伤防偏移血管支撑装置 本实用新型为一种防损伤防偏移血管支撑装置,包括导管和金属网状支架,导管上设置有气囊段,金属网状支架套装于导管上并且覆盖在气囊段上,金属网状支架的表面设置有壳聚糖层,且壳聚糖层的表面形成有若干凸起的吸盘片。本实用新型装置中... 侯晓敏 秦小江文献传递 生物样本血液中苯系物的测定方法 本发明为一种生物样本血液中苯系物的测定方法,即通过吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定血液中6种苯系物含量的方法。本发明对吹扫捕集实验条件进行优化,使血液中的6种苯系物富集和解析,然后用气相色谱/质谱联用和以同位素内... 秦小江 侯晓敏 聂继盛 张坤 张红梅文献传递 有利于提神醒脑的抗疲劳中药合剂及其制备方法 本发明为一种有利于提神醒脑的抗疲劳中药合剂,主要由一定配比的红景天、党参、灵芝、黄芪、白术、麦冬、五味子、肉苁蓉、鳖甲、山药、人参和银杏制备而成。本发明合剂是以调节人体生理功能或以补充营养素为目的的非传统药剂,可以广泛地... 秦小江 侯晓敏 武宵瑜文献传递 白杨素对大鼠离体肾动脉的舒张作用 被引量:5 2014年 目的研究白杨素对大鼠离体肾动脉的舒张作用及其机制是否涉及抑制肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙通道。方法利用微血管张力记录仪(DMT)观察白杨素对预收缩大鼠肾动脉血管环的肌源性反应;利用全细胞膜片钳电生理学实验方法,观察白杨素对大鼠离体肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流的作用。结果 1白杨素浓度依赖性的舒张60 mmol/L KCl或10-5 mol/L去氧肾上腺素(PE)预收缩的大鼠肾动脉血管环,其最大舒张幅度分别为88.99%和67.47%,RC50值分别为26.25μmol/L和51.68μmol/L。2白杨素(浓度为RC50值)可抑制大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流,使其I-V曲线非平行上移;给予0 mV单电压刺激时,白杨素(浓度为RC50值)使大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流值降低45.43%。结论 1白杨素浓度依赖性舒张60 mmol/L KCl或10-5 mol/L PE预收缩的大鼠肾动脉血管环;2白杨素抑制大鼠肾动脉血管平滑肌细胞L-型电压依赖性钙电流,使其I-V曲线非平行上移。 秦小江 侯晓敏 梁泰刚关键词:肾动脉 白杨素 血液中6种苯系物吹扫捕集/气相色谱/同位素内标质谱串联法测定 被引量:4 2018年 目的建立吹扫捕集/气相色谱/质谱联用技术同时测定生物样本血液中6种苯系物含量的方法。方法优化吹扫捕集实验条件,富集和解析血液中6种苯系物,然后用气相色谱质谱联用方法,以同位素内标法选择特征离子对6种苯系物进行定性和定量分析。结果通过优化吹扫捕集参数,实现了血液中苯、甲苯、乙苯、间/对二甲苯、邻二甲苯6种苯系物的同时富集、解析和准确测定;本方法检出限为0.002~0.011μg/L,线性范围为0.043~10.99μg/L;低、高浓度加标回收率分别为72.78%~81.03%、82.27%~109.09%;对同一样品重复进行6次分析,相对标准偏差(RSD)为3.47%~7.36%。结论本研究所建立方法操作简便、周期短、分离度好,准确度和精密度均能满足分析测试要求,适用于生物样本血液中6种苯系物同时检测分析。 秦小江 侯晓敏 张坤 郭舒岗 聂继胜关键词:苯系物 血液