陆泉枝
- 作品数：8 被引量：35H指数：3
- 供职机构：中国农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选鉴定和猪抑肌素基因敲除载体构建
- 第一部分 无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选与鉴定 内源逆转录病毒(endogenous retrovirus，ERV)是一类以前病毒形式整合在生物基因组内的一类逆转录病毒，其本身对宿主没有任何病理作用。ERV大约在...
- 陆泉枝
- 文献传递
- 无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选与鉴定被引量：3
- 2004年
- 分布于猪基因组内的内源逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus，PERV)序列是制约猪作为异种器官移植供体的主要因素，其拷贝数在不同品种与个体间存在着很大差异，实验中选取了中国农业大学畜牧实验站的3-6月龄、健康的雌性中国实验用小型猪67头，通过PCR检测与Southern杂交方法测定了内源病毒的拷贝数与囊膜蛋白类型，从囊膜蛋白类型来看，长白猪和中国实验用小型猪之间没有明显的差异，但在两个猪种中含有两种囊膜蛋白基(env-A和env-B，记为eny-AB)的个体所占比例明显高于仅含一种囊膜蛋白基因(env-A或env-B)的个体比例，在中国实验用小型猪中发现了2头内源病毒负载阴性的个体，其他个体的内源病毒基因拷贝数也相对较低，在10-20个拷贝之间，这些都充分说明了中国地方猪种的遗传多样性以及中国实验用小型猪可以作为异种器官移植供体的可行性。
- 陆泉枝韩红兵连正兴李宁张庆才赵自力裴德智张晓兰吴常信
- 关键词：囊膜蛋白SOUTHERN杂交
- 猪Myostatin同源重组载体的构建被引量：1
- 2006年
- 根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin基因序列设计引物,通过PCR方法扩增了猪Myostatin基因的3′臂、5′臂,其长度分别为1.4 kb、4.4 kb。将扩增的片段与T载体连接后进行部分序列测定,与已发表的Myostatin序列进行同源性比较,同源性为100%;对目的片段与载体进行酶切后定向连接形成转基因结构,经序列测定后,证明其插入方向和位置完全正确,构建了猪的Myostatin表达Neor、Tk基因的双标记转基因载体。
- 潘求真陆泉枝孙书锋王海连正兴杨宁谭景和吴常信
- 关键词：TK基因聚合酶链式反应
- 山羊Myostatin基因打靶载体的构建被引量：3
- 2006年
- 根据绵羊、猪、小鼠和牛的Myostatin基因序列,设计引物,通过PCR方法扩增了山羊的Myostatin基因的3′臂、5′臂,其长度分别为1·4kb、4·5kb。将扩增的片段与T载体连接后进行部分序列测定,与已知发表的Myostatin序列进行同源性比较,同源性为100%。对目的片段与载体进行酶切后定向连接形成转基因结构,经序列测定后,证明其插入方向和位置完全正确,构建表达Neo、Tk基因的哺乳动物双标记转基因载体,并命名为ploxp-M。
- 潘求真孙书锋陆泉枝王海连正兴杨宁李宁谭景和
- 关键词：TK基因聚合酶链式反应
- 电穿孔导入绿色荧光蛋白基因于绵羊胎儿成纤维细胞研究被引量：21
- 2004年
- 本文应用质粒pEGFP Cl带有水母绿色荧光蛋白 (GFP)基因和新霉素抗性基因 (Neor)两种报告基因转染胎儿成纤维细胞 ,进行转染条件优化。首先 ,通过成活率确定转染脉冲时程和场强 ,发现有三种组合是最适的组合 ,它们分别为 :时程 5ms,场强 1.2 5～ 1.5kV/cm ;时程 15ms时 ,场强 1.0～ 1.2 5kV/cm ;时程 2 5ms时 ,场强 0 .75～ 1.0kV/cm。接着采用场强 1.2 5kV/cm ,时程 15ms ,研究转染的温度、电导介质、细胞状态、DNA用量和细胞密度对转染效率的影响 ,结果表明电导介质为Dhanks,DNA用量为 4 μg/mL ,对数期细胞密度为 1× 10 6～ 1× 10 7个 /mL ,电击前后在 4℃下各静置 10min时 ,能获得最佳转染效率。
- 王海陆泉枝连正兴李宁吴常信
- 关键词：绿色荧光蛋白基因纤维细胞
- 山羊体细胞转基因方法的探讨被引量：6
- 2004年
- 转基因体细胞核移植是制备高效表达转基因动物的主要手段与方法,但由于插入位点、拷贝数不同常使外源基因的表达受到一定影响。本试验以双正向选择标记的pLoxP M为转基因结构,以磷酸钙法、脂质体介导法、电击转染三种方法对山羊胎儿成纤维细胞进行转染。电击(1 70×10-4)和脂质体(1 36×10-4)法明显高于磷酸氢钙法(4 6×10-5),而且三方法的转染效率与细胞类型无关,但电击转染方法简单并适合于不同大小的转基因结构,对长片段更为实用。随机整合的转基因细胞系绿色荧光蛋白的表达水平有很大差异,主要与外源基因的拷贝数和插入位点有关。双正向选择标记不但可以筛选重组体而且可以体外监控外源基因的表达情况,为高表达转基因动物的制备提供了良好的手段与方法。
- 潘求真陆泉枝王海敖红连正兴李宁吴常信
- 关键词：山羊体细胞转基因方法胎儿成纤维细胞细胞核移植
- 无内源逆转录病毒中国实验用小型猪的筛选与鉴定
- 分布于猪基因组内的内源逆转录病毒序列,是制约猪作为异种器官移植供体的主要因素,其拷贝数在不同品种与个体间都有很大差异.实验中选取了中国农业大学畜牧实验站的3~6月龄、健康的雌性中国实验用小型猪67头,采用PCR检测与So...
- 陆泉枝韩红兵连正兴李宁裴德智张晓兰吴常信
- 关键词：囊膜蛋白PCRSOUTHERN杂交
- 文献传递
