郭润民
- 作品数：39 被引量：144H指数：7
- 供职机构：广东医学院附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雷奈酸锶通过TGF-β_1/Smad通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化被引量：9
- 2013年
- 目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路在雷奈酸锶(strontium ranelate,Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化中的作用。方法:在大鼠BMSCs向成骨细胞的诱导分化过程中,用Sr处理细胞,用Western blotting法检测磷酸化Smad2(phosphorylated Smad2,p-Smad2)和Runx2的表达。用TGF-β1特异性阻断剂SB431542或Smad2小干扰RNA(Smad2-siRNA)预处理BMSCs后加入Sr,再观察p-Smad2和Runx2表达的改变。应用试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及钙结节水平。结果:在大鼠BMSCs向成骨细胞的诱导分化过程中,Sr可增加p-Smad2和Runx2的表达,Sr浓度为1 mmol/L、作用1 h时,p-Smad2表达最多;Sr浓度为1 mmol/L、作用5 d时,Runx2表达最多;用SB431542或Smad2-siRNA预处理BMSCs后再加入Sr,不仅可以抑制p-Smad2和Runx2的表达,且ALP活性与钙结节数量也受到明显的抑制。结论:Sr可通过TGF-β1/Smad通路促进大鼠BMSCs向成骨细胞分化。
- 黄晓丹吕辉珍靳思思郭润民吴文
- 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞转化生长因子Β
- 人APEX1基因的生物信息学分析被引量：6
- 2016年
- APEXl是影响基因表达和氧化还原活性相关碱基修复和多功能蛋白的关键基因，对APEXl基因及编码蛋白进行生物信息学方面的深入分析，更有利于对APEXl基因相关癌症及其他遗传流行病学的阐述。本研究利用生物信息学分析方法以11个物种APEXl基因序列及编码蛋白序列为研究对象，对人APEXl基因进行了系统进化分析及预测启动子及CpG岛，并对其蛋白质理化性质及结构功能等进行了预测分析。核酸分析结果表明，人APEXl基因包含5个外显子，预测核心启动子区域为158～208bp。进化分析结果显示，人与黑猩猩的遗传距离为0．003，亲缘关系最近。蛋白预测软件结果显示，人APEXl蛋白主要由自由卷曲及仪一螺旋结构组成，无合适信号肽及明显跨膜区，表明该基因不参与跨膜物质运输及信号转导。
- 郭润民黄金智卫月马天仲
- 关键词：生物信息学分析
- 调控ERK1/2通路在H_2S保护心肌细胞对抗阿霉素损伤中的作用被引量：2
- 2013年
- 【目的】探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在阿霉素心肌毒性中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控ERK1/2通路抑制阿霉素的心肌毒性。【方法】应用阿霉素处理H9c2心肌细胞建立心肌细胞毒性损伤模型;CCK-8比色法测定细胞存活率;蛋白印迹法(Western blot)检测ERK1/2蛋白的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内的活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP)。【结果】5μmol/L阿霉素呈时间依赖性地上调磷酸化(p)ERK1/2表达水平;硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min明显地抑制阿霉素对p-ERK1/2表达的上调作用;400μmol/L NaHS和10μmol/L PD-98059(ERK1/2抑制剂)预处理30 min,均能对抗阿霉素引起的心肌细胞损伤,分别使H9c2的存活率增加,胞内ROS堆积和MMP丢失均减少。【结论】ERK1/2通路介导阿霉素的心肌毒性作用;通过抑制ERK1/2通路可能是H2S保护心肌细胞对抗阿霉素心肌毒性的作用机制之一。
- 徐文明林健聪王秀玉郭润民沈宁华潇潇陈培熹冯鉴强
- 关键词：硫化氢阿霉素心肌毒性
- 雷奈酸锶通过骨形态发生蛋白-2/Smad通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化被引量：13
- 2013年
