- GDDR转基因小鼠的基因表达鉴定及功能初步分析
- 2015年
- 目的:对构建的胃癌相关下调基因GDDR(Gastric Dramatic Down-related)转基因小鼠进行鉴定及功能初步检测,为深一步研究GDDR的生物学功能提供可靠的动物模型。方法:对GDDR转基因和野生对照(未经过基因修饰)小鼠胃组织使用实时定量PCR检测其基因转录情况,western blot和免疫组化检测其组织蛋白表达水平及表达部位。通过胃组织进行糖原染色和胃粘膜表面主要糖蛋白MUC5AC行免疫组化染色对小鼠表型进行初步分析。结果:实时定量PCR、western blot和免疫组化结果均显示在GDDR转基因小鼠中胃粘膜GDDR的表达水平明显高于野生组。糖原染色结果显示GDDR转基因小鼠的粘液分泌及粘液厚度高于正常对照组,糖蛋白MUC5AC的表达也显著强于野生组。结论:经过鉴定GDDR转基因小鼠的外源性基因GDDR得到成功表达。通过对GDDR转基因小鼠表型的初步分析,提示GDDR可能参与胃粘膜粘液层的组成和增加粘液分泌从而发挥着保护胃粘膜的作用。
- 王刚方诚李先贵王飞赵占伟杜建军
- 关键词：转基因小鼠功能分析
- 胃癌相关下调基因在胃癌及癌前病变中的表达及其意义被引量：10
- 2014年
- 目的观察胃癌相关下调基因(GDDR)在胃癌及癌前病变中的表达变化,探讨GDDR在胃黏膜癌变过程中的作用和意义。方法应用免疫组化SP法测定经胃镜活检和病理确诊的40例正常胃黏膜组织,40例慢性浅表性胃炎,40例慢性萎缩性胃炎,40例胃的肠上皮化生,20例轻度异型增生,20例重度异型增生和40例胃癌中的GDDR蛋白表达情况。结果从正常胃黏膜组织、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃肠上皮化生、轻度异型增生、重度异型增生、胃癌的发展过程中,GDDR蛋白表达逐渐下调(平均秩次分别为190.70、182.70、146.24、104.40、70.33、47.20和40.20),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GDDR表达下调发生在胃癌形成早期,提示GDDR在胃癌的早期诊断和治疗中起重要作用,有望成为胃癌早诊的分子标记物和分子治疗的新靶点。
- 赵占伟方诚王飞双剑博王刚华谨杜建军
- 关键词：胃肿瘤癌前病变免疫组化
- GDDR对5-FU诱导下胃癌细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的:通过5-FU诱导人胃癌细胞系SGC-7901凋亡,研究GDDR在胃癌细胞凋亡中的作用。方法:利用已构建成功的SGC-7901-GDDR和SGC-7901-pcDNA3.1稳定转染细胞系,在5-FU诱导下促进其凋亡发生,流式细胞术和Western blot检测以上两种细胞系中凋亡发生率和Caspase-3表达及活化程度。结果:未加药组中SGC-7901-GDDR和SGC-7901-pcDNA3.1凋亡发生率无统计学意义,且两者均未观察到活化型Caspase-3表达。加药组中SGC-7901-GDDR凋亡发生率显著高于SGC-7901-pcDNA3.1,且活化型Caspase-3表达前者显著高于后者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:GDDR可通过上调活化型Caspase-3的表达促进SGC-7901细胞凋亡,提示凋亡可能也是GDDR抑癌途径之一,并因此可能在胃肠道肿瘤治疗中发挥作用。
- 王飞方诚赵占伟王刚双剑博华瑾杜建军
- 关键词：细胞凋亡CASPASE-3胃癌
- GDDR位点突变载体的构建和稳转细胞系的建立
- 2012年
- 目的构建GDDR位点突变载体,使GDDR翻译蛋白无法通过二硫键与TFF1结合,建立稳定转染GDDR位点突变载体的人胃癌SGC-7901稳转细胞系。方法设计GDDR Cys38位点突变引物,构建GDDR位点突变的真核表达载体;脂质体法转染重组质粒至人胃癌细胞系SGC-7901;G418筛选阳性细胞并扩大培养;实时定量PCR检测突变GDDR mRNA在人胃癌细胞系SGC-7901的表达。结果经限制性内切酶酶切和DNA测序证实质粒中插入的为所需序列;实时定量PCR证实突变GDDR在人胃癌SGC-7901稳转细胞系高表达。结论 GDDR定点突变载体构建成功,建立了稳定转染GDDR位点突变载体的SGC-7901细胞系,为进一步研究GDDR的结构和功能提供了条件。
