刘楠
- 作品数：11 被引量：67H指数：6
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 具有α-淀粉酶分泌活性以及低双乙酰产量的啤酒酵母工程菌的构建被引量：4
- 2008年
- 扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)因具有较强的α-淀粉酶以及葡聚糖酶活性,使其在以淀粉为唯一碳源的培养基上能够良好的生长。从其基因组中克隆了α-淀粉酶的编码区,构建了由酵母磷酸甘油酸激酶基因(PGK1)启动子、酿酒酵母α-因子信号序列以及扣囊复膜酵母α-淀粉酶基因编码序列组成的基因表达盒。将该表达盒插入到质粒pPLZ-2的ILV2基因序列内部,使其两翼具有ILV2基因的同源区。将该表达盒通过同源重组的方式整合到啤酒酵母工业菌株YSF-5的α-乙酰乳酸合成酶(AHAS)基因ILV2内部。在以淀粉为唯一碳源的培养基上进行转化子的筛选。通过多对引物PCR、α-淀粉酶活性以及AHAS活性分析对转化子进行鉴定,得到一株具有α-淀粉酶分泌表达活性、较低AHAS活性,并且发酵液中双乙酰产量也相对较低的啤酒酵母工程菌。该菌株在非选择压力条件下连续培养50代后仍然保持其遗传稳定性。还对pH、温度以及金属离子对该转化菌株的α-淀粉酶活性的影响进行了研究。由于所构建的菌株不含有非酵母来源的DNA,所以生物安全性相对较高,对酵母育种以及啤酒生产工业都具有较为重要的意义。
- 张峰王肇悦刘楠何秀萍张博润
- 关键词：Α-淀粉酶双乙酰
- 低双乙酰抗老化啤酒酵母工程菌的构建被引量：29
- 2005年
- 用来源于啤酒酵母的γ_谷氨酰半胱氨酸合成酶基因(GSH1)和铜抗性基因(CUP1)取代质粒pLZ_2中α_乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)内部约2.3kb的DNA片段,构建成重组质粒pICG。限制酶酶切质粒pICG后获得在基因GSH1和CUP1两端含有ILV2序列的6.0kb的DNA片段。用此片段转化啤酒酵母YSF31,得到铜抗性高的转化子。并通过PCR和α_乙酰乳酸合成酶(AHAS)活性测定筛选到酵母工程菌。小试实验结果表明酵母工程菌谷胱甘肽含量比受体高34%,而双乙酰含量是受体的75%。其他发酵指标并没有发生改变。中试实验表明酵母工程菌发酵周期缩短3d,而且成品啤酒的保鲜时间延长50%。由于DNA操作过程中没有外源基因介入,因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株,具有重要的实际应用价值。
- 张吉娜何秀萍郭雪娜刘楠张博润
- 关键词：酿酒酵母谷胱甘肽双乙酰工程菌
- 纯生啤酒泡沫稳定性的影响因素及改善策略被引量：8
- 2006年
- 简要介绍了纯生啤酒泡沫稳定性的主要影响因素———泡沫阳性蛋白和酵母蛋白酶A对啤酒泡沫的影响及影响机理,并简要介绍了改善纯生啤酒泡沫的主要策略。
- 王肇悦何秀萍刘楠张博润
- 关键词：纯生啤酒蛋白酶A基因敲除
- 工业酵母菌育种概括及其应用前景
- 张博润何秀萍刘楠郭雪娜
- 甾醇C-22去饱和酶高表达对酵母细胞麦角甾醇合成的影响被引量：10
- 2007年
- 通过PCR扩增克隆到酵母菌甾醇C-22去饱和酶基因(ERG5)的编码序列及其终止子序列,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pYPE5。以铜离子螯合蛋白基因CUP1替换ERG5基因内部序列获得ERG5破坏菌株YSE5,其中麦角甾醇的合成被阻断,而积累了甾醇中间体Ergosta-5,7-dien-3β-ol。表达质粒pYPE5转化破坏菌株后使细胞恢复了合成麦角甾醇的能力。说明表达质粒上的ERG5基因得到了功能性的表达。将表达质粒pYPE5转化酿酒酵母单倍体菌株YS58,通过营养缺陷互补筛选到重组菌株YS58(pYPE5)。对重组菌株、破坏菌株和互补菌株细胞甾醇组分和含量进行测定,发现重组菌株和互补菌株的麦角甾醇和总甾醇含量明显低于对照菌YS58(YEp352)。测定不同培养时间细胞的麦角甾醇含量,发现重组菌株的麦角甾醇含量始终低于对照菌YS58(YEp352)。可见,ERG5在酵母中的高表达导致细胞麦角甾醇含量降低。
- 蔡鹏丽何秀萍刘楠张博润
- 关键词：酿酒酵母麦角甾醇
- 一种啤酒酵母工程菌及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种啤酒酵母工程菌及其制备方法与应用。该啤酒酵母工程菌，是将酿酒酵母中的PEP4基因破坏，并导入酿酒酵母的谷胱甘肽合成酶基因，得到的不产生蛋白酶A且谷胱甘肽产量比所述酿酒酵母高的菌株。所述啤酒酵母工程菌优选为...
