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关娜: 作品数：11 被引量：18H指数：3; 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目黑龙江省留学归国人员基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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原始生殖细胞抽提物诱导的体细胞重新编程: 目的：本实验研究在体外培养条件下降低小鼠体细胞的分化程度，促使其重新编程，诱导多潜能基因的表达上调，印记基因和体细胞特定基因的表达下调。　　方法：用液氮反复冻融加机械振荡的方法获得细胞抽提物，制备多潜能的小鼠原始生殖...; 关娜; 关键词：体细胞原始生殖细胞抽提物印记基因免疫荧光染色

NuMA和γ-tubulin在核移植克隆胚胎中的动态变化和作用: 2008年; 核有丝分裂器蛋白(NuMA)和γ-微管蛋白(γ-tubulin)在卵母细胞成熟、受精和核移植胚胎早期发育过程中起重要作用。供体细胞γ-tubulin和NuMA参与了核移植克隆胚有丝分裂纺锤体的组装,NuMA主要参与了纺锤体极的装配和维持,而供体中心体调节核移植胚最初纺锤体的形成。核移植重构胚中心体结构异常经常伴随染色体异常排列、纺锤体结构异常,而中心体分布异常经常伴随异常卵裂。; 张庆华关娜徐燕宁钟淑琦雷蕾; 关键词：胚胎早期 TUBULIN 核移植克隆胚

体细胞重编程为多潜能干细胞的研究进展被引量：3: 2008年; 人类的胚胎干细胞(embryonicstemcells,EScells)可以用来治疗很多疾病,但是如果通过核移植来获得与供体或者患者相匹配的ES细胞,就会受到人卵母细胞来源等条件的制约。这就促使了将体细胞重编程为多潜能细胞这样一种技术策略的发展,其中包括将分化细胞与ES细胞融合,在卵细胞、ES细胞或多潜能癌细胞的抽提物中孵育,强制多潜能因子过表达等具体的方法。通过这些途径引出了一些核功能的重编程以及相应的DNA甲基化修饰、组蛋白翻译后修饰,使体细胞表达特定的多潜能因子,转变为类似胚胎干细胞的多潜能细胞。; 徐燕宁关娜张庆华雷蕾; 关键词：体细胞重编程多潜能干细胞细胞治疗

应用激光扫描共聚焦显微镜研究卵母细胞和早期胚胎的细胞骨架被引量：5: 2008年; 介绍了应用激光扫描共聚焦显微镜,结合免疫荧光技术研究卵母细胞和早期胚胎细胞骨架的方法。观察了β-微管蛋白、γ-微管蛋白、微丝以及染色体在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的分布和形态,讨论了实验过程中的注意事项以及实验结果的分析和处理方法。; 徐营张庆华关娜徐燕宁闫晓飞雷蕾; 关键词：激光扫描共聚焦显微镜细胞骨架卵母细胞早期胚胎

不同类型的转基因细胞核供体对生产小鼠转基因克隆胚胎的影响被引量：1: 2009年; 目的利用体细胞核移植（SCNT）技术生产小鼠转基因克隆胚胎。方法利用所构建的含新霉素抗性（Neor）基因和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染小鼠胎儿成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞,经G418筛选14d后用于核移植。同时以未转基因小鼠卵丘细胞和成纤维细胞为核供体,进行体细胞核移植。结果转基因与未转基因胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚（154/160）发育率为19.23%和22.91%,差异不显著（P〉0.05）;转基因胚胎干细胞与胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚（152/154）发育率为41.54%和19.23%,差异显著（P〈0.05）;未转基因卵丘细胞与成纤维细胞的重构胚的囊胚（171/160）发育率为41.17%和22.91%,差异显著（P〈0.05）。结论利用体细胞核移植技术,小鼠胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞可以有效地生产小鼠转基因囊胚。; 闫晓飞徐燕宁李洪武关娜单智焱钟淑琦金连弘雷蕾; 关键词：核移植电穿孔绿色荧光蛋白

小鼠胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞转绿色荧光蛋白基因的研究被引量：1: 2008年; 目的检测用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染的小鼠胎儿成纤维细胞及小鼠胚胎干细胞的转染效率及EGFP的表达情况。方法电穿孔法将EGFP转入胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞,G418筛选,荧光显微镜观察转染效率及绿色荧光蛋白表达情况。结果胚胎干细胞的转染率高于成纤维细胞,转染后的两种细胞经药物筛选均有绿色荧光蛋白表达。结论电穿孔转染细胞的方法简单、效率高,是一种较为理想的基因转染方法,经药物筛选后的两种细胞均可用于核移植,为转基因克隆动物的研究奠定了基础。; 阎晓飞徐燕宁申景岭单智焱关娜钟淑琦金连弘雷蕾; 关键词：电穿孔转基因成纤维细胞胚胎干细胞

