刘应保
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB及其应用
- 本发明公开了增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。以及所述的增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB作为生物发光报告基因的应用。本专利将luxA和luxB基因融合表达后形成的单体蛋白...
- 王瑶崔博宇沈锡辉宋云洪刘应保
- 文献传递
- 基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法
- 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白...
- 沈锡辉王瑶崔博宇宋云洪王铁涛刘应保司美茹
- 文献传递
- 淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因PR-OP全长cDNA的克隆及生物信息学分析被引量：10
- 2010年
- 【目的】克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关视蛋白基因,并进行生物信息学分析,为阐明视蛋白基因的抗性机制及研制新型卫生杀虫剂奠定基础。【方法】依据库蚊抗性与敏感品系差异表达的EST片段设计PCR引物,采用RACE技术克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因PR-OP全长cDNA序列,并对其生物信息学进行分析。【结果】获得了长度为1 402 bp的淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因PR-OP全长cDNA,其编码383个氨基酸。生物信息学分析结果表明,该基因编码蛋白为具有7个跨膜螺旋的膜蛋白,其保守域与视紫红质家族的保守域一致,该蛋白还具有2个信号肽切割位点和18个磷酸化位点。系统进化分析表明,该基因与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关视蛋白基因及致倦库蚊、埃及伊蚊视紫红质基因氨基酸序列同源性在69%以上,与家蚕、烟草天蛾、柞蚕、柑橘凤蝶、中华蜜蜂、黑腹果蝇视蛋白的氨基酸序列同源性均在56%以上。【结论】克隆了淡色库蚊氯菊酯抗性相关视蛋白基因(GenBank登录号为FJ917744),推测其与氯菊酯抗性相关。
- 刘虎岐刘应保宋云鹏段晓雷程鸟鸟
- 关键词：淡色库蚊氯菊酯生物信息学分析
- 淡色库蚊XND-P450基因cDNA全长克隆及表达
- 2014年
- 【目的】克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,并对其进行生物信息学分析,研究其在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中表达量的差异,为阐明XND-P450的功能和抗性机制奠定基础。【方法】依据淡色库蚊抗性品系与敏感品系差异表达的EST片段设计PCR引物,采用RACE技术克隆淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析;采用半定量PCR技术,对XND-P450基因在敏感品系和抗性品系淡色库蚊中的表达量差异进行检测。【结果】经过克隆获得长度为1 679bp的淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA,编码523个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因与致倦库蚊、埃及伊蚊CYP450基因的同源性在70%以上,其编码蛋白相对分子质量为33 244.9u,理论等电点为8.10,属于不稳定的亲水蛋白,氨基酸序列与致倦库蚊及冈比亚按蚊CYP450蛋白的同源性在40%以上。半定量PCR电泳分析显示,抗性品系淡色库蚊中的XND-P450基因表达量较敏感品系高。【结论】克隆了淡色库蚊氯菊酯抗性相关XND-P450基因,该基因在抗性品系淡色库蚊中的表达量高于敏感品系,推测其与氯菊酯抗性相关。
- 郑文亮李边征华刘应保王晓宇刘虎岐
- 关键词：淡色库蚊氯菊酯RACE
- 基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法
- 本发明公开了一种基于细菌荧光素酶BRET技术检测蛋白质相互作用的方法，构建荧光供体克隆pBluescript-pLac::luxAB-MCS；受体蛋白选择绿色荧光蛋白GFP等；在MCS处选择合适酶切位点分别将三种荧光蛋白...
- 沈锡辉王瑶崔博宇宋云洪王铁涛刘应保司美茹
- 文献传递
- 谷氨酸棒杆菌中分枝硫醇的生理功能研究
- 谷氨酸棒杆菌被广泛用于氨基酸的工业发酵，以及核苷酸和维生素的生产。近年来的代谢工程研究表明，谷氨酸棒杆菌可以用于诸如生物基有机酸、乙醇、二胺、多聚物以及其它高价值的蛋白等化学品、材料和燃料的生产，作为生物基细胞工厂生产人...
- 刘应保
- 关键词：谷氨酸棒杆菌生理功能
- 文献传递
- 淡色库蚊氯菊酯抗性相关基因XND-P450全长cDNA克隆及序列分析
- 蚊子是世界性分布的卫生害虫,能传播多种疾病,严重威胁着人们的生命健康。目前控制蚊子危害的主要手段是化学防治,在各类杀虫剂中,拟除虫菊酯类因高效低毒成为最常用的一种,但蚊虫已经对拟除虫菊酯类产生了很强的抗药性,使得蚊虫的防...
- 刘应保
- 关键词：淡色库蚊氯菊酯半定量RT-PCR
- 文献传递
- 增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB及其应用
- 本发明公开了增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。以及所述的增强型单体细菌荧光素酶基因luxAB作为生物发光报告基因的应用。本发明将luxA和luxB基因融合表达后形成的单体蛋白...
- 王瑶崔博宇沈锡辉宋云洪刘应保
- 根癌农杆菌Ⅵ型分泌系统关键组分ClpⅤ型ATPase基因表达及活性位点分析被引量：2
- 2011年
- 细菌Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS)是近年发现的一种分布广泛且与细菌致病性密切相关的新型分泌系统,ClpⅤ型ATPase是不同细菌T6SS中均含有的关键保守组分,据推测可能为底物蛋白的分泌提供动力,但对其生化功能尚未进行深入鉴定。在本研究中,我们克隆了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)C58中的ClpⅤ型ATPase基因atu4344并在大肠杆菌中表达,酶学检测证实了其ATPase活性,定点突变分析发现K232/608和E299/675突变体均丧失ATPase活性,表明Walker A模体和Walker B模体与其活性密切相关。这是首次对植物病原细菌T6SS中的ClpⅤ型ATPase进行生化鉴定和突变分析研究。
- 蔺晓丽徐胜娟刘应保郭建春王瑶
- 关键词：根癌农杆菌酶学活性