- 张博润王肇悦何秀萍刘楠傅秀辉
- 文献传递
- 高SO_2产量啤酒酵母工业菌株的构建被引量：6
- 2006年
- 二氧化硫在啤酒中具有抗氧化的重要功能,而在其形成过程中APS激酶(MET14编码)起着非常重要的作用。以二氧化硫产量较高的青岛啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YSF-5的总DNA为模板,用PCR方法克隆得到MET14基因。为使目的基因在酿酒酵母中表达,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以PGK1强启动子为调控元件,构建了重组表达质粒pPM,并转化酿酒酵母YS58。转化子在YNB添加亮氨酸、组氨酸和色氨酸的选择性培养基上筛选鉴定,盐酸副玫瑰苯胺法测得转化子的SO2产量是受体菌的2倍左右。在重组表达质粒pPM的基础上添加铜抗性标记基因构建了重组表达质粒pCPM,并转化青岛啤酒工业酵母菌株YSF-38,转化子在YEPD+4mmol/L CuSO4的选择性培养基上筛选鉴定,实验室条件下培养后,测得转化子YSF-38(pCPM)的SO2产量是受体菌的3.2倍。用该转化子在青岛啤酒厂进行小型发酵实验,结果表明在发酵结束时,YSF-38(pCPM)转化子的SO2产量是受体菌的1.4倍。因此,MET14基因的有效表达可以提高啤酒工业酵母的SO2产量。
- 曲娜何秀萍郭雪娜刘楠张博润
- 关键词：酿酒酵母
- 酵母新絮凝特性的研究进展及应用展望被引量：8
- 2007年
- 酵母絮凝是指酵母细胞之间相互作用形成絮状物的可逆过程。在发酵工业中,絮凝是酵母菌株最重要性质之一。酵母无性絮凝分为Flo型和NewFlo型,在发酵后期表达的NewFlo型絮凝对细胞与发酵液的分离及产品的质量有重要的意义。文中对酵母新絮凝的研究进展进行了综述,并展望了新絮凝特性在工业中的应用前景。
- 刘楠王冬立何秀萍张博润
- 关键词：酵母遗传学
- 一种啤酒酵母工程菌及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种啤酒酵母工程菌及其制备方法与应用。该啤酒酵母工程菌，是将酿酒酵母中的PEP4基因破坏，并导入酿酒酵母的谷胱甘肽合成酶基因，得到的不产生蛋白酶A且谷胱甘肽产量比所述酿酒酵母高的菌株。所述啤酒酵母工程菌优选为...
- 张博润王肇悦何秀萍刘楠傅秀辉
- 文献传递
- 甾醇C-24甲基转移酶基因在酿酒酵母中的内源表达及工程菌麦角甾醇的合成被引量：8
- 2008年
- 通过高保真PCR克隆到含酿酒酵母甾醇C-24甲基转移酶基因编码序列及终止子序列的DNA片段ERG6,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pPERG6。通过同源重组,以铜离子螯合蛋白基因CUP1替换染色体上ERG6基因内部序列获得ERG6破坏菌株YS58-erg6,其中麦角甾醇的合成被阻断,同时细胞的生长也受到明显抑制。表达质粒pPERG6转化破坏菌株YS58-erg6后,不但使细胞恢复了合成麦角甾醇的能力,细胞生物量也得到明显提高,这说明表达质粒上的ERG6基因得到了功能性的表达。分别用载体质粒YEp352和表达质粒pPERG6转化酿酒酵母单倍体菌株YS58,获得对照菌株YS58(YEp352)和重组菌株YS58(pPERG6)。重组菌株YS58(pPERG6)生物量和麦角甾醇含量分别是对照菌YS58(YEp352)的1.23和1.32倍。可见甾醇C-24甲基转移酶基因的高表达可以增强酵母细胞麦角甾醇的合成能力。
- 孟云霞何秀萍刘楠郭雪娜张博润
- 关键词：酿酒酵母麦角甾醇
