范玮
- 作品数：5 被引量：119H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划农业部重点科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程农业科学更多>>
- 核苷酸切除修复基因XPA反义RNA增强肺癌细胞对顺铂的敏感性被引量：7
- 2005年
- 背景与目的:目前认为,肿瘤细胞自身核苷酸切除修复(nucleotideexcisionrepair,NER)能力增强是肿瘤细胞产生耐药性最重要的机制之一。着色性干皮病A(xerodermapigmentosungroupA,XPA)基因在核苷酸切除修复早期发挥核心作用。本研究拟探讨XPA基因表达与肺癌细胞株对顺铂敏感性的关系。方法:将XPA的反义RNA稳定转染人肺癌细胞株A549,用有限稀释法筛选阳性细胞克隆。分别用Northernblot和Westernblot法检测阳性细胞克隆XPAmRNA和蛋白水平;MTT法检测肿瘤细胞对顺铂敏感性;宿主细胞再活化反应(hostcellreactivation,HCR)检测肿瘤细胞DNA损伤修复能力。结果:筛选得到6个阳性克隆AS1～AS6,其中AS3～AS6细胞克隆的XPAmRNA和蛋白水平均明显降低。剂量依赖实验表明,顺铂对A549细胞与AS1～AS6细胞克隆的半数抑制浓度(IC50)分别为8.1、7.6、4.7、3.2、1.9、2.8、4.1滋g/ml。统计学分析表明,与A549细胞相比,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性明显增强(F=9.75、9.14、7.39、8.91,P=0.005、0.006、0.012、0.006),而且XPAmRNA表达水平与细胞IC50值呈显著相关(r=0.927,P=0.003)。处理24、48、72h后,AS3～AS6细胞对顺铂的敏感性同样显著增强。HCR实验结果表明,AS3～AS6细胞的NER能力显著减弱,而且XPAmRNA表达水平与细胞NER能力呈?
- 范玮张海龙吴晓明
- 关键词：顺铂肺癌细胞敏感性反义RNA核苷酸切除修复
- 人类可溶性TNFRⅠ-GFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析被引量：1
- 2003年
- 目的 构建并表达 hs TNFR (hum an soluble tum or necrosis factorreceptor ) - GFP(green fluorescence pro-tein) - p ET2 8a融合蛋白 ,用以检测跨膜型 TNF- α(m TNF- α)。方法 用 PCR从 GFP- p KEN重组质粒中扩增 GFP的 c D-NA,将其插入 hs TNFR - p ET2 8a重组质粒中 hs TNFR 基因片段的下游 ,获得 hs TNFR - GFP- p ET2 8a重组体。转化大肠杆菌 BL- 2 1,用 IPTG诱导重组蛋白表达 ,经镍金属螯合层析柱纯化。用 MTT法检测重组融合蛋白对 s TNF- α细胞毒效应的抑制活性 ,并用重组融合蛋白直接对转染 TNF基因细胞表面的 m TNF- α进行定性检测。结果 hs TNFR -GFP重组融合蛋白可明显抑制 s TNF- α细胞毒效应 ,且呈剂量依赖性 ;该融合蛋白不但可与 NIH3T3细胞膜上鼠源性m TNF- α结合 ,而且也可与转基因 NIH3T3细胞表面人 m TNF- α结合。结论 hs TNFR - GFP重组融合蛋白具有 TN-FR的生物学活性 ,同时保留 GFP的发光特性 ,可用来检测细胞表达 m TNF-
- 范玮李卓娅龚非力姜晓丹冯玮
- 关键词：绿色荧光蛋白重组融合蛋白
- 固定化硝化细菌去除养殖废水中氨氮的研究被引量：94
- 2002年
- 用硝化细菌富集培养基摇床驯化污泥 ,选用聚乙烯醇 (PVA)作为包埋载体 ,添加适量粉末活性炭包埋固定化硝化污泥 ,制备固定化小球 ,驯化后处理废水中 NH+4 - N。结果表明 :经 6周驯化后 ,硝化细菌从最初的 13个 / ml增至 2 .7× 10 7个 / m l;混凝沉淀处理可显著降低养殖的化学需氧量 (COD) ,但对 NH+4 - N无影响 ;应用固定化小球结合混凝沉淀处理合成废水 (COD=2 2 1m g/ L,NH+4 - N=40 mg/ L) 2 4h,COD去除率为 86 .4%,NH+4 - N去除率达 99.0 %;处理养殖废水 (COD=2 43mg/ L ,NH+4 - N=45 mg/ L ) 2 4h,COD去除率为 74.9%,NH+4 - N去除率达 82 .5 %。
- 黄正范玮李谷刘红艳
- 关键词：固定化硝化细菌养殖废水氨氮
- 养殖水体氨氮去除的固定化微生物技术被引量：21
- 2001年
- 应用固定化技术 ,将富集培养的硝化活性污泥制成固定化小球 ,对固定化小球在不同条件下其硝化活性的影响进行了研究 ;同时 ,采用摇瓶试验比较了固定化小球和悬浮硝化活性污泥对养鳖污水氨氮的处理效果。结果表明 ,固定化小球具有明显抗不利因素的能力 ,降解氨氮的效率稳定 ,对养殖污水氨氮的生物处理具有一定的效果。
- 李谷黄正龙华范玮刘红艳
- 关键词：集约化水产养殖氨氮去除率固定化微生物养殖水体
- 核苷酸切除修复基因XPA反义RNA表达载体的构建及其抑瘤功能被引量：3
- 2003年
- 采用RT PCR方法扩增出 4 2 6bp着色性干皮病A(xerodermapigmentosumgroupA ,XPA)cDNA片段 (2～ 4 2 7bp) ,反向插入pcDNA3 1质粒构建XPA反义RNA表达载体 .经测序证实 ,该片段序列与XPAmRNA对应片段完全互补 .通过脂质体Lipofectamine 2 0 0 0将重组质粒转染肺癌A5 4 9细胞 ,RT PCR检测表明转染XPA反义RNA重组质粒能够抑制肺癌细胞XPAmRNA表达 ;MTT实验表明转染XPA反义RNA的肺癌细胞对顺铂敏感性增强 .
- 吴晓明范玮蒋易周李承郝巧玲周宜开
- 关键词：核苷酸切除修复DNA损伤基因功能反义RNA