- 方诚双剑博祁胜宾韩亚楠王飞赵占伟杜建军
- 关键词：点突变转染
- 高通量测序探讨胰腺炎加重肝损伤的研究
- 2016年
- 目的探讨急性胰腺炎（AP）加重肝脏损伤的机制。方法将sD大鼠随机分为AP组和对照组（NC），采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射的方法建立AP模型，造模后6h经下腔静脉采血，检测血清淀粉酶、脂肪酶水平、胰腺水含量，同时收集肝脏组织，用于提取RNA。通过转录组测序（RNA—seq）的方法分析AP加重肝损害的相关基因和通路改变。结果AP组与NC组比，其血清淀粉酶[（8964．65±401．23）U／L]和脂肪酶[（2350．00±201．90）U／L]含量明显上升（P〈0．05）；胰腺水含量AP组[（79．42±1．21）％]显著高于NC组[（70．14±1．02）％]；RNA—seq结果显示两组间共有2249个差异表达基因，其中564个表达上调，1685个表达下调。京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集结果由高到低为代谢通路、炎性因子通路、趋化因子通路、Toll样受体通路等。结论AP可能通过炎性因子、Toll样受体（TLR）等通路介导了对肝脏的损伤。
- 王谦白槟赵占伟余鹏飞郝一鸣邱兆岩郭敏冯全新刘朝旭赵青川
- 关键词：高通量测序急性胰腺炎肝脏损伤
- 内质网及硝化应激在肥胖大鼠胰腺炎中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的观察内质网应激（ERS）和硝化应激（NS）在肥胖大鼠急性胰腺炎中的作用。方法SD大鼠随机分为对照组（NC）、单纯胰腺炎组（AP）和肥胖胰腺炎组（OB＋AP）。检测各组血清淀粉酶、脂肪酶含量；同时行胰腺、肺组织苏木素-伊红（HE）染色；Western blot检测各组胰腺组织的ERS标志物[肌醇需求激酶-1α（IRE-1α）、葡萄糖调节蛋白-78（GRP-78）、CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）]和NS标志物[诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）]的表达。结果与AP组比较，OB＋AP组血清淀粉酶、脂肪酶水平明显升高；与AP组相比，OB＋AP组胰腺的水肿、炎性细胞浸润更明显，肺出血和肺泡上皮增生更严重；与AP组相比，OB＋AP组内质网应激标记物IRE-1α[（0．65±0．03）比（0．46±.0．04）]、GRP-78[（0．85±0．03）比（0．43±0．03）]、CHOP[（0．62±0．03）比（0．41±.0．02）]和硝化应激标记物iNOS[（1．01±0．10）比（0．36±0．04）]表达升高（P〈0．05），而eNOS[（0．36±.0．05）比（0．69±.0．04）]表达降低（P〈0．05）；免疫组织化学染色显示3-硝基酪氨酸在AP组和OB＋AP组均表达，而在NC组无表达。结论对SD大鼠而言，肥胖可以通过增加ERS和NS的程度而加重胰腺炎。
- 王谦白槟赵占伟余鹏飞邱兆岩郝一鸣郭敏冯全新刘朝旭赵青川
- 关键词：急性胰腺炎内质网应激硝化应激肥胖
- 重症患者喂养不耐受的研究进展被引量：9
- 2017年
- 对于有高营养风险以及口服饮食无法满足正常需求的住院患者，应尽早开始实施肠内营养治疗，但喂养不耐受被认为是不能达到目标营养量的主要原因。目前喂养不耐受在国际上尚缺乏统一的定义、明确的原因及有效的治疗方法。本文对喂养不耐受相关的定义、可能原因及治疗方法等进行总结，为临床进一步研究如何减少喂养不耐受的发病率提供理论指导。
