刘志学 作品数:24 被引量:76 H指数:5 供职机构: 第二军医大学 更多>> 发文基金: 上海市科学技术发展基金 上海市高等教育学会课题 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 环境科学与工程 更多>>
N-Ras^(G12D)基因突变体真核表达载体的构建及其鉴定 2013年 通过PCR法扩增出N-Ras基因突变体片段,将酶切的片段克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP中。经测序正确后转染293T细胞系,利用重组质粒PCR及串联基因表达的检测等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定。结果证实所构建的N-RasG12D基因突变体逆转录病毒载体目的基因序列完全正确,并能够在293T细胞中能瞬时表达。重组真核质粒的构建及表达为深入研究N-ras突变在癌症发病中的作用奠定了基础。 汤球 余琛琳 赵善民 刘志学 孙伟 蔡丽萍 徐晨 崔淑芳关键词:N-RAS 突变体 真核表达 小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉效果观测 2012年 目的研究速眠新Ⅱ和戊巴比妥钠联合麻醉法对小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉效果,探讨小型猪腹壁拉链模型动物安全、可靠的麻醉方法。方法采用速眠新Ⅱ(0.1 ml/kg)肌内注射和3%戊巴比妥钠生理盐水溶液(0.2 ml/kg)静脉注射联合麻醉法对12只小型猪腹壁拉链模型动物进行麻醉,观察动物的基础生理指标、生物反射指标、镇静、镇痛和肌松效果以及麻醉维持时间。结果静脉注射麻醉后15 min内,所有小型猪腹壁拉链模型动物的眼睑反射、角膜反射和肛门反射均消失,进入良好的镇静、镇痛和肌松状态,并持续至75 min;诱导期为(6.22±0.84)min,麻醉期为(79.9±3.6)min,苏醒期为(66.1±3.7)min,提供了长达80 min的良好麻醉时间。结论肌内注射速眠新Ⅱ和静脉注射戊巴比妥钠联合麻醉法应用于小型猪腹壁拉链模型动物的麻醉,具有操作简便、镇静、镇痛、肌松效果好、用药量小、安全可靠等优点,是一种较为理想的麻醉方法。 余琛琳 刘志学 汤球 马雷 蔡丽萍 徐晨 崔淑芳关键词:麻醉 戊巴比妥 小型猪用生物拉链的生物相容性评价 2011年 目的:研究设计小型猪腹壁拉链动物模型用生物拉链,并检测、评价其生物相容性。方法:结合小型猪体型和生活习性特点、以及动物外科手术实验要求,设计生物拉链外形,并依据国家标准(GB/T 16886.10-2005/ISO 10993-10:2002),采用皮肤刺激性试验和皮肤致敏试验测定其生物相容性。结果:生物拉链具备操作简便、节省手术操作时间、减少创口感染等诸多优点,并成功获得国家知识产权专利(专利号:200920207646.1);皮肤刺激性试验未出现皮肤刺激反应;皮肤致敏试验未出现皮肤致敏反应。结论:生物拉链设计合理,具有良好的生物相容性,为小型猪腹壁拉链模型动物在教学、科研和临床中的推广应用奠定了良好的基础。 余琛琳 刘志学 马雷 蔡丽萍 徐晨 崔淑芳关键词:皮肤刺激 生物相容性 小型猪腹壁拉链动物模型应用于实验动物学教学中的体会 被引量:3 2010年 余琛琳 汤球 刘志学 崔淑芳关键词:实验动物学 传统教学 小型猪 腹壁 自主知识产权 专利号 大鼠半乳糖性白内障动物模型制备方法的改良及其机制 被引量:3 2010年 目的改良大鼠半乳糖性白内障动物模型制备方法 ,比较改良前后两种方法各自的特点及其机制。方法 60只体重(180±10)g的雄性成年SD大鼠随机分为空白对照组(C)、半乳糖性白内障组1(G1)和半乳糖性白内障组2(G2)。G1组腹腔注射50%半乳糖溶液20mL/(kg·d),连续30d;G2组第1周、第2周分别腹腔注射50%半乳糖溶液10、15mL/(kg·d),第3周开始增至20mL/(kg·d),直至第30d。