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鸡白痢沙门氏菌基因组文库的构建及其必需基因的筛选: 鸡白痢沙门氏菌是肠杆菌科沙门氏菌属的成员，对禽类具有高度的适应性和专嗜性，是目前危害世界养鸡业的病原之一。近年来，鸡白痢沙门氏菌的耐药性逐渐增强，急需开发安全、高效、种属特异的抗菌药物。　　必需基因是维持一个细胞的生...; 袁海霞; 关键词：基因文库必需基因鸡白痢沙门氏菌; 文献传递

鸽圆环病毒研究进展被引量：6: 2011年; 鸽圆环病毒(pigeon circovirus,PiCV)是20世纪90年代初发现的一种新的主要影响青年鸽的传染性病原,可引起免疫抑制,导致鸽子生病或死亡,从而给鸽的饲养带来巨大损失。因此,了解该病毒的特性、基因组结构、致病机理、诊断方法至关重要。文章针对这几个方面对鸽圆环病毒作了概述,以便更好地了解该病毒,减轻其对养鸽业造成的危害。; 栗文文袁海霞徐雅萍林蕾余旭平; 关键词：病毒特征致病机理基因组结构

猪细小病毒分子生物学研究进展被引量：3: 2011年; 猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一,研究发现该病毒在进化史上相对保守,对宿主专一性高,但近年来相继发现的PPV2和PPV香港株(Porcine HoKovirus,PHoV)与PPV差异较大,对PPV、PPV2和PHoV的基因组结构、分子进化研究、复制培养现状及其蛋白表达方面研究进行了简单综述,为猪细小病毒多样性研究提供参考。; 王芳袁海霞傅衍; 关键词：猪细小病毒分子生物学多样性

一种温敏复制缺陷T载体的构建及在鸡白痢沙门氏菌基因敲除中的应用被引量：2: 2012年; 基因敲除是基因功能研究的重要手段,载体是基因敲除的工具和核心。为获得有效的基因敲除载体以快速构建基因突变株及鉴定相应基因的必需性,在已有温敏复制缺陷pIDM1质粒的基础上,于EcoRⅠ和PstⅠ位点间插入串联的XcmⅠ酶切位点接头,构建了pIDM-T质粒;该质粒经XcmⅠ酶切可获得末端突出T的线性化pIDM-T载体。在验证了pIDM-T质粒复制的温敏特性基础上,应用构建的T载体克隆鸡白痢沙门氏菌CVCC527菌株的eno和ybdr两个基因,鉴定获得pIDM-T_eno和pIDM-T_ybdr两个重组质粒;将重组质粒转化527菌株,经IPC(Integration rate per cell)值计算,鉴定eno为必需基因,ybdr为非必需基因。挑取非必需ybdr基因527菌株重组菌(SalΔybdr),经PCR和测序,确认突变菌株重组位点的正确性。pIDM-T载体可快速克隆PCR产物,用于沙门氏菌的基因敲除及必需性鉴定,为沙门氏菌基因功能研究提供了一种有效快速的手段。; 郭春林蕾任妮妮姜轲冉袁海霞余旭平; 关键词：基因敲除

鹅圆环病毒竞争PCR检测方法的建立被引量：3: 2013年; 建立了基层临床定量检测鹅圆环病毒DNA的竞争PCR方法。以含有鹅圆环病毒(GoCV)全长基因组的pMDT-GoCV-yk01质粒为模板,PCR扩增出长度为625 bp的片段,克隆到pGEM-T Easy载体,获得目标模板,命名为pGoCV625-T;同时,构建与目标模板DNA有相同引物结合区、扩增片段长度为300 bp的竞争模板,克隆于pMD18-T,获得竞争模板,命名为pGoCV300-T。用定量竞争模板pGoCV300-T与系列倍比稀释的定量目标模板pGoCV625-T进行竞争PCR扩增,利用二者PCR产物的荧光强度(IOD)比值与目标模板浓度对数值间的关联性建立标准竞争曲线,推算出直线回归方程,建立GoCV竞争PCR方法。结果表明,竞争模板与目标模板共扩增的最低检测限为1.0μl1.0×104拷贝。初步应用试验结果表明,该方法可定量检测GoCV阳性鹅法氏囊组织中的GoCV DNA。; 林蕾袁海霞田敬郭婧刘晓宁孙红霞余旭平

鹅圆环病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7: 2010年; 为建立鹅圆环病毒(GoCV)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的GoCV全长基因组序列,在其保守基因区设计并合成1对引物,采用荧光嵌合法(SYBR GreenⅠ)建立检测GoCV的实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法。以本实验室构建的含有GoCV永康株(GoCV-yk01)全长基因组的重组质粒为标准模板,经退火温度、循环次数等反应条件的优化,绘制GoCV real-time PCR的标准曲线,并进行融解曲线分析。试验结果表明:建立的GoCV real-time PCR方法特异性强,检测范围广(Ct值范围12～32),最低检出病毒拷贝数为1.46×102。该方法能够对组织中病毒进行定量检测,为快速检测GoCV提供了有效的技术手段。; 田敬郭婧孙红霞袁海霞陈维虎余旭平; 关键词：实时荧光定量PCR

鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验被引量：4: 2012年; 设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT-2GoCV。EcoRⅠ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂质体混合转染GoCV阴性鹅胚和雏鹅,常规PCR检测发现GoCV在转染鹅体内增殖,鹅胚转染组于孵出第2周和第4周检出血清阳性,且其中一个个体于4周龄扑杀时检出法氏囊阳性,雏鹅转染组于转染后2周检出血清阳性。试验进一步对扩增片段进行了BamHⅠ标记位点的检测,并应用GoCV实时荧光定量PCR方法对转染阳性样品进行了定量,结果显示阳性法氏囊组织中病毒含量为1.57×106拷贝/mg,阳性血清含病毒拷贝数在3.52×104～5.92×105拷贝/μL。综上,本试验构建的GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染鹅胚和雏鹅并增殖出带标记的GoCV克隆。; 徐雅萍田敬袁海霞郭婧孙红霞栗文文陈维虎余旭平; 关键词：感染性克隆转染

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袁海霞