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胡广宏: 作品数：14 被引量：30H指数：4; 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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轮状病毒基因重配株LD_9(G_2型)Vero细胞适应株的选育及其生物学特性被引量：3: 2010年; 目的探讨轮状病毒基因重配株LD(9G2型)在Vero细胞上的传代适应性,选育高滴度的适应株。方法将3个轮状病毒基因重配株LD9克隆株(G2型)(LD9-1、LD9-2、LD9-3)在Vero细胞上分别以0.05、0.10、0.15和0.20MOI传代,选育出1株Vero细胞适应株,并确定其最适MOI,然后在Vero细胞上连续传代15代,检测病毒滴度及基因组核酸带型,采用nestRT-PCR法扩增其VP7基因。取第8、10、13代适应株病毒,以0.10MOI接种于Vero细胞,观察病毒的增殖动态。结果选育出的LD9-2株以0.10MOI接种Vero细胞可产生明显的细胞病变(CPE),病毒滴度随传代次数的增加先下降后升高,至4代时最低,9代后稳定于6.75lgCCID50/ml左右;连续传代15次,病毒基因组核酸带型均与原始毒株一致,且均能扩增出502bp的VP7基因。LD9-2株病毒增殖高峰期均出现在第7～8天,病毒滴度为6.00～7.00lgCCID50/ml。结论轮状病毒基因重配株LD9株(G2型)经Vero细胞适应性培养,获得了病毒表达量高且能稳定传代的疫苗候选株。; 寇桂英胡广宏包红王名强陈汉泉汪洲周旭; 关键词：轮状病毒疫苗 VERO细胞生物学特性

流行性感冒灭活疫苗人体免疫效果及评价被引量：3: 2001年; 通过对兰州生物制品研究所试生产的流行性感冒灭活疫苗的人体试验研究。兰州所流感灭活疫苗接种后 ,所有接种对象均未见红肿、硬结等局部反应 ,仅有 1例发生在儿童组的低热全身反应 (体温 37 4℃ ) ,72小时后恢复正常 ,整体副反应发生率 0 2 74% ,肯定了该疫苗的安全性。疫苗接种前后易感人群血清血凝抑制 (HI)抗体阳转率 10 0 %。非易感人群HI抗体几何平均效价 (GMT)增长 19～ 6 0倍 ;抗体 4倍增长率最低为 95 % ,成人组平均值最高 (97 6 7% )。证实该疫苗具有较好的免疫原性。; 赵秦靳毅余黎包红胡广宏安红李益民方捍华李薇; 关键词：流行性感冒灭活疫苗抗体

流行性感冒裂解疫苗的研制被引量：5: 2002年; 作为换代产品 ,流行性感冒裂解疫苗的研制已取得突破性进展。根据WHO有关规程的规定和大量的试验研究结果 ,完整建立了该疫苗的生产工艺和生产质量控制系统 ,完成了“流行性感冒裂解疫苗制造及检定规程”等规定性文件的起草和审核工作 ,以中试规模连续生产了三批疫苗并全部自检合格。通过疫苗稳定性试验、效力试验、异常毒性试验及过敏性试验等观察。; 赵秦余黎周旭靳毅包红胡广宏; 关键词：流行性感冒裂解疫苗

兰州地区宫颈癌组织标本中HPV16感染情况的初步分析被引量：1: 2005年; 人乳头瘤病毒的感染与宫颈癌有密切关系。通过兰州地区宫颈癌患者的HPV感染情况的分析对HPV16与宫颈癌之间的关系进行了研究。采用套式PCR方法,以HPV DNA的早期基因E6,E7和结构基因L1为扩增目的基因,对13份兰州地区宫颈癌组织进行扩增,将扩增阳性片段测序,并与HPV16标准序列进行比较,13份组织中有12份扩增到了HPV的目的基因。证实了HPV与宫颈癌有密切关系。; 余黎周旭胡广宏刘鹏; 关键词：HPV 宫颈癌

复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒被引量：5: 2015年; 目的采用复合模式介质Capto core 700纯化轮状病毒(rotavirus,RV),去除培养液中的残余细胞宿主蛋白和DNA,提高病毒收率。方法将RV LH9毒种接种Vero细胞,制备RV原液,澄清、超滤后,用Capto core 700纯化:样品LH9、LH9+150 mmol/L Na Cl[以缓冲液A(20 mmol/L PB+150 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化分别标记为A、B组合,样品LH9+300 mmol/L Na Cl[以缓冲液B(20mmol/L PB+300 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为C组合,样品LH9+450 mmol/L Na Cl[以缓冲液C(20 mmol/L PB+450 mmol/L Na Cl,p H 7.0)作为缓冲液]上样纯化标记为D组合,洗脱,收集流穿峰,检测纯化后病毒的滴度和收率、RV RNA、RV抗原性、残余宿主细胞蛋白(HCP)和DNA;并用初步筛选出的纯化组合纯化3批RV超滤浓缩液,检测各项指标,进行进一步验证。结果用20 mmol/L PB+150 mmol/L Na CL缓冲体系和样品中加入150 mmol/L Na Cl的组合纯化RV,病毒收率在80%以上,病毒核酸完整,其抗原性未发生改变,可去除94%以上的HCP,残余DNA符合《中国药典》三部(2010版)标准。结论 Capto core 700纯化RV收率和残余蛋白去除效率均较高,组合B操作相对简便,工艺时间短,病毒收率高,更适于RV的纯化。; 姜英韩平胡广宏王名强包红汪洲周旭; 关键词：CORE 纯化轮状病毒