- 武晓勇李旭照余鹏飞杭振宁俞德梁白槟赵占伟赵青川
- 关键词：营养支持肠内营养喂养不耐受重症患者
- TFF1和TFF3在结直肠癌中的表达与临床病理特点及预后的关系被引量：7
- 2014年
- 目的:检测三叶因子1(trefoil factor,TFF1)和三叶因子3(TFF3)在结直肠癌组织、癌旁组织及转移淋巴结中的表达,评价其与肿瘤发生、转移和预后的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测65例结直肠癌、30例癌旁组织、25例转移淋巴结中TFF1和TFF3的表达,分析二者表达的差异及其与临床病理特征和预后的关系。结果:TFF1在癌旁组织、癌组织和转移淋巴结中表达逐渐增高(26.7%,70.8%,96%,两两比较均P<0.05)。癌组织和转移淋巴结与癌旁组织比较,TFF3表达率均有降低(100%vs.84.6%或80%,均P<0.05),癌组织和转移淋巴结之间差异无统计学意义(P>0.05)。TFF1在结直肠癌中的表达仅与肿瘤分化程度相关(P<0.05);TFF3表达与淋巴结转移及TNM分期有关(均P<0.05)。TFF1在结直肠癌中的表达与TFF3呈负相关(P=0.014,r=-0.291)。TFF1表达水平与总生存率无相关性(P=0.639),而TFF3表达水平与总生存率有关(P=0.045)。Cox比例风险模型单因素分析显示,浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期等为影响预后的相关因素。多因素分析显示,淋巴结转移、远处转移、TNM分期和TFF3为预后的影响因素。结论:TFF1和TFF3表达率与结直肠癌的发生、转移和预后密切相关。两者可能在结直肠癌的侵袭、转移中存在共同作用,相互影响。
- 艾克热木玉苏甫王海江帕尔哈提.沙依木方城赵占伟张国庆
- 关键词：TFF1TFF3结直肠癌临床病理特点预后
- 苦参注射液联合普瑞巴林对脊神经结扎大鼠疼痛的影响被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨苦参注射液与普瑞巴林合用的镇痛效果,为临床用药提供实验依据。方法:通过结扎L5脊神经建立大鼠神经病理性疼痛模型。按照痛阈值将模型成功大鼠随机分为3组,分别为肌肉注射苦参注射液、口服普瑞巴林、苦参注射液和普瑞巴林联合用药。采用Von Frey纤维丝测定机械痛阈值,热板法测定热痛阈值,比较3组大鼠的机械痛阈值和热痛阈值的差异。结果:苦参注射液组大鼠机械痛镇痛效果第7天出现,热痛镇痛效果第21天出现,大鼠机械痛阈值和热痛阈值显著升高。口服普瑞巴林组大鼠机械痛阈值和热痛阈值在30分钟内显著升高,但机械痛阈值在给药第8天时下降到给药前水平,热痛阈值给药第5天时下降到给药前水平。联合使用苦参注射液和普瑞巴林,大鼠机械痛阈值和热痛阈值于给药后第1天显著升高,镇痛效果一直维持至实验结束(第28天)。结论:苦参注射液镇痛起效慢,不易产生耐受性。普瑞巴林镇痛起效快,但容易产生耐受。二者联合使用既可短时间内起到镇痛效果,并且不易产生耐受。
- 邱兆岩郝一鸣余鹏飞冯向英白槟赵占伟冯全新赵青川
- 关键词：苦参注射液普瑞巴林神经性疼痛
- 胃肠道特异性GDDR单克隆抗体的制备及鉴定
- 2012年
- 目的制备鼠源性GDDR单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法利用SEAL对GDDR氨基酸序列表位行参数评分,结合人、鼠蛋白序列同源性,设计并合成重组GDDR蛋白,并以所获得蛋白免疫BALB/c小鼠制备鼠单克隆抗体,运用ELISA法检测抗体效价,免疫印迹分析和免疫组织化学鉴定抗体特异性。结果经常规细胞融合和筛选获得两株稳定分泌抗GDDR抗体骨髓瘤细胞株,ELISA检测腹水效价达1100000,Western-blot证实抗体可以和GDDR蛋白特异性结合,免疫组织化学结果显示正常胃黏膜组织GDDR表达明显高于胃癌组织。结论成功制备出两株抗GDDR单克隆抗体mAb,为进一步研究GDDR的生物学功能提供良好的工具。
- 方诚双剑博赵占伟王飞艾克热木玉苏甫华瑾杜建军
- 关键词：杂交瘤
