赵铁柱
- 作品数：12 被引量：60H指数：4
- 供职机构：北京世纪元亨动物防疫技术有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 高致病性PRRSV分离株分子特征与遗传变异分析
- 为了掌握国内高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)的分子特征和遗传变异情况,本实验室定期对HP-PRRSV分离株进行全基因序列测定,并与Genbank登录的PRRSV全基因序列进行比对与分析。结果显示:1) ...
- 田克恭吴佳俊赵铁柱曹振邓小雨遇秀玲
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征遗传变异分析
- 文献传递
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查被引量：44
- 2009年
- 2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失。为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份。在各省不同时期样品中均有阳性样品检出。通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸。
- 侯丽丽赵铁柱遇秀玲曹振邓小雨乔明明张硕王斌陈西钊田克恭
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2ORF5
- 犬细小病毒VP2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：5
- 2007年
- 目的表达犬细小病毒VP2蛋白(CPV VP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究。方法采用PCR方法对CPV VP2基因进行扩增,将CPV VP2基因克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPICZαA中,构建真核重组表达载体pPICZαA-VP2,将该重组质粒线性化后,转化毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下表达CPV VP2,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白。结果成功扩增了CPV VP2基因,构建了真核重组表达载体pPICZαA-VP2在毕赤酵母菌中表达出约64.35 kD蛋白。Western blotting鉴定表明,表达VP2蛋白与犬细小病毒阳性血清有反应性。结论在毕赤酵母中成功地表达了CPV VP2蛋白,能被犬细小病毒阳性血清识别。
- 张云霞丁银巧赵铁柱杨璐孙明曹振王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：毕赤酵母真核表达
- 一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法
- 本发明提供了一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法，其特征在于以一种非靶病毒作为阳性对照，同时设计一对引物，进行扩增，扩增的片段长度与反转录聚合酶链式反应试剂盒的目的基因的长度相同；非靶病毒用异硫...
- 孙明陈西钊乔明明赵铁柱田克恭
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析被引量：1
- 2009年
- 从湖北省暴发猪“高热病”的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），并命名为HUB2株。根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增，获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15320bp（不包括PolyA尾）。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株（VR-2332）和欧洲型标准株（LV）全基因核苷酸同源性分别为89．6％和50．3％，说明HUB2属于美洲型毒株。与VR-2332相比，HUB2株非结构蛋白（Nsp2）存在2处不连续的缺失（共缺失30个氨基酸），其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532～560位。此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础。
- 王斌赵铁柱张云霞候丽丽曹振邓小雨遇秀玲孙明陈西钊田克恭
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒全基因组非结构蛋白
- 高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1株Nsp2基因分段克隆表达及其单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 分析猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白Nsp2,扩增和克隆JXA1株Nsp2基因的4个片段,并将它们分别插入pGEX-6P-1表达载体构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达得到蛋白,纯化后进行活性鉴定。以分段表达的蛋白为抗原,建立间接ELISA方法用于杂交瘤细胞株的筛选。用PRRSVNVDC-JXA1株灭活疫苗对BALB/c小鼠进行常规免疫,最后一次用活毒加强免疫,取其脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,经过选择性培养、有限稀释筛选到1株针对Nsp2的杂交瘤细胞株6B8。鉴定结果表明,该株杂交瘤细胞仅与4个蛋白片段中的Nsp2F1有反应,细胞经长期体外培养和冻存后复苏能稳定分泌抗体,上清效价达1∶210,腹水效价达1∶106。本研究成功表达了4个PRRSV JXA1株的非结构蛋白Nsp2的片段,以其为抗原建立筛选方法,得到1株针对Nsp2的单克隆抗体,为研究Nsp2功能和建立相关诊断方法奠定物质基础。
- 胡鸿惠曹振赵铁柱王斌秦亚嫚杨璐王传彬陈西钊田克恭
- 关键词：NSP2单克隆抗体
- 猪繁殖与呼吸综合征诊断技术研究进展被引量：1
- 2009年
- 1991年，荷兰中央兽医研究所Wensvoort博士用原代猪肺泡巨噬细胞（PAM）首次分离到猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），并命名为Lelystad病毒（PRRSV欧洲型代表株）。次年，美国科学家Collins和Benfield等用CL2621细胞也分离到一株PRRSV并命名为VR-2332（PRRSV美洲型代表株）。PRRSV属于尼多病毒目（Nidovirales）、动脉炎病毒科（Arteriviridae）、动脉炎病毒属（Arterivims）成员。
- 赵铁柱陈南华徐永全陈西钊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒肺泡巨噬细胞PRRSV美国科学家动脉
- 牛口蹄疫病毒非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条的研究
- 目的：研制牛口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白抗体胶体金免疫层析试纸条，用于FMDV感染动物检测、诊断。
方法：利用基因工程表达FMDV非结构蛋白VPg1-2，标记胶体金颗粒。采用双抗原夹心法原理建立胶体金免疫层...
- 马永缨杨璐赵铁柱孙明
- 关键词：动物感染口蹄疫病毒蛋白抗体免疫学检验
- 文献传递
- 一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法
- 本发明提供了一种用于反转录聚合酶链式反应试剂盒的阳性对照组合物及其制备方法，其特征在于以一种非靶病毒作为阳性对照，同时设计一对引物，进行扩增，扩增的片段长度与反转录聚合酶链式反应试剂盒的目的基因的长度相同；非靶病毒用异硫...
- 孙明陈西钊乔明明赵铁柱田克恭
- 文献传递
- AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达被引量：4
- 2009年
- 利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。
- 丁银巧张文杰张云霞赵铁柱孙明遇秀玲赵德明田克恭
- 关键词：VP1基因杆状病毒真核表达
