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不同固定剂及渗透方法对免疫荧光技术中EGFR内吞转运观察效果的影响被引量：6: 2015年; 目的:探索适合表皮生长因子受体(EGFR)内吞转运免疫荧光观察的固定和渗透方法。方法:采用OLYMPUS BX61荧光显微镜及成像系统,对不同固定剂(4%多聚甲醛,甲醇,4%多聚甲醛+甲醇,丙酮,丙酮与甲醇体积比1∶1的混合液)配合不同渗透方法(0.04%saponin,0.1%Triton X-100)得到的EGF刺激后0 min和15 min两个时间点的EGFR免疫荧光图像进行对比分析。结果:0 min时EGFR主要定位于细胞质膜,4%多聚甲醛+甲醇的固定方法,配合使用0.04%saponin,可以观察到细胞膜上明显、清晰、连续的EGFR信号。针对EGF刺激15 min后内吞进入细胞的EGFR,不同固定方法对观察效果没有明显影响。但与配合使用0.04%saponin相比,0.1%Triton X-100进行渗透能充分暴露EGFR在细胞核内的信号。结论:温和的固定和渗透方法可获得较好的EGFR膜定位信号。针对内吞转运中的EGFR需要较强的渗透剂,以确定EGFR在细胞内准确的定位。; 冯婧文杨少斌王兆松赵文铖肖春花; 关键词：固定剂荧光显微镜表皮生长因子受体

miR-448通过抑制上皮间质转化抑制肺癌细胞增殖和运动能力: 2015年; 探讨mi R-448对肺癌细胞增殖和运动的影响及其分子机制。采用实时荧光定量PCR(polymerase chain reaction)检测原发肺癌组织和癌旁正常组织mi R-448表达水平。转染mi R-448 mimic和inhibitor至肺癌A549细胞系,通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)、平板克隆形成和Transwell实验观察mi R-448表达对A549增殖和运动能力的影响;利用Western blot检测EMT(epithelial-mesenchymal transition)标志物蛋白表达水平,通过实时荧光定量PCR检测EMT相关转录因子m RNA表达水平。实时荧光定量PCR显示较癌旁正常组织相比,mi R-448在原发肺癌组织中表达降低。MTT和平板克隆形成实验显示,过表达mi R-448抑制A549细胞增殖和运动能力;降表达mi R-448增强A549细胞增殖和运动能力。Western blot显示降表达mi R-448能下调上皮标志物E-cadherin,上调间质标志物Vimentin表达水平。实时荧光定量PCR显示降表达mi R-448能上调EMT相关转录因子Twist1和ZEB1 m RNA表达水平。mi R-448可通过抑制EMT抑制肺癌进展。; 董秋萍徐玥杨少斌冯婧文齐晓敏赵文铖王兆松许世磊; 关键词：EMT 肺癌增殖

斑马鱼TATA结合蛋白的生物信息学分析被引量：6: 2015年; 斑马鱼TATA结合蛋白(TBP)是转录过程中的重要起始因子。利用生物信息学方法对斑马鱼TBP的理化性质、物种间同源性、保守结构域、跨膜区、亲水性/疏水性、蛋白质二级结构、蛋白质三级结构、蛋白质相互作用进行预测分析。分析表明,斑马鱼TBP全长302个氨基酸,等电点9.8,属于TATA结合蛋白超家族,不含跨膜区,属于亲水蛋白;二级结构以无规则卷曲为主,含5个α螺旋区和8个β折叠区,三维建模空间结构可信度98.9%,进一步分析建模结果可靠;与斑马鱼TBP相互作用的蛋白质均为转录因子或TFⅡD复合物组分。分析结果对于深入研究斑马鱼TBP在基因转录中的作用具有一定的理论指导意义。; 杨少斌冯婧文赵文铖王兆松许世磊; 关键词：斑马鱼生物信息学

EHD2调控乳腺癌EMT的机制研究: 目的:EHD2（C-Terminal EH domain-containing protein 2）蛋白是一类参与受体内吞和转运的新型膜转运调控蛋白。据报道EHD2可以与质膜结合,提高其稳定性,并限制其凹陷和内吞囊泡的形...; 冯婧文; 关键词：EGFR E-CADHERIN EMT 乳腺癌; 文献传递

顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集被引量：1: 2013年; 目的:建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2(EH domain-containing protein-2)与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法:以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。结论:BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。; 李盼潘利付欣杨少斌冯婧文胡明秋应国光; 关键词：BCRP 肿瘤耐药

Cdc42独立调节A549细胞迁移能力的自动测量: 2014年; 目的定量分析Cdc42对A549细胞迁移能力的独立调节作用,并验证一种自动测量和计算体外细胞迁移距离的新方法的有效性.方法在人肺腺癌A549细胞中过表达Cdc42,然后进行划痕实验并在不同时间点采集图像.应用多种测量方法对图像进行定量分析,统计分析各方法针对细胞迁移距离测量的精确度和可重复性.结果 Cdc42过表达组A549细胞的迁移速度大于对照组（P＜0.05）.与人工测量相比,新方法具有高效、准确及重复性好等优势.与现有计算机软件（Image Pro Plus 6.0）测量方法相比,新方法在测量区域识别、去除噪声等方面具有显著的优越性.结论 Cdc42过表达后显著提高了A549细胞的体外迁移能力.新方法可实现对体外细胞迁移的自动定量分析.; 冯婧文刘亚辉靳倡荣林旺许世磊; 关键词：CDC42 肿瘤细胞迁移自动测量

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冯婧文