于宏
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 水甘油通道蛋白7、9与非酒精性脂肪性肝病的关系研究进展被引量：3
- 2008年
- 王川于宏姜政
- 关键词：非酒精性脂肪肝病RNA干扰
- 转化生长因子-β1基因shRNA表达质粒的构建及其对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响
- 2012年
- 目的构建转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,并观察其对结肠癌细胞SW480侵袭能力的影响。方法设计并合成2对靶向TGF-β1基因的RNA干扰序列和1对阴性对照序列,并构建重组表达质粒pshRNA-TGF-β1a、pshRNA-TGF-β1b和pshRNA-TGF-β1c(阴性对照),以脂质体介导转染SW480细胞,荧光显微镜观察转染情况;RT-PCR和Western blot检测转染细胞中TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;Transwell侵袭试验检测沉默TGF-β1基因表达对细胞侵袭能力的影响。结果 TGF-β1基因shRNA重组表达质粒经酶切鉴定和测序分析证明构建正确。与空白对照组相比,3种质粒转染的细胞均有较强的荧光表达;pshRNA-TGF-β1a和pshRNA-TGF-β1b组细胞TGF-β1基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显减低(P<0.05);SW480细胞的侵袭能力也明显降低(P<0.05)。结论成功构建了TGF-β1基因shRNA重组表达质粒,其能有效抑制结肠癌细胞SW480中TGF-β1基因的表达,并可显著降低细胞的侵袭能力,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路。
- 于宏姜政仲琳王丕龙
- 关键词：转化生长因子-Β1RNA干扰结肠癌
- pEGFP-N1-TGF-β1重组质粒对结肠癌细胞增殖、细胞周期及侵袭性的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨在体外转化生长因子β1(TGF-β1)的真核表达载体对结肠癌细胞增殖?细胞周期及侵袭性的影响。方法将构建的重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1转染入结肠癌细胞系SW480中,应用荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测TGF-β1基因的表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析SW480细胞周期变化;Transwell侵袭实验验证TGF-β1对细胞侵袭能力的影响。结果转染重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和Westernblot检测到TGF-β1基因的转录及蛋白表达增强(P<0.05);细胞周期分析显示TGF-β1使细胞停留在G1期,S期细胞明显减少(P<0.05),且SW480细胞的增殖受到明显抑制;Transwell侵袭实验显示:SW480细胞的侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论TGF-β1能抑制SW480细胞的增殖,使细胞停留在G1期,但同时能增强其侵袭能力。其作用可能与免疫抑制/逃逸、增加血管生成以及增加肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用有关。
- 于宏姜政王丕龙
- 关键词：转化生长因子-Β1SW480细胞结肠癌
- TGF-β1真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的:构建人转化生长因子-β1(TGF-β1)的真核表达载体,并检测其融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达,为阐明TGF-β1在肝纤维化发生、发展中的作用以及建立相应的基因沉寂治疗途径奠定基础.方法:从人的肝脏组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法获得人TGF-β1基因,将其克隆到真核荧光表达载体pEGFP-N1上,构建重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1,转染真核表达细胞COS-7中,通过荧光显微镜检测其表达,RT-PCR和Western Blot检测TGF-β1基因在真核细胞中的表达.结果:通过RT-PCR方法克隆人TGF-β1基因为1173bp,与目的基因片段大小相一致;测序结果显示,于531位有1个碱基突变:T→C,为无义突变.通过RT-PCR和Western Blot检测到TGF-β1基因的表达,其融合蛋白分子质量约为52ku(绿色荧光蛋白分子质量约为27ku),说明重组质粒在COS-7细胞内正常表达.结论:成功的构建了真核表达质粒pEGFP-N1-TGF-β1,并在真核细胞COS-7中表达,为进一步研究其在肝纤维化的基因治疗中奠定了基础.
- 于宏周静孙伟周洲吴莹姜政王丕龙
- 关键词：肝星形细胞转化生长因子转染