- 目的探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/Smad通路在雷奈酸锶（Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为成骨细胞过程中的作用。方法体外分离培养大鼠BMSCs,根据实验目的加入不同浓度Sr、BMP-2的拮抗剂noggin及Smad1小干扰RNA（SiRNA）。酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色检测钙结节,Western blotting法检测磷酸化Smad1/5/8及Runt相关转录因子-2（Runx2）蛋白的表达。结果应用0.1~10 mmol/L Sr处理BMSCs细胞1 h后,细胞内磷酸化Smad1/5/8表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用BMP-2拮抗剂noggin预处理细胞2 h能抑制Sr对磷酸化Smad1/5/8表达的上调作用;应用0.1~5 mmol/L Sr处理细胞6 h后,细胞内Runx2表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用Smad1 SiRNA转染细胞后能下调Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8的表达,并抑制Sr对Runx2表达的上调作用,还拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论 BMP-2/Smad通路参与了Sr促进BMSCs成骨分化。
- 吕辉珍黄晓丹靳思思郭润民吴文
- 关键词：雷奈酸锶骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白-2小RNA干扰SMAD1
- 子宫内膜癌鞘氨醇激酶-1与1-磷酸鞘氨醇的表达和意义被引量：4
- 2014年
- 目的探讨鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase 1,SphK1)与1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)在子宫内膜癌的表达和意义。方法收集正常子宫内膜和子宫内膜癌患者血浆,行子宫全切手术的子宫内膜癌和子宫肌瘤旁组织,ELISA法检测血浆或组织匀浆液S1P的表达,Western blot法检测组织SphK1的表达,组织SphK1激酶活性定量检测试剂盒测定SphK1酶活性。结果和正常对照组相比,子宫内膜癌患者血浆S1P的水平和组织S1P的表达明显增加(P<0.01),子宫内膜癌SphK1酶活性约是正常子宫组织的2.6倍。结论被激活的SphK1/S1P信号通路可能参与子宫内膜癌的发生发展。
- 黄金智卫月郭润民
- 关键词：子宫内膜癌鞘氨醇激酶-11-磷酸鞘氨醇
- 内质网应激在高糖所致血管平滑肌细胞钙化中的作用与机制被引量：1
- 2015年
- 目的探讨内质网(endoplasmic reticulum,ER)应激在高糖引起的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化中的作用与机制。方法 35mmol/L D-葡萄糖(高糖)处理VSMCs,模拟糖尿病状态,观察高糖能否引起VSMCs的ER应激和VSMCs表型转化(收缩型转变为成骨样细胞),观察ER应激的抑制剂对VSMCs钙化的效应,采用比色法、o-cresolphthalein法和western blot观察碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化转录因子(Runx2)等指标。结果应用35mmol/L D-葡萄糖分别处理VSMCs 3d或7d,可引起VSMCs的ER应激蛋白表达上调、碱性磷酸酶活性增加、钙沉积和骨分化标志蛋白增多;苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)预处理在抑制VSMCs的ER应激的同时,能阻断高糖所致VSMCs钙化(表现为碱性磷酸酶活性、钙沉积和骨分化标志蛋白下降)。结论高糖能激活VSMCs的ER应激,继而引起VSMCs凋亡和钙化,提示ER应激在高糖引起的VSMCs钙化中起着重要作用。
- 刘畅吴斌李兴岳吴子君姜佳美游琼吴铿郭润民
- 关键词：高糖内质网应激血管平滑肌细胞血管钙化
- N-乙酰半胱氨酸保护心肌细胞对抗化学性低氧诱导的内质网应激反应被引量：2
- 2011年
- 目的探讨活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸能否保护H9c2心肌细胞对抗化学性低氧引起的内质网应激。方法应用化学性低氧模拟物氯化钴处理H9c2心肌细胞,建立化学性低氧损伤心肌细胞的实验模型。在氯化钴处理H9c2心肌细胞前60 min把N-乙酰半胱氨酸加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡心肌细胞的形态学改变;双氯荧光素染色荧光显微镜照相检测细胞内活性氧水平;免疫印迹法检测内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78的表达。结果在100～2 000μmol/L浓度范围内,氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性地抑制细胞存活率。在12～48 h时间范围内,800μmol/L氯化钴处理H9c2心肌细胞呈时间依赖性地抑制细胞存活率。在氯化钴处理H9c2心肌细胞前60 min,应用2 000μmol/L的N-乙酰半胱氨酸不仅能抑制氯化钴对活性氧生成的促进作用,也能明显的抑制氯化钴诱导的细胞凋亡。不同浓度的氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h,可使葡萄糖调节蛋白78表达增多,其中800μmol/L的氯化钴处理H9c2心肌细胞24 h时,葡萄糖调节蛋白78表达最多,800μmol/L的氯化钴处理H9c2心肌细胞不同时间,9 h时葡萄糖调节蛋白78表达最多。在氯化钴处理H9c2心肌细胞前60 min,应用2 000μmol/L的N-乙酰半胱氨酸能明显的抑制氯化钴诱导的葡萄糖调节蛋白78的表达。结论 N-乙酰半胱氨酸能显著地对抗化学性低氧诱导的心肌细胞损伤,此心肌细胞保护作用可能与其对抗化学性低氧引起的内质网应激有关。