小鼠孤雌胚早期发育过程中γ-微管蛋白的动态变化被引量：4: 2008年; 微管蛋白是构成微管的主要蛋白,其中α、β亚单位形成异二聚体,而γ-微管蛋白在微管组装中起作用。为了研究小鼠早期孤雌胚中γ-微管蛋白的动态变化,本实验采用了免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,在SrCl2激活的卵母细胞减数分裂以及早期孤雌胚有丝分裂过程中对γ-微管蛋白进行了定位观察。结果显示,SrCl2和细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)诱导的第二次减数分裂中期(metaphaseⅡ of meiosis,MⅡ)小鼠卵母细胞恢复减数分裂,并且纺锤体始终与质膜平行,表明纺锤体旋转被抑制,但核分裂不受影响。减数分裂过程中γ-微管蛋白主要定位于中期纺锤体两极和后期分开的染色单体之间;孤雌活化两雌原核形成以后,γ-微管蛋白聚集在两雌原核周围。在早期孤雌胚有丝分裂间期无定形的γ-微管蛋白均匀分布于核;前中期γ-微管蛋白向两极移动,遍布于整个纺锤体区。有丝分裂中期、后期和末期γ-微管蛋白的分布变化与减数分裂相似。结果表明,SrCl2和CB激活的MⅡ卵母细胞产生杂合二倍体;γ-微管蛋白具有促微管负极帽形成和稳定微管的功能,从而促进纺锤体的形成;分裂后期和末期γ-微管蛋白的重新分布可能是由纺锤体牵引同源染色体分离所诱导的;γ-微管蛋白负责两雌原核的迁移靠近。; 张庆华单智焱关娜徐燕宁申景岭钟淑琦雷蕾; 关键词：Γ-微管蛋白孤雌激活有丝分裂小鼠

体细胞核重编程中表观遗传学的研究进展被引量：4: 2008年; 促使体细胞核重编程的方法很多,除了传统的体细胞核移植方法外,科学家们努力寻求从法律、道德、伦理等方面更易被人们接受的新方法.近年来多能干细胞与体细胞融合、多能细胞的抽提物与体细胞共孵育以及将编码多潜能因子的基因导入体细胞中等方法都能使体细胞核发生重新编程,将已分化的体细胞转变为一种全能的胚胎状态.主要论述了生殖细胞及早期胚胎、体细胞核移植和其他形式的体细胞核重编程的表观遗传学的改变,对表观遗传学的深入研究将有助于我们进一步了解体细胞核重编程的机制,从而不断完善各种技术促进供体核的重新编程,使其更好地应用于基础研究和生产实践.; 关娜徐燕宁张庆华雷蕾; 关键词：重编程表观遗传学甲基化

糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变: 2009年; 目的探讨糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变。方法4-6周龄雌性BALB／C小鼠腹腔注射地塞米松，采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测DNA单链或双链的裂解，TUNEL和酸性磷酸酶（ACP）双重染色法进行酸性磷酸酶的检测，观察细胞凋亡后吞噬细胞的活动，透射电子显微镜检测凋亡细胞和吞噬细胞的超微结构。结果光镜观察地塞米松组，TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处，凋亡指数为0.460±0.012；正常对照组TUNEL阳性细胞数目较少，凋亡指数为0.020±0.001，与地塞米松组比较，差异有显著性（P〈0.05）。TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法显示，所有TUNEL阳性胸腺细胞均被ACP阳性细胞吞噬。透射电子显微镜观察发现，大部分凋亡细胞均被吞噬细胞所吞噬，少量未被吞噬的胸腺细胞表现出大范围的染色质浓集，这些少量未被吞噬的胸腺细胞显然是死细胞。结论典型的细胞凋亡的特点是DNA裂解，但这不是糖皮质激素诱导胸腺细胞死亡的主要方式，死亡的胸腺细胞均是被ACP阳性细胞所吞噬；糖皮质激素对胸腺细胞的首要影响是可诱导无DNA裂解的细胞固缩。; 杨静徐玉东关娜刘兰涛许海赵太平刘岩; 关键词：胸腺 TUNEL 酶组织化学小鼠

胚胎干细胞与四倍体互补产生转基因小鼠: 2009年; 目的将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合,构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs),获得小概率的同源重组事件,进而直接得到所要的突变品系。方法通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒转入ESCs,用G418筛选获得EGFP-ESCs。另外,通过电融合获得四倍体囊胚细胞,显微注射法将19～21个EGFP-ESCs注入每个四倍体囊胚腔,分别移植到假孕2.5d雌鼠子宫或假孕0.5d的输卵管内。结果获得稳定表达的EGFP-ESCs,染色体数目正常(2n=40条);四倍体细胞融合率为95.07%,囊胚发育率为95%;共获得410个重构囊胚;移植后未得到出生小鼠,但共观察到了151个着床位点,子宫移植的着床率为29.41%,输卵管移植的着床率为64.37%,获得的胚胎中EGFP蛋白有散在的表达。结论稳定表达的EGFP-ESCs参与到了转基因胎鼠的发育中;本实验中输卵管移植的着床率高于子宫移植的着床率。; 徐燕宁关娜单智焱申景岭金连弘雷蕾; 关键词：胚胎干细胞转基因小鼠

关娜

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