SYBR-Green实时定量PCR用于Vero宿主细胞DNA残留量的检测被引量：3: 2012年; 目的:建立基于SYBR-Green荧光染料实时定量PCR检测Vero宿主细胞DNA残留量的方法。方法:提取Vero细胞基因组DNA,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr(HindIII)-1基因片段的特异性引物,通过PCR扩增AGMr(HindIII)-1序列中一段特异性cDNA片段,克隆至pGEM-T Vector,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T/AGMr(HindIII)-1-S。结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0.03 fg.μL-1和0.03 pg.μL-1。结论:SYBR-Green实时定量PCR可用于Vero宿主细胞DNA残留量的准确定量。; 胡广宏寇桂英包红余黎周旭; 关键词：VERO细胞重组质粒残余DNA

流行性感冒裂解疫苗临床免疫效果观察被引量：7: 2006年; 兰州生物制品研究所研制的流行性感冒病毒裂解疫苗于2003年9月-12月在广西进行Ⅰ～Ⅲ临床试验，对疫苗的安全性和免疫原性进行考核评价。试验中随机选取852人（6月龄-67岁）接种试验疫苗，227人接种对照疫苗。6—36月龄的婴幼儿接种2针，每次0．25ml，间隔28天；成人接种0．5ml。所有接种对象均未见红肿和硬结等局部反应；发生低热反应（37.1℃-37．5℃）率为3．5％，均于48小时内恢复正常。疫苗接种后易感人群的HI抗体总阳转率为100％，非易感人群的HI抗体几何平均效价增长7．1—16．8倍，抗体4倍增长率为73．1％-91．7％。证实该疫苗具有良好的安全性和免疫原性。; 包红余黎胡广宏安红陈汉泉周旭方捍华刘淑贞李长贵; 关键词：流行性感冒裂解疫苗免疫效果

TaqMan~实时定量RT-PCR检测G3型轮状病毒VP7基因方法的建立被引量：4: 2012年; 目的:建立一种检测G3型轮状病毒VP7基因的TaqMan实时定量RT-PCR方法。方法:设计轮状病毒VP7基因型特异性引物和探针,采用体外转录RNA为标准品,建立TaqMan实时定量RT-PCR方法。结果与结论:本检测方法快速、灵敏且重复性好,可以对107～101copies.μL-1轮状病毒VP7基因进行有效检测,为G3型轮状病毒的检测和定量提供了有用的工具。; 王云瑾余黎胡广宏陈继军周旭; 关键词：轮状病毒实时定量PCR 体外转录

轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上的适应性培养及免疫原性分析: 2012年; 目的:研究轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上的适应性及其免疫原性。方法:将轮状病毒基因重配株Ls(G3型)在Vero细胞上连续传代20代,进行适应培养,通过RNA-PAGE、PCR、核酸电泳、病毒滴度及小鼠免疫试验鉴定其遗传稳定性和免疫原性。结果:筛选出1株Vero细胞适应株(Ls)。该毒株在Vero细胞上稳定传代20代,具有遗传稳定性,且自第5代后病毒滴度均稳定在7.0 lgTCID50.mL-1以上。动物免疫结果表明,Vero细胞适应株Ls诱导小鼠产生高滴度的血清抗体。结论:Ls株可在Vero细胞上稳定增殖,具有遗传稳定性和良好的免疫原性。; 安红崔保峰余黎胡广宏陈汉泉王名强韩平周旭; 关键词：轮状病毒 VERO细胞免疫原性

流行性感冒灭活疫苗的研制被引量：1: 1998年; 将流感病毒接种于鸡胚尿囊腔培养，收集鸡胚尿囊液及羊水，经甲醛灭活后，采用蔗糖速率区带超离心的方法进行提纯经脱糖、紫外照射后，按照《ＷＨＯ生物制品规程》的要求，试制出含有Ａ１型。; 靳毅赵秦余黎李益民史晋芳包红胡广宏白植生; 关键词：流感病毒灭活疫苗提纯

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