郑文宏
- 作品数：5 被引量：26H指数：2
- 供职机构：南方医科大学基础医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达被引量：4
- 2013年
- 目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官(心、肺、脑、肾)的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞"干性"的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。
- 郑文宏李振林贾俊双安靓
- 关键词：转基因小鼠
- 小鼠和人胚胎鼻咽发育解剖形态学比较研究
- 2013年
- 目的比较人与小鼠胚胎鼻咽部的解剖学和组织学差异，为研究一些鼻咽部疾病发病机制提供参考资料。方法用组织学方法观察E9．28周人胚胎及E9．5～19．5dC57BL／6J小鼠胚胎鼻咽结构及粘膜形态。结果人胚胎鼻咽部呈不规则的立方形，顶后壁呈约120。的弧形；鼻咽部富含皱襞、隐窝及淋巴组织。小鼠鼻咽部是一个接近直线的弧形管腔，无淋巴组织及隐窝等结构。人胚胎鼻咽粘膜早、中期主：要是假复层纤毛柱状上皮被覆，只有少量过渡上皮及复层鳞状上皮存在。小鼠胚胎鼻咽粘膜全部为假复层纤毛柱状上皮。结论人与小鼠胚胎鼻咽解剖学和组织学差异，可能导致他们对某些疾病易感性不同。
- 郑文宏邓丽群安靓
- 关键词：小鼠胚胎鼻咽粘膜
- 相对定量法检测nestin-GFP转基因小鼠外源基因整合拷贝数被引量：1
- 2013年
- 目的计算出转基因小鼠nestin-GFP的外源基因整合拷贝数,为研究该模型中外源基因遗传及表达的稳定性打下基础。方法用荧光定量PCR的方法对F0代的2只小鼠基因组做检测。先根据已知拷贝数的GFP(green fluorescent protein)和GAPDH来制作标准曲线和方程,然后计算出基因组中二者所含拷贝数的比例来计算外源基因的拷贝数。结果 2只F0的外源基因拷贝数分别是3和4。结论 nestin-GFP转基因小鼠的外源基因整合拷贝数分别是3和4。
- 李振林郑文宏贾俊双安靓
- 关键词：定量PCR外源基因拷贝数
- miR-590-5p和miR-590-3p参与肝细胞肝癌发展的机制被引量：20
- 2013年
- 目的研究miR-590的两个臂—miR-590-5p和miR-590-3p对肝癌细胞增殖能力的影响,以及参与肿瘤发生发展的机制。方法利用miRNA芯片、QPCR对肝癌标本和各细胞株miR-590的表达谱系进行分析和验证。通过脂质体将miR-590 mimic或inhibitor转染正常肝细胞或肝癌细胞,MTT生长曲线分析和软琼脂克隆形成实验检测转染后细胞增殖及存活能力的变化。Targetscan预测miR-590-5p和miR-590-3p的靶基因,并通过萤光素酶报告系统以及western blot进行验证。结果 miRNA芯片结果显示3个肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织相对于癌旁正常组织,miR-590-5p和miR-590-3p表达上调。通过QPCR验证了10例临床HCC肿瘤标本发现80%的HCC组织相对于癌旁组织miR-590-5p和miR-590-3p均同步显著上调。QPCR结果进一步发现,HepG2、Hep3B、Huh7三株HCC细胞株相对于正常肝细胞株L-O2 miR-590-5p/3p同样表达上调。MTT和软琼脂克隆形成结果显示,L-O2分别过表达miR-590-5p和miR-590-3p,细胞的增殖能力都显著增加(P<0.05);而HepG2、Hep3B、Huh7分别下调miR-590-5p和miR-590-3p的表达后,细胞的增殖能力也都显著降低(P<0.05)。Targetscan预测,PDCD4和PTEN分别作为miR-590-5p和miR-590-3p的潜在靶基因。萤光素酶报告系统以及western blot结果显示miR-590-5p和miR-590-3p可以分别直接下调靶基因PDCD4和PTEN的表达(P<0.05)。进一步我们发现miR-590-3p通过下调PTEN激活PI3K-AKT信号通路,促进AKT1-S473的磷酸化水平。结论在HCC发展过程中miR-590扮演着重要的致癌因子角色,我们结果发现miR-590的两个臂都具有促进肿瘤发生的生物学功能,它们分别通过靶向调节抑癌基因PDCD4和PTEN的表达来促进HCC细胞的增殖和存活,并激活核心的PI3K-AKT肿瘤信号通路。由此可见miR-590在HCC发生发展过程中具有重要的意义,也可作为临床诊治潜在的新靶标。
- 杨红飞郑文宏赵文淘关春燕安靓
- 关键词：肝细胞肝癌PDCD4PTEN增殖
- 小鼠和人鼻咽发育形态学与免疫组织化学研究
- 第一部分小鼠和人胚胎鼻咽发育形态学比较研究
鼻咽是呼吸道的一部分，位于蝶骨体和枕骨基底部的下方，呈不规则的立方形。人鼻咽有六壁:前壁、后壁、顶壁、底壁及两侧壁。鼻咽壁的组织结构分为4层:粘膜层、粘膜下层、肌层及外膜...
- 郑文宏
- 关键词：鼻咽粘膜动物模型发育形态学免疫组织化学