- 郑东诞兰爱平莫利求杨战利杨春涛王秀玉郭润民陈培熹冯鉴强
- 关键词：心肌保护内质网应激
- N-乙酰半胱氨酸保护PC12细胞对抗化学性低氧诱导的损伤被引量：2
- 2011年
- 目的探讨活性氧(ROS)清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能否保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤。方法应用化学性低氧模拟物氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞,建立化学性缺氧损伤PC12细胞的实验模型。在CoCl2处理PC12细胞前60 min将NAC加入培养基中,作为预处理。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Caspase-3蛋白的表达水平。结果 600μmol/L CoCl2明显地损伤PC12细胞,表现为降低细胞存活率,增加凋亡细胞,激活Cas-pase-3及降低MMP。在CoCl2损伤PC12细胞前60 min,应用500μmol/L NAC作为预处理能明显地抑制CoCl2对PC12细胞的损伤作用,使细胞存活率显著升高,细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3表达降低,并显著对抗CoCl2对MMP的抑制作用。结论NAC能明显地对抗化学性缺氧诱导的PC12细胞损伤,此保护作用与其改善MMP,抑制Caspase-3活化等机制有关。
- 张任权兰爱平胡芬郭润民沈宁冯鉴强
- 关键词：氯化钴N-乙酰半胱氨酸CASPASE-3线粒体膜电位PC12细胞
- 糖尿病心肌病患者血清差异表达microRNA及作用的研究被引量：3
- 2016年
- 目的筛选糖尿病心肌病患者血清差异表达的micro RNA(mi RNA),明确mi R-186-5p和mi R-516a-5p在DCM发生发展中的作用和机制。方法选择30例DCM患者为实验组,60例年龄相当的身体健康者为正常对照组,分别从两组随机选取3例作为研究对象行micro RNA芯片初筛差异表达mi RNA,然后荧光定量q PCR验证这些mi RNA的差异表达;在高糖诱导人AC16心肌细胞损伤模型中,mi R-186-5p和mi R-516-5p的mimics和inhibitors分别干预,观察对高糖引起的心肌细胞毒性的影响。结果 micro RNA芯片检测发现,糖尿病心肌病患者血清有51个差异表达的mi RNA,经荧光定量q PCR验证为mi R-186-5p、mi R-516a-5p等8个差异表达mi RNA;显著高表达的mi R-516-5p和明显低表达的mi R-186-5p介导了高糖所致心肌细胞毒性损伤。结论糖尿病心肌病患者血清mi RNA表达谱发生改变,有8个差异表达mi RNA,mi R-516a-5p和mi R-186-5p可能参与糖尿病心肌病的心肌损伤发病过程。
- 郭润民刘畅吴子君姜佳美吴斌莫海亮黄瑞娜何松坚李腾闫海李上海游琼吴铿
- 关键词：MICRORNA糖尿病糖尿病心肌病心肌损伤
- 氧化应激通过抑制胱硫醚-γ-裂解酶介导阿霉素的心肌毒性被引量：7
- 2011年
- 目的探讨氧化应激是否通过抑制胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性介导阿霉素的心肌毒性。方法应用阿霉素处理大鼠胚胎H9c2心肌细胞以建立阿霉素心肌毒性的细胞模型。在阿霉素处理前60 min用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸预处理H9c2心肌细胞以观察氧化应激在阿霉素心肌细胞损伤中的作用。应用CCK-8检测心肌细胞存活率;双氯荧光素酶染色及荧光显微镜照相术检测细胞内活性氧水平;Western blot检测胱硫醚-γ-裂解酶的表达;亚甲基蓝显色法检测胱硫醚-γ-裂解酶活性。结果 5μmol/L阿霉素处理H9c2细胞24 h引起明显的心肌毒性,使细胞存活率降低。阿霉素在促进细胞内活性氧生成的同时,还抑制胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性。N-乙酰半胱氨酸不仅抑制阿霉素对活性氧生成的促进作用,还减弱阿霉素的心肌毒性,并能阻断阿霉素对H9c2心肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶表达及活性的抑制作用。结论活性氧可通过抑制心肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶的表达及活性介导阿霉素的心肌毒性。
- 郑东诞王秀玉杨春涛莫利求兰爱平胡芬郭润民沈宁陈培熹冯鉴强
- 关键词：氧化应激活性氧胱硫醚-Γ-裂解酶阿霉素心肌毒性
