许蓓妮
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 供职机构：武汉大学更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳头瘤病毒16 E7基因的原核表达及表达条件的优化被引量：2
- 2006年
- 目的:构建pET-28a(+)-HPV16 E7原核表达质粒,并对其表达条件进行优化,为进一步研究HPV16E7致病机制及HPV疫苗提供相应的技术平台。方法:应用基因重组技术,构建pET-28a(+)与HPV16 E7(标准株和湖北株)的原核表达重组质粒,用PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测对重组质粒DNA进行鉴定,将其转入宿主菌E.coliBL21(DE 3)进行诱导以表达蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测鉴定表达蛋白的分子量及特异性。优化诱导表达的条件,如温度、IPTG浓度、适用的培养基,探讨不同温度下蛋白的表达形式;纯化回收HPV16 E7蛋白。结果:PCR、限制性内切酶酶切和核酸序列检测证实重组质粒中插入的目的基因,其DNA大小、方向、插入位点和阅读框架均正确;HPV16 E7(标准株)蛋白得到高效原核表达,最佳表达条件:表达HPV16 E7的工程菌BL21(DE 3)的最佳诱导温度是37℃,诱导剂IPTG的浓度为0.3-0.4 mmol/L,最佳培养基为1.5倍LB。结论:pET-28a(+)-HPV16 E7标准株和湖北株重组载体构建成功,人乳头瘤病毒16 E7标准株获得高效原核表达。
- 许蓓妮刘金花彭敏解庭波朱丽琴伍欣星吴承龙
- 关键词：HPV16E7基因原核表达
- 旋转撕脱性完全离断断腕再植被引量：5
- 2007年
- 目的探讨旋转撕脱性完全离断断腕再植改进手术方法的效果。方法在11例旋转撕脱性完全离断断腕再植术中，9例采用改进的方法再植：①腕关节固定前，拇指首先置于外展对掌位固定。②肌腱的处理采用肌腱移位方法，首先修复具有重要功能的肌腱；部分肌腱采用编织法缝合。③对于血管的修复，吻合腕掌侧浅静脉、桡动脉、尺动脉伴行静脉；提前吻合动脉。④剪开腕管并剪除部分腕掌侧横韧带。结果11例再植断腕均成活，随访1～3年，感觉及运动功能恢复参照2000年3月中华医学会手外科学会断指再植功能评定试用标准，优4例，良5例，可2例。优良率81．8％。结论旋转撕脱性完全离断断腕再植术改进后的手术方法具有术后虎口挛缩程度轻，拇指对掌功能恢复好，肌腱粘连程度轻等优点。
- 宋文超段宜强尹培荣尚显文王秋霞刘日光许蓓妮
- 关键词：手掌断掌再植肌腱
- 人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位被引量：1
- 2007年
- 目的构建增强绿色荧光蛋白(EGFP)-人乳头瘤病毒16型变异株E7(HPV16-HBE7)重组质粒pEGFP-HBE7,研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术,将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP-C1表达载体上,用脂质体法导入宫颈癌细胞中;West-ern印迹检测HBE7蛋白的表达;同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术,采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定,其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确;结果表明,转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核;各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主,绿色荧光密集点状分布于细胞浆内,而野生株E7(WE7)蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内,以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。
- 刘金花俞娟许蓓妮姚军左泽华赵旻伍欣星
- 关键词：人乳头瘤病毒亚细胞定位核定位信号激光共聚焦
- 宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。
- 解庭波左泽华彭敏许蓓妮赵旻伍欣星
- 关键词：宫颈癌BLCAP基因克隆