应用裂隙灯观察晶体混浊情况,按大鼠晶状体混浊度评分标准进行分级和记录,并分别观察和比较不同制备方法的成模时间、模型成功率、模型死亡率和晶状体宏观形态变化以及SOD、MDA含量的变化。结果 G1和G2组模型死亡率分别为50%和10%,方法改良后死亡率显著降低;模型成功率分别为50%和90%,方法改良后成功率显著提高;两组模型晶状体混浊度一般为Ⅱ级或Ⅲ级;与C组比较,G1和G2组SOD、MDA含量的变化均有极显著差异(P﹤0.01),而G2与G1组比较,差异不显著。结论半乳糖性白内障动物模型制备方法改良后,保留了改良前模型制备方法的优点,克服了改良前模型成活率低、死亡率高的缺点,是一种更为安全、可靠的模型制备方法 。 余琛琳 蔡丽萍 徐晨 刘志学 崔淑芳关键词:半乳糖性白内障 人类疾病动物模型制备效果评价软件应用评测 被引量:10 2010年 目的开发一个评价常用人类疾病动物模型制备效果的管理软件。方法以Windows XP professional操作系统为开发平台,运用Microsoft Visual Basic6.0(中文版)计算机编程语言,按照人类疾病动物模型制备效果评价的要求研制开发常用人类疾病动物模型制备效果评价软件,并将软件推行试用。结果软件设计了模型管理、指标参数管理、评分参数管理、实验数据录入、实验计算管理和评价报告管理六大模块,具有简洁美观的界面,操作简易方便,用户试用体验后评价良好。结论本软件适用于常用人类疾病动物模型制备效果的评价管理。 余琛琳 刘志学 蔡丽萍 崔淑芳关键词:软件开发 普通级大动物实验室生物安全防护措施的建立 被引量:4 2010年 结合实践,阐明健全普通级大动物实验室生物安全防护措施的必要性,并从实验室布局与硬件配置、运行管理、卫生防疫、动物管理、人员管理与保护等多方面阐述确保生物安全的具体措施。 汤球 刘志学 蔡丽萍 江鹏亮关键词:生物安全防护 K-Ras^(G12D)基因突变体慢病毒载体的构建及其鉴定 被引量:1 2014年 目的:构建K-RasG12D基因突变体慢病毒载体。方法:从病人组织中提取RNA通过RT-PCR反转录获得cDNA作为K-RasG12D基因模板,通过PCR法扩增出K-RasG12D基因突变体片段。将酶切的片段克隆入真核表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-RFP中,构建K-RasG12D基因突变体逆转录病毒真核表达载体。将连接产物转化至感受态大肠埃希菌DH5α,挑取转化平板上的细菌克隆,在抗生素培养液中培养过夜后进行PCR鉴定。经测序正确后转染293T细胞系,利用重组质粒PCR及串联基因表达的检测等方法对目的基因的转录与表达进行分析与鉴定。结果:所构建的K-RasG12D突变体基因逆转录病毒真核表达载体经PCR鉴定和测序鉴定正确,转染293T细胞后可以观察到可检测到高强度表达的RFP荧光信号。结论:成功构建了重组真核表达载体,为下一步建立稳定转染细胞系及进一步研究K-Ras突变在癌症发病中的作用奠定了基础。 赵善民 汤球 刘志学 余琛琳 孙伟 蔡丽萍 袁子彦 徐晨 崔淑芳关键词:真核表达 小型猪腹壁拉链模型的建立 2011年 目的建立小型猪腹壁拉链模型并对其生物学特性进行研究,为教学和科研工作的开展提供便利的研究工具。方法通过外科手术的方法将定制的生物拉链固定于小型猪体表,建立小型猪腹壁拉链模型,观察小型猪的体征和精神状态,利用全自动血液分析仪及尿液分析仪对其血液和尿液生化指标进行动态检测。结果模型建立后7~49 d小型猪的活动、精神状态良好,其生理生化指标表现稳定,与对照相比无显著变化。结论本课题组建立的小型猪腹壁拉链模型建立后7~49 d体征、精神状况良好,生理生化指标稳定,可以推广应用于相关的科研、教学试验。 马雷 汤球 刘志学 余琛琳 崔淑芳关键词:小型猪 一种用于实验动物腹腔手术的腹壁拉链 本实用新型涉及医用实验器材技术领域,是一种实验动物腹腔手术用腹壁拉链,由拉链(1)和拉链固定翼(2)组成,还可包括固定拉环(3)。拉链(1)由左右拉链片(11)和拉锁(12)组成,通过拉锁将左右拉链片闭合或打开,左右拉链... 崔淑芳 余琛琳 刘志学 汤球 蔡丽萍 江鹏亮 孙伟 袁卫 徐晨 马雷文献传